Name: collection protocol for human pancreas
Uploaded: 2012-05-23T12:00:00
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Gli autori ringraziano le famiglie dei donatori e le Organizzazioni Organ Procurement coinvolti in questa ricerca e di Maria Martino e Irina Kusmartseva per la loro assistenza di un esperto. Questo lavoro è stato finanziato dalla Juvenile Diabetes Research Foundation (MC-T., MA) a sostegno della rete per i donatori di organi del pancreas con diabete.

1. Set-up <ol><li> Cassette etichette per i blocchi di paraffina manualmente con una matita, o automaticamente con una stampante cassette. Includere l&#39;identificatore donatore (CaseID), tipo di campione, il numero di aliquote, e qualsiasi ulteriore identificazione univoco (foglio di lavoro Case, <a href="http://jove.com/files/ftp_upload/4039/4039appendix1.doc" target="_blank">appendice 1</a> ). </li><li> Label stampi PTOM come per cassette con un pennarello indelebile. Ritagliare rettangoli di cm 5-10 di fogli di a...

<ol>
	<li>Brissova, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+human+pancreatic+islet+architecture+and+composition+by+laser+scanning+confocal+microscopy.">Assessment of human pancreatic islet architecture and composition by laser scanning confocal microscopy.</a> J. Histochem. Cytochem. 53, 1087-1097 (2005).</li><li>Rahier, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pancreatic+polypeptide+cells+in+the+human+pancreas:+the+effects+of+age+and+diabetes.">The pancreatic polypeptide cells in the human pancreas: the effects of age and diabetes.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 56, 441-444 (1983).</li><li>Uchida, T., Takada, T., Ammori, B. J., Suda, K., Takahashi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+reconstruction+of+the+ventral+and+dorsal+pancreas:+a+new+insight+into+anatomy+and+embryonic+development.">Three-dimensional reconstruction of the ventral and dorsal pancreas: a new insight into anatomy and embryonic development.</a> J. Hepatobiliary Pancreat. Surg. 6, 176-180 (1999).</li><li>Wittingen, J., Frey, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+concentration+in+the+head,+body,+tail+and+uncinate+process+of+the+pancreas.">Islet concentration in the head, body, tail and uncinate process of the pancreas.</a> Ann. Surg. 179, 412-414 (1974).</li><li>Rahier, J., Goebbels, R., Henquin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+composition+of+the+human+diabetic+pancreas.">Cellular composition of the human diabetic pancreas.</a> Diabetologia. 24, 366-371 (1983).</li><li>Vaught, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+NCI+perspective+on+creating+sustainable+biospecimen+resources.">An NCI perspective on creating sustainable biospecimen resources.</a> J. Natl. Cancer Inst. Monogr. 42, 1-7 (2011).</li><li>Gianani, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initial+results+of+screening+of+nondiabetic+organ+donors+for+expression+of+islet+autoantibodies.">Initial results of screening of nondiabetic organ donors for expression of islet autoantibodies.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 91, 1855-1861 (2006).</li><li>Tauriainen, S., Salmela, K., Rantala, I., Knip, M., Hy&#246;ty, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collecting+high-quality+pancreatic+tissue+for+experimental+study+from+organ+donors+with+signs+of+&#946;-cell+autoimmunity.">Collecting high-quality pancreatic tissue for experimental study from organ donors with signs of &#946;-cell autoimmunity.</a> Diabetes Metab. Res. Rev. 26, 585-592 (2010).</li><li>In't Veld, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+for+insulitis+in+adult+autoantibody-positive+organ+donors.">Screening for insulitis in adult autoantibody-positive organ donors.</a> Diabetes. 56, 2400-2404 (2007).</li><li>T&#246;ns, H. A., Terpstra, O. T., Bouwman, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneity+of+human+pancreata+in+perspective+of+the+isolation+of+the+islets+of+langerhans.">Heterogeneity of human pancreata in perspective of the isolation of the islets of langerhans.</a> Transplant Proc. 40, 367-369 (2008).</li></ol>

L&#39;obiettivo di questa procedura è quello di definire uno standard di trattamento del pancreas che può essere armonizzato in tutta siti di raccolta multiple e consentire in tal modo il confronto dei risultati ottenuti con diversi gruppi. Il metodo di dissezione è basata su standard, pratiche di Patologia Chirurgica, con ulteriori passaggi per l&#39;annotazione delle regioni più importanti del pancreas seguita da intra-regionali suddivisioni. Standardizzazione dei metodi di trasformazione biospecimen è necessario...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome del reattivo </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td><td> Comments </td></tr><tr><td> Strumenti di dissezione, inclusi bisturi con 22 lame </td><td> Vario </td><td> Vario </td><td></td></tr><tr><td> Provette (15 e 50 ml) </td><td> Fisher Scientific </td><td> 05-539-5, 430.828 </td><td> Sterile </td></tr><tr><td> Criotubi (1,8 ml) </td><td> VWR Nord America </td><td> 89004-300 </td><td> Sterili, codici a barre opzionale </td></tr><tr><td> RNAlater </td><td> Ambion </td><td> AM7021 </td><td></td></tr><tr><td> Patologia Chirurgica Ink </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Cassette </td><td> Mercedes Medical </td><td> CAS ECO109 </td><td></td></tr><tr><td> 10% formalina tamponata neutra </td><td> Fisher Scientific </td><td> 23-245-685 </td><td></td></tr><tr><td> PTOM congelamento media </td><td> TissueTek </td><td> 4583 </td><td></td></tr><tr><td> Stampi </td><td> ThermoScientific </td><td> 58952 </td><td> Varie dimensioni </td></tr><tr><td> Isopentano </td><td> Fisher Scientific </td><td> O3551-4 </td><td> Ottobre bagno agghiacciante </td></tr><tr><td> Il ghiaccio secco </td><td></td><td></td><td> Ottobre bagno agghiacciante </td></tr><tr><td> L&#39;azoto liquido in vaso Dewar </td><td></td><td></td><td> Snap cryovials congelamento </td></tr><tr><td> Piatto di coltura cellulare (100mm) </td><td> Corning </td><td> 430167 </td><td> Sterile </td></tr><tr><td> Hyclone DMEF </td><td> ThermoScientific </td><td> SH30023.01 </td><td> Sterile, conservare in frigorifero, glutammina inclusa </td></tr><tr> &lt;td&gt; siero fetale bovino </td><td> Cellgro </td><td> 35-010-CV </td><td> Sterili, aliquote congelare </td></tr><tr><td> Penicillina / streptomicina / antifungina </td><td> GIBCO </td><td> 15240-062 </td><td> Sterili, aliquote congelare </td></tr><tr><td> Tipo 9 paraffina </td><td> Richard-Allan Scientific </td><td> 8337 </td><td></td></tr><tr><td> 1X D-PBS </td><td> GIBCO </td><td> 14190-144 </td><td> Sterile </td></tr><tr><td> 16% paraformaldeide </td><td> EM Scienze </td><td> 15710 </td><td> Fai fresco, refrigerato negozio </td></tr><tr><td> 8% glutaraldeide </td><td> EM Scienze </td><td> 16019 </td><td> Fai fresco, refrigerato negozio </td></tr><tr><td> Livello di biosicurezza 2 cappuccio </td><td> Vario </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Ultra-low freezer </td><td> Vario </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Cassette stampante Sakura </td><td> Sakura </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Sakura VIP300 </td><td> Sakura </td><td></td><td> Paraffina elaboratore automatico </td></tr><tr><td> Paraffina Embedding Stazione </td><td> ThermoFisher </td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Tabella 1. Reagenti e attrezzature specifiche.

collection protocol for human pancreas

La dissezione e procedura di campionamento è stato sviluppato per la Rete per i donatori di organi del pancreas con diabete (nPOD) programma di standardizzare la preparazione del pancreas recuperati da donatori di organi da cadavere. Il pancreas è diviso in 3 regioni principali (testa, corpo, coda) seguiti da sezioni trasversali seriali in tutto il mediale all&#39;asse laterale. Sezioni alternate sono utilizzati per paraffina fisso e blocchi congelati freschi e campioni rimanenti vengono macinate per moschettoni preparati campioni congelati, con o senza RNasi inibitori, per DNA, RNA, o isolamento delle proteine. L&#39;obiettivo generale della procedura di dissezione pancreas è quello di campionare l&#39;intero pancreas, pur mantenendo l&#39;orientamento anatomico. Eterogeneità delle cellule endocrine in termini di composizione delle isole, le dimensioni e il numero è riportato per isole umane rispetto alle isole roditori 1. La maggior parte delle isole pancreatiche dalla testa pancreas, regioni di body e di coda sono costituiti da insulino-containing cellule beta seguita da minori proporzioni di glucagone contenenti a-cellule e somatostatina-contenenti delta-cellule. Polipeptide pancreatico contenenti cellule PP e grelina contenenti cellule epsilon sono presenti, ma in piccole quantità. Al contrario, la regione uncinato contiene isolotti che sono principalmente composti di polipeptide pancreatico cellule contenenti PP 2. Queste variazioni isole regionali derivano dalle differenze di sviluppo. Il pancreas sviluppa dai germogli pancreatiche ventrale e dorsale del foregut e dopo la rotazione dello stomaco e del duodeno, si muove lobo ventrale e si fondono con la dorsale 3. Il lobo ventrale costituisce la parte posteriore della testa compreso il processo uncinato mentre il lobo dorsale dà luogo al resto dell&#39;organo. Variazione del pancreas regionale è riportato anche con la regione della coda avente una densità isolotto superiore rispetto ad altre regioni e le dorsali del lobo componenti derivati ​​dalla fase di atrofia selettiva nel diabete tipo 1 <sup&gt; 4,5. Altri organi e tessuti sono spesso recuperato dai donatori di organi e includono i linfonodi, della milza e pancreas non-pancreatiche linfonodi. Questi campioni sono recuperati con formati analoghi a quelli per il pancreas con l&#39;aggiunta di isolamento di cellule crioconservate. Quando il duodeno prossimale è incluso con il pancreas, mucosa duodenale possono essere raccolti per i blocchi di paraffina e congelati e preparati a scatto tritati surgelati.

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Collection Protocol for Human Pancreas

Questo video mostra una procedura di dissezione per l&#39;elaborazione di pancreas umano in diversi formati di memorizzazione. Orientamento anatomico viene mantenuta in tutte le regioni del pancreas per consentire la definizione della composizione delle isole regionale e la densità.

Protocollo di raccolta per pancreas umano

This dissection and sampling procedure was developed for the Network for Pancreatic Organ Donors with Diabetes (nPOD) program to standardize preparation ...

Research

JoVE Journal

Medicine

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Medicina

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