Name: collection protocol for human pancreas
Uploaded: 2012-05-23T12:00:00
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Les auteurs tiennent à remercier les familles des donneurs et des d&#39;approvisionnement en organes impliqués dans cette recherche et Maria Martino et Irina Kusmartseva pour leur aide d&#39;experts. Ce travail a été financé par la Juvenile Diabetes Research Foundation (MC-T., MA) à l&#39;appui du Réseau des donneurs d&#39;organes atteints de diabète pancréatique.

1. Mise en place <ol><li> Cassettes d&#39;étiquettes pour des blocs de paraffine manuellement avec un crayon, ou automatiquement avec une imprimante à cassette. Inclure l&#39;identificateur du donneur (CASEID), type d&#39;échantillon, le nombre aliquote, et toute autre identification unique (feuille de calcul de cas, <a href="http://jove.com/files/ftp_upload/4039/4039appendix1.doc" target="_blank">l&#39;annexe 1</a> ). </li><li> Étiquettes moules PTOM comme pour les cassettes avec un marqueur permanent. Découpez ...

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	<li>Brissova, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+human+pancreatic+islet+architecture+and+composition+by+laser+scanning+confocal+microscopy.">Assessment of human pancreatic islet architecture and composition by laser scanning confocal microscopy.</a> J. Histochem. Cytochem. 53, 1087-1097 (2005).</li><li>Rahier, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pancreatic+polypeptide+cells+in+the+human+pancreas:+the+effects+of+age+and+diabetes.">The pancreatic polypeptide cells in the human pancreas: the effects of age and diabetes.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 56, 441-444 (1983).</li><li>Uchida, T., Takada, T., Ammori, B. J., Suda, K., Takahashi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+reconstruction+of+the+ventral+and+dorsal+pancreas:+a+new+insight+into+anatomy+and+embryonic+development.">Three-dimensional reconstruction of the ventral and dorsal pancreas: a new insight into anatomy and embryonic development.</a> J. Hepatobiliary Pancreat. Surg. 6, 176-180 (1999).</li><li>Wittingen, J., Frey, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+concentration+in+the+head,+body,+tail+and+uncinate+process+of+the+pancreas.">Islet concentration in the head, body, tail and uncinate process of the pancreas.</a> Ann. Surg. 179, 412-414 (1974).</li><li>Rahier, J., Goebbels, R., Henquin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+composition+of+the+human+diabetic+pancreas.">Cellular composition of the human diabetic pancreas.</a> Diabetologia. 24, 366-371 (1983).</li><li>Vaught, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+NCI+perspective+on+creating+sustainable+biospecimen+resources.">An NCI perspective on creating sustainable biospecimen resources.</a> J. Natl. Cancer Inst. Monogr. 42, 1-7 (2011).</li><li>Gianani, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initial+results+of+screening+of+nondiabetic+organ+donors+for+expression+of+islet+autoantibodies.">Initial results of screening of nondiabetic organ donors for expression of islet autoantibodies.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 91, 1855-1861 (2006).</li><li>Tauriainen, S., Salmela, K., Rantala, I., Knip, M., Hy&#246;ty, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collecting+high-quality+pancreatic+tissue+for+experimental+study+from+organ+donors+with+signs+of+&#946;-cell+autoimmunity.">Collecting high-quality pancreatic tissue for experimental study from organ donors with signs of &#946;-cell autoimmunity.</a> Diabetes Metab. Res. Rev. 26, 585-592 (2010).</li><li>In't Veld, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+for+insulitis+in+adult+autoantibody-positive+organ+donors.">Screening for insulitis in adult autoantibody-positive organ donors.</a> Diabetes. 56, 2400-2404 (2007).</li><li>T&#246;ns, H. A., Terpstra, O. T., Bouwman, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneity+of+human+pancreata+in+perspective+of+the+isolation+of+the+islets+of+langerhans.">Heterogeneity of human pancreata in perspective of the isolation of the islets of langerhans.</a> Transplant Proc. 40, 367-369 (2008).</li></ol>

