Name: collection protocol for human pancreas
Uploaded: 2012-05-23T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Collection Protocol for Human Pancreas at JoVE.com

Forfatterne takker givernes familiene og orgelet innkjøpsorganisasjoner involvert i denne forskningen og Maria Martino og Irina Kusmartseva for sin eksperthjelp. Dette arbeidet ble finansiert av Juvenile Diabetes Research Foundation (MC-T., MA) i støtte av Nettverk for Bukspyttkjertelen organdonorer med diabetes.

1. Sett opp <ol><li> Tapekassetter for parafin blokker manuelt med en blyant, eller automatisk med en kassett skriver. Inkluder donor identifikator (CaseID), prøvetype, alikvoter nummer, og noen ekstra unik identifikasjon (sak regneark, <a href="http://jove.com/files/ftp_upload/4039/4039appendix1.doc" target="_blank">bilag 1</a> ). </li><li> Etiketten OCT former som for kassetter med en permanent markør. Klipp ut 5-10 cm biter av aluminiumsfolie. </li><li> Skriv ut eller manuelt etikett med permanent markør alle he...

<ol>
	<li>Brissova, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+human+pancreatic+islet+architecture+and+composition+by+laser+scanning+confocal+microscopy.">Assessment of human pancreatic islet architecture and composition by laser scanning confocal microscopy.</a> J. Histochem. Cytochem. 53, 1087-1097 (2005).</li><li>Rahier, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pancreatic+polypeptide+cells+in+the+human+pancreas:+the+effects+of+age+and+diabetes.">The pancreatic polypeptide cells in the human pancreas: the effects of age and diabetes.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 56, 441-444 (1983).</li><li>Uchida, T., Takada, T., Ammori, B. J., Suda, K., Takahashi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+reconstruction+of+the+ventral+and+dorsal+pancreas:+a+new+insight+into+anatomy+and+embryonic+development.">Three-dimensional reconstruction of the ventral and dorsal pancreas: a new insight into anatomy and embryonic development.</a> J. Hepatobiliary Pancreat. Surg. 6, 176-180 (1999).</li><li>Wittingen, J., Frey, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+concentration+in+the+head,+body,+tail+and+uncinate+process+of+the+pancreas.">Islet concentration in the head, body, tail and uncinate process of the pancreas.</a> Ann. Surg. 179, 412-414 (1974).</li><li>Rahier, J., Goebbels, R., Henquin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+composition+of+the+human+diabetic+pancreas.">Cellular composition of the human diabetic pancreas.</a> Diabetologia. 24, 366-371 (1983).</li><li>Vaught, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+NCI+perspective+on+creating+sustainable+biospecimen+resources.">An NCI perspective on creating sustainable biospecimen resources.</a> J. Natl. Cancer Inst. Monogr. 42, 1-7 (2011).</li><li>Gianani, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initial+results+of+screening+of+nondiabetic+organ+donors+for+expression+of+islet+autoantibodies.">Initial results of screening of nondiabetic organ donors for expression of islet autoantibodies.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 91, 1855-1861 (2006).</li><li>Tauriainen, S., Salmela, K., Rantala, I., Knip, M., Hy&#246;ty, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collecting+high-quality+pancreatic+tissue+for+experimental+study+from+organ+donors+with+signs+of+&#946;-cell+autoimmunity.">Collecting high-quality pancreatic tissue for experimental study from organ donors with signs of &#946;-cell autoimmunity.</a> Diabetes Metab. Res. Rev. 26, 585-592 (2010).</li><li>In't Veld, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+for+insulitis+in+adult+autoantibody-positive+organ+donors.">Screening for insulitis in adult autoantibody-positive organ donors.</a> Diabetes. 56, 2400-2404 (2007).</li><li>T&#246;ns, H. A., Terpstra, O. T., Bouwman, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneity+of+human+pancreata+in+perspective+of+the+isolation+of+the+islets+of+langerhans.">Heterogeneity of human pancreata in perspective of the isolation of the islets of langerhans.</a> Transplant Proc. 40, 367-369 (2008).</li></ol>

Målet med denne prosedyren er å definere en standard bukspyttkjertelen behandling som kan være harmonisert på tvers av flere innsamlingssteder og dermed tillate sammenligninger av resultater oppnådd av forskjellige grupper. Den disseksjon Metoden er basert på standard kirurgiske patologi praksis med flere trinn for annotering av store bukspyttkjertel regioner etterfulgt av intra-regionale underavdelinger. Standardisering av biospecimen bearbeidingsmetoder kreves for å lette innsamling av høy kvalitet prøver eks...

<table border="1"><tbody><tr><td> Navn på reagensen </td><td> Firma </td><td> Katalognummer </td><td> Kommentarer </td></tr><tr><td> Disseksjon instrumenter inkludert skalpeller med 22 blad </td><td> Various </td><td> Various </td><td></td></tr><tr><td> Sentrifugerør (15 og 50 ml) </td><td> Fisher Scientific </td><td> 05-539-5, 430828 </td><td> Steril </td></tr><tr><td> Cryotubes (1,8 ml) </td><td> VWR Nord-Amerika </td><td> 89004-300 </td><td> Sterile strekkoder valgfrie </td></tr><tr><td> RNAlater </td><td> Ambion </td><td> AM7021 </td><td></td></tr><tr><td> Kirurgisk Pathology Ink </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Kassetter </td><td> Mercedes Medisinsk </td><td> CAS ECO109 </td><td></td></tr><tr><td> 10% nøytralt bufret Formalin </td><td> Fisher Scientific </td><td> 23-245-685 </td><td></td></tr><tr><td> OCT Frysing Media </td><td> TissueTek </td><td> 4583 </td><td></td></tr><tr><td> Molds </td><td> ThermoScientific </td><td> 58952 </td><td> Ulike størrelser </td></tr><tr><td> Isopentan </td><td> Fisher Scientific </td><td> O3551-4 </td><td> Oktober chilling bad </td></tr><tr><td> Tørris </td><td></td><td></td><td> Oktober chilling bad </td></tr><tr><td> Flytende nitrogen i Dewar kolbe </td><td></td><td></td><td> Snap frysing cryovials </td></tr><tr><td> Cellekultur fatet (100mm) </td><td> Corning </td><td> 430167 </td><td> Steril </td></tr><tr><td> Hyclone DMEF </td><td> ThermoScientific </td><td> SH30023.01 </td><td> Steril, butikk nedkjølt, inkludert glutamin </td></tr><tr> &lt;td&gt; Fetal bovin serum </td><td> Cellgro </td><td> 35-010-CV </td><td> Sterile, store frosne alikvoter </td></tr><tr><td> Penicillin / Streptomycin / soppdrepende </td><td> GIBCO </td><td> 15240-062 </td><td> Sterile, store frosne alikvoter </td></tr><tr><td> Type 9 Paraffin </td><td> Richard-Allan Scientific </td><td> 8337 </td><td></td></tr><tr><td> 1X D-PBS </td><td> GIBCO </td><td> 14190-144 </td><td> Steril </td></tr><tr><td> 16% Paraformaldehyde </td><td> EM Sciences </td><td> 15710 </td><td> Lag friske, butikk nedkjølt </td></tr><tr><td> 8% Glutaraldehyde </td><td> EM Sciences </td><td> 16019 </td><td> Lag friske, butikk nedkjølt </td></tr><tr><td> Biosikkerhetsnivå 2 hette </td><td> Various </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Ultra-low fryser </td><td> Various </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Sakura Kassett Printer </td><td> Sakura </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Sakura VIP300 </td><td> Sakura </td><td></td><td> Automatisk parafin prosessor </td></tr><tr><td> Paraffin Embedding Station </td><td> ThermoFisher </td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Tabell 1. Spesifikke reagenser og utstyr.

collection protocol for human pancreas

Dette disseksjon og prøvetaking ble utviklet for Nettverk for Bukspyttkjertelen organdonorer med Diabetes (nPOD) program for å standardisere utarbeidelsen av bukspyttkjertelen utvinnes fra avdød organdonorer. Bukspyttkjertelen er delt inn i 3 hovedområder (hode, kropp, hale) etterfulgt av serielle tverrgående seksjoner hele mediale til laterale akse. Vekslende seksjoner brukes til fast parafin og friske frosne blokker og gjenværende prøvene er hakket for snap frosne prøven preparater, enten med eller uten RNase hemmere, for DNA, RNA, eller protein isolasjon. Det overordnede målet i bukspyttkjertelen disseksjon prosedyren er å prøve hele bukspyttkjertelen samtidig opprettholde anatomisk orientering. Endokrine celle heterogenitet i form av holmen sammensetning, størrelse, og tall rapporteres for menneskelige holmer i forhold til gnager holmer 1. Flertallet av menneskelige holmer fra bukspyttkjertelen hodet, blir kroppen og halen regionene består av insulin-containing beta-cellene etterfulgt av lavere andeler av glukagon som inneholder alfa-celler og somatostatin-inneholder Í-celler. Pankreas polypeptid-holdige PP celler og ghrelin-holdige Epsilon celler er også tilstede, men i lite antall. I kontrast, inneholder uncinate regionen holmer som primært består av pankreas polypeptid-holdige PP celler 2. Disse regionale holmen variasjoner oppstår fra utviklingsmessige forskjeller. Bukspyttkjertelen utvikler seg fra den ventrale og dorsale bukspyttkjertelen knopper i forutgående og etter rotasjon av magesekken og tolvfingertarmen, den ventrale lobe trekk og sikringer med dorsal tre. Den ventrale lapp danner den bakre delen av hodet inkludert uncinate prosessen mens dorsal lapp gir opphav til resten av orgelet. Regional bukspyttkjertelen variasjon er også rapportert ved halen regionen har høyere holme tetthet sammenlignet med andre regioner og dorsal lobe-deriverte komponenter gjennomgår selektiv atrofi i type 1 diabetes <sopp&gt; 4,5. Andre organer og vev er ofte utvinnes fra organdonorer og omfatter bukspyttkjertelen lymfeknuter, milt og ikke-bukspyttkjertelen lymfeknuter. Disse prøvene er gjenvunnet med lignende formater som for bukspyttkjertelen med tillegg av isolering av cryopreserved celler. Når proksimale duodenum er inkludert med bukspyttkjertelen, kan duodenal mucosa samles for parafin og frossen blokk og hakket snap frosne preparater.

Watch this Scientific Journal Video about Collection Protocol for Human Pancreas at JoVE.com

Collection Protocol for Human Pancreas

Denne videoen viser en disseksjon prosedyre for behandling av human pancreas i flere lagringsformater. Anatomisk orientering opprettholdes gjennom hele bukspyttkjertelen regionene å tillate definisjon av regional holme sammensetning og tetthet.

Innsamling Protokoll for Human Pancreas

This dissection and sampling procedure was developed for the Network for Pancreatic Organ Donors with Diabetes (nPOD) program to standardize preparation ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Improved Protocol For Laser Microdissection Of Human Pancreatic Islets From Surgical Specimens

Forbedret protokoll For Laser mikrodisseksjon Of Human bukspyttkjertelen holmer Fra Kirurgiske prøver

Laser microdissection (LMD) is a technique that allows the recovery of selected cells and tissues from minute amounts of parenchyma 1,2. The dissected ...

Collection, Isolation, and Flow Cytometric Analysis of Human Endocervical Samples

Innsamling, Isolation, og flowcytometrisk analyse av menneskelige endocervikale prøver

Despite the public health importance of mucosal pathogens (including HIV), relatively little is known about mucosal immunity, particularly at the female ...

A Detailed Protocol for Perspiration Monitoring Using a Novel, Small, Wireless Device

En detaljert protokoll for Svette Monitoring Ved hjelp av en roman, Small, Wireless Device

Perspiration monitoring can be utilized for the detection of certain diseases, such as thermoregulation and mental disorders, particularly when the ...

Mouse Model for Pancreas Transplantation Using a Modified Cuff Technique

Musemodell for bukspyttkjertelen transplantasjon bruker en modifisert mansjett teknikk

Mouse models have several advantages in transplantation research, including easy handling, a variety of genetically well-defined strains, and the ...

Dissection of the Mouse Pancreas for Histological Analysis and Metabolic Profiling

Disseksjon av musen bukspyttkjertelen for histologiske analyse og metabolske profilering

We have been investigating the pancreas specific transcription factor, 1a cre-recombinase; lox-stop-lox- Kristen rat sarcoma, glycine to aspartic acid at ...

Robotic Lateral Pancreaticojejunostomy for Chronic Pancreatitis

Robotic lateral Pancreaticojejunostomy for kronisk pankreatitt

Lateral pancreaticojejunostomy (LPJ) has shown good postoperative outcomes in patients with painful, morphine dependent, chronic pancreatitis (CP). The ...

Laparoscopic Radical Left Pancreatectomy for Pancreatic Cancer: Surgical Strategy and Technique Video

Laparoskopisk radikal venstre pankreatitomi for kreft i bukspyttkjertelen: kirurgisk strategi og teknikk video

Radical resection margins, resection of Gerota&#8217;s (perirenal) fascia, and adequate lymph node dissection are crucial for an adequate oncological ...

Robot-Assisted Kidney Transplantation

Robotassistert nyretransplantasjon

This paper describes robot-assisted kidney transplantation (RAKT) from a living donor. The robot is docked between the parted legs of the patient, placed ...

Stabilized Longitudinal In Vivo Cellular-Level Visualization of the Pancreas in a Murine Model with a Pancreatic Intravital Imaging Window

Stabilized Longitudinal In Vivo Cellular-Level Visualization of the Pancreas in a Murine Model with a Pancreatic Intravital Imaging Window

Stabilisert langsgående in vivo-mobilnivåvisualisering av bukspyttkjertelen i en murinemodell med et intravitalt bildevindu i bukspyttkjertelen

Direct in vivo cellular-resolution imaging of the pancreas in a live small animal model has been technically challenging. A recent intravital imaging ...

Collection, Expansion, and Differentiation of Primary Human Nasal Epithelial Cell Models for Quantification of Cilia Beat Frequency

Innsamling, utvidelse og differensiering av primære humane neseepitelcellemodeller for kvantifisering av cilia beat frekvens

Measurements of cilia function (beat frequency, pattern) have been established as diagnostic tools for respiratory diseases such as primary ciliary ...