Name: collection protocol for human pancreas
Uploaded: 2012-05-23T12:00:00
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Los autores agradecen a las familias de los donantes y las organizaciones de obtención de órganos involucrados en esta investigación y Martino María y Kusmartseva Irina por su ayuda de expertos. Este trabajo fue financiado por la Juvenile Diabetes Research Foundation (MC-T., MA) en apoyo de la Red de Donantes de Órganos de páncreas con diabetes.

1. Set-up <ol><li> Casetes de etiquetas para los bloques de parafina de forma manual con un lápiz, o automáticamente con una impresora de cartucho. Incluye el identificador de los donantes (CaseID), el tipo de muestra, número de parte alícuota, y cualquier otro documento de identidad única (la hoja de Caso, <a href="http://jove.com/files/ftp_upload/4039/4039appendix1.doc" target="_blank">el Apéndice 1</a> ). </li><li> Etiqueta OCT moldes como para cassettes con un marcador permanente. Cortar rectángulos de 5-10...

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	<li>Brissova, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+human+pancreatic+islet+architecture+and+composition+by+laser+scanning+confocal+microscopy.">Assessment of human pancreatic islet architecture and composition by laser scanning confocal microscopy.</a> J. Histochem. Cytochem. 53, 1087-1097 (2005).</li><li>Rahier, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pancreatic+polypeptide+cells+in+the+human+pancreas:+the+effects+of+age+and+diabetes.">The pancreatic polypeptide cells in the human pancreas: the effects of age and diabetes.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 56, 441-444 (1983).</li><li>Uchida, T., Takada, T., Ammori, B. J., Suda, K., Takahashi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+reconstruction+of+the+ventral+and+dorsal+pancreas:+a+new+insight+into+anatomy+and+embryonic+development.">Three-dimensional reconstruction of the ventral and dorsal pancreas: a new insight into anatomy and embryonic development.</a> J. Hepatobiliary Pancreat. Surg. 6, 176-180 (1999).</li><li>Wittingen, J., Frey, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+concentration+in+the+head,+body,+tail+and+uncinate+process+of+the+pancreas.">Islet concentration in the head, body, tail and uncinate process of the pancreas.</a> Ann. Surg. 179, 412-414 (1974).</li><li>Rahier, J., Goebbels, R., Henquin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+composition+of+the+human+diabetic+pancreas.">Cellular composition of the human diabetic pancreas.</a> Diabetologia. 24, 366-371 (1983).</li><li>Vaught, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+NCI+perspective+on+creating+sustainable+biospecimen+resources.">An NCI perspective on creating sustainable biospecimen resources.</a> J. Natl. Cancer Inst. Monogr. 42, 1-7 (2011).</li><li>Gianani, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initial+results+of+screening+of+nondiabetic+organ+donors+for+expression+of+islet+autoantibodies.">Initial results of screening of nondiabetic organ donors for expression of islet autoantibodies.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 91, 1855-1861 (2006).</li><li>Tauriainen, S., Salmela, K., Rantala, I., Knip, M., Hy&#246;ty, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collecting+high-quality+pancreatic+tissue+for+experimental+study+from+organ+donors+with+signs+of+&#946;-cell+autoimmunity.">Collecting high-quality pancreatic tissue for experimental study from organ donors with signs of &#946;-cell autoimmunity.</a> Diabetes Metab. Res. Rev. 26, 585-592 (2010).</li><li>In't Veld, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+for+insulitis+in+adult+autoantibody-positive+organ+donors.">Screening for insulitis in adult autoantibody-positive organ donors.</a> Diabetes. 56, 2400-2404 (2007).</li><li>T&#246;ns, H. A., Terpstra, O. T., Bouwman, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneity+of+human+pancreata+in+perspective+of+the+isolation+of+the+islets+of+langerhans.">Heterogeneity of human pancreata in perspective of the isolation of the islets of langerhans.</a> Transplant Proc. 40, 367-369 (2008).</li></ol>

El objetivo de este procedimiento es definir un proceso estándar de páncreas que puede ser armonizado en los distintos sitios de recolección de varios, para poder comparar los resultados obtenidos con los diferentes grupos. El método se basa en la disección estándar de prácticas de patología quirúrgica con medidas adicionales para la anotación de las regiones más importantes del páncreas seguido de intra-regionales subdivisiones. La estandarización de los métodos de procesamiento de especímenes biológico...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nombre del reactivo </td><td> Empresa </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentarios </td></tr><tr><td> Incluidos los instrumentos de disección con 22 hojas de bisturí </td><td> Varios </td><td> Varios </td><td></td></tr><tr><td> Tubos de centrífuga (15 y 50 ml) </td><td> Fisher Scientific </td><td> 05-539-5, 430828 </td><td> Estéril </td></tr><tr><td> Criotubos (1,8 ml) </td><td> VWR América del Norte </td><td> 89004-300 </td><td> Estériles, los códigos de barras opcionales </td></tr><tr><td> RNAlater </td><td> Ambion </td><td> AM7021 </td><td></td></tr><tr><td> Tinta Patología Quirúrgica </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Casetes </td><td> Mercedes Médico </td><td> CAS ECO109 </td><td></td></tr><tr><td> 10% formalina tamponada neutra </td><td> Fisher Scientific </td><td> 23-245-685 </td><td></td></tr><tr><td> OCT medio de congelación </td><td> TissueTek </td><td> 4583 </td><td></td></tr><tr><td> Moldes </td><td> ThermoScientific </td><td> 58952 </td><td> Varios tamaños </td></tr><tr><td> Isopentano </td><td> Fisher Scientific </td><td> O3551-4 </td><td> Escalofriante baño de octubre </td></tr><tr><td> El hielo seco </td><td></td><td></td><td> Escalofriante baño de octubre </td></tr><tr><td> El nitrógeno líquido en el vaso Dewar </td><td></td><td></td><td> Coloque los crioviales de congelación </td></tr><tr><td> Placa de cultivo celular (100 mm) </td><td> Corning </td><td> 430167 </td><td> Estéril </td></tr><tr><td> Hyclone DMEF </td><td> ThermoScientific </td><td> SH30023.01 </td><td> Almacén estéril, refrigerados, incluidos glutamina </td></tr><tr> &lt;td&gt; suero bovino fetal </td><td> Cellgro </td><td> 35 a 010 CV </td><td> Alícuotas estériles, congelados tienda </td></tr><tr><td> La penicilina / estreptomicina / antifúngico </td><td> GIBCO </td><td> 15240-062 </td><td> Alícuotas estériles, congelados tienda </td></tr><tr><td> Escriba 9 de parafina </td><td> Richard Allan-Científico </td><td> 8337 </td><td></td></tr><tr><td> D-PBS 1X </td><td> GIBCO </td><td> 14190-144 </td><td> Estéril </td></tr><tr><td> 16% de paraformaldehído </td><td> EM Ciencias </td><td> 15710 </td><td> Haga tienda fresca, refrigerada </td></tr><tr><td> 8% de glutaraldehído </td><td> EM Ciencias </td><td> 16019 </td><td> Haga tienda fresca, refrigerada </td></tr><tr><td> Nivel de Bioseguridad 2 campana </td><td> Varios </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Ultra-bajo el congelador </td><td> Varios </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Impresora Casete Sakura </td><td> Sakura </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Sakura VIP300 </td><td> Sakura </td><td></td><td> Procesador automático de parafina </td></tr><tr><td> Estación de parafina incrustación </td><td> ThermoFisher </td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Tabla 1. Reactivos específicos y equipos.

collection protocol for human pancreas

Esta disección y el procedimiento de muestreo fue desarrollado para la Red de Donantes de Órganos de páncreas con diabetes (nPOD) programa para estandarizar la preparación de páncreas se recuperó de los donantes de órganos cadavéricos. El páncreas se divide en 3 grandes regiones (cabeza, cuerpo, cola), seguidos de las secciones transversales de serie en toda la medial al eje lateral. Secciones alternas se utilizan para parafina fijo y frescas bloques congelados y muestras remanentes se pican para complemento preparaciones de muestras congeladas, ya sea con o sin inhibidores de RNAsa, para el ADN, ARN, o aislamiento de las proteínas. El objetivo general del procedimiento de disección de páncreas es de probar todo el páncreas, mientras que el mantenimiento de la orientación anatómica. Endocrino heterogeneidad celular en términos de composición islote, tamaño, y los números se informó de islotes humanos en comparación con 1 islotes de roedores. La mayoría de los islotes humanos de la cabeza del páncreas, regiones del cuerpo y la cola están compuestos de insulina-containing células beta seguido por las menores proporciones de glucagón que contiene alfa-células y que contienen somatostatina-delta-células. Polipéptido pancreático que contienen las células del PP y la grelina que contienen células épsilon, pero también están presentes en pequeñas cantidades. En contraste, la región uncinado contiene islotes que están compuestos principalmente de pancreáticos polipéptido que contienen células PP 2. Estas variaciones de los islotes regionales surgen de las diferencias de desarrollo. El páncreas se desarrolla a partir de las yemas de páncreas ventral y dorsal del intestino anterior y después de la rotación del estómago y el duodeno, se mueve el lóbulo ventral y se fusiona con el dorsal 3. El lóbulo ventral forma la parte posterior de la cabeza incluyendo el proceso uncinado mientras que el lóbulo dorsal da lugar a que el resto del órgano. La variación de páncreas Regional se informó también a la región de la cola que tiene una mayor densidad de islotes en comparación con otras regiones y los componentes derivados del lóbulo dorsal-se someten a una atrofia selectiva de la diabetes tipo 1 <sa&gt; 4,5. Órganos y tejidos adicionales a menudo son recuperados de los donantes de órganos y son los ganglios linfáticos, el bazo páncreas y páncreas no los ganglios linfáticos. Estas muestras se recuperaron con formatos similares como para el páncreas con la adición de aislamiento de células crioconservados. Cuando el duodeno proximal se incluye con el páncreas, la mucosa duodenal puede ser coleccionada para los bloques de parafina y congeladas y preparaciones picadas se congelaron.

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Collection Protocol for Human Pancreas

Este video muestra la disección de un procedimiento para la tramitación de páncreas humano en los formatos de almacenamiento. Orientación anatómica se mantiene a lo largo de las regiones pancreáticas para permitir la definición de la composición islote regional y densidad.

Colección Protocolo de páncreas humano

This dissection and sampling procedure was developed for the Network for Pancreatic Organ Donors with Diabetes (nPOD) program to standardize preparation ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Improved Protocol For Laser Microdissection Of Human Pancreatic Islets From Surgical Specimens

Protocolo mejorado para microdisección láser de islotes pancreáticos humanos a partir de muestras quirúrgicas

Laser microdissection (LMD) is a technique that allows the recovery of selected cells and tissues from minute amounts of parenchyma 1,2. The dissected ...

Investigación

Medicina

Collection, Isolation, and Flow Cytometric Analysis of Human Endocervical Samples

Colección, Aislamiento, y citometría de flujo análisis de las muestras endocervicales Humano

Despite the public health importance of mucosal pathogens (including HIV), relatively little is known about mucosal immunity, particularly at the female ...

A Detailed Protocol for Perspiration Monitoring Using a Novel, Small, Wireless Device

Un protocolo