L&#39;objectif de cette procédure est de définir un traitement pancréas standard qui peut être harmonisé à travers les sites de collecte multiples et permettre ainsi la comparaison des résultats obtenus par les différents groupes. La méthode de dissection est basé sur le standard chirurgicales pratiques de pathologie avec des mesures supplémentaires pour l&#39;annotation des régions importantes du pancréas suivi par voie intra-régionaux subdivisions. Normalisation des méthodes de traitement des échantill...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom du réactif </td><td> Entreprise </td><td> Numéro de catalogue </td><td> Commentaires </td></tr><tr><td> Instruments de dissection, y compris bistouris à lames 22 </td><td> Divers </td><td> Divers </td><td></td></tr><tr><td> Tubes à centrifuger (15 et 50 ml) </td><td> Fisher Scientific </td><td> 05-539-5, 430828 </td><td> Stérile </td></tr><tr><td> Cryotubes (1,8 ml) </td><td> VWR en Amérique du Nord </td><td> 89004-300 </td><td> Stériles des codes à barres, en option </td></tr><tr><td> RNAlater </td><td> Ambion </td><td> AM7021 </td><td></td></tr><tr><td> Chirurgicale d&#39;encre pathologie </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Cassettes </td><td> Mercedes médicale </td><td> CAS ECO109 </td><td></td></tr><tr><td> 10% formol neutre tamponné </td><td> Fisher Scientific </td><td> 23-245-685 </td><td></td></tr><tr><td> Milieux de congélation OCT </td><td> TissueTek </td><td> 4583 </td><td></td></tr><tr><td> Moules </td><td> ThermoScientific </td><td> 58952 </td><td> Différentes tailles </td></tr><tr><td> Isopentane </td><td> Fisher Scientific </td><td> O3551-4 </td><td> Octobre bain froid </td></tr><tr><td> La glace sèche </td><td></td><td></td><td> Octobre bain froid </td></tr><tr><td> L&#39;azote liquide dans un flacon de Dewar </td><td></td><td></td><td> Enclenchez cryotubes de congélation </td></tr><tr><td> Boîte de culture cellulaire (100mm) </td><td> Corning </td><td> 430167 </td><td> Stérile </td></tr><tr><td> Hyclone DMEF </td><td> ThermoScientific </td><td> SH30023.01 </td><td> Stérile, conserver au réfrigérateur, de la glutamine inclus </td></tr><tr> &lt;td&gt; Sérum fœtal bovin </td><td> Cellgro </td><td> 35-010-CV </td><td> Stériles, entreposer des portions congelées </td></tr><tr><td> Pénicilline / streptomycine / antifongique </td><td> GIBCO </td><td> 15240-062 </td><td> Stériles, entreposer des portions congelées </td></tr><tr><td> Tapez 9 paraffine </td><td> Richard-Allan scientifique </td><td> 8337 </td><td></td></tr><tr><td> 1X D-PBS </td><td> GIBCO </td><td> 14190-144 </td><td> Stérile </td></tr><tr><td> Paraformaldéhyde 16% </td><td> EM Sciences </td><td> 15710 </td><td> Assurez-frais, réfrigéré magasin </td></tr><tr><td> Glutaraldéhyde 8% </td><td> EM Sciences </td><td> 16019 </td><td> Assurez-frais, réfrigéré magasin </td></tr><tr><td> Prévention des risques biotechnologiques Niveau 2 hotte </td><td> Divers </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Ultra-faible congélateur </td><td> Divers </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Imprimante cassette Sakura </td><td> Sakura </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Sakura VIP300 </td><td> Sakura </td><td></td><td> Processeur de paraffine automatique </td></tr><tr><td> Gare inclusion dans la paraffine </td><td> ThermoFisher </td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Tableau 1. Réactifs et équipements spécifiques.

collection protocol for human pancreas

Cette dissection et la procédure d&#39;échantillonnage a été développé pour le réseau de donneurs d&#39;organes pancréatiques avec diabète (nPOD) programme visant à normaliser la préparation du pancréas récupéré de donneurs d&#39;organes cadavériques. Le pancréas est divisé en 3 régions principales (tête, corps, queue), suivis par série des coupes transversales à travers le dedans de l&#39;axe latéral. Sections alternées sont utilisées pour la paraffine fixe et frais blocs congelés et des échantillons restantes sont hachées pour la préparation des échantillons congelés pression, avec ou sans inhibiteurs de RNAse, de l&#39;ADN, l&#39;ARN, ou l&#39;isolement des protéines. L&#39;objectif global de la procédure de dissection du pancréas est d&#39;échantillonner le pancréas entier, tout en conservant l&#39;orientation anatomique. L&#39;hétérogénéité des cellules endocrines en termes de composition des îlots, la taille et le nombre est indiqué pour des îlots humains par rapport à 1 îlots de rongeurs. La majorité des îlots humains à partir de la tête du pancréas, les régions du corps et la queue sont composées de l&#39;insuline-containing les cellules ß suivie par de plus faibles proportions de glucagon contenant les alpha-cellules et la somatostatine contenant ô-cellules. Le polypeptide pancréatique des cellules contenant PP et les cellules epsilon ghréline contenant sont également présents mais en petit nombre. En revanche, la région unciforme contient îlots qui sont principalement composées de cellules pancréatiques PP polypeptide contenant 2. Ces variations régionales des îlots de Langerhans proviennent des différences de développement. Le pancréas se développe à partir des bourgeons pancréatiques ventrale et dorsale de l&#39;intestin antérieur et après la rotation de l&#39;estomac et du duodénum, ​​les lobes se déplace ventrales et fusibles avec la 3 dorsale. Le lobe ventrale forme la partie postérieure de la tête y compris le processus unciforme tandis que le lobe dorsale donne lieu à la suite de l&#39;organe. La variation du pancréas régional est également signalé à la région de la queue ayant une densité plus élevée par rapport à l&#39;îlot d&#39;autres régions et les dorsales du lobe dérivés composants qui subissent une atrophie sélective diabète de type 1 <sjusqu&#39;à&gt; 4,5. Organes et de tissus supplémentaires sont souvent récupérés par les donneurs d&#39;organes et incluent des ganglions lymphatiques du pancréas, la rate et les ganglions lymphatiques non-pancréatiques. Ces échantillons sont récupérés avec des formats similaires à ceux de l&#39;pancréas avec l&#39;addition d&#39;isolement de cellules cryoconservées. Lorsque le duodénum proximal est inclus avec le pancréas, la muqueuse duodénale peuvent être collectées pour des blocs de paraffine et congelées et préparations pression hachés surgelés.

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Collection Protocol for Human Pancreas

Cette vidéo montre une procédure pour le traitement de la dissection pancréas humain dans des formats multiples de stockage. L&#39;orientation anatomique est maintenu dans toutes les régions du pancréas pour permettre la définition de la composition et la densité de l&#39;îlot régionale.

Protocole de collecte des pancréas humain

This dissection and sampling procedure was developed for the Network for Pancreatic Organ Donors with Diabetes (nPOD) program to standardize preparation ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Improved Protocol For Laser Microdissection Of Human Pancreatic Islets From Surgical Specimens

Protocole amélioré pour la microdissection laser d&#39;îlots pancréatiques humains à partir de spécimens chirurgicaux

Laser microdissection (LMD) is a technique that allows the recovery of selected cells and tissues from minute amounts of parenchyma 1,2. The dissected ...

Recherche

Médecine

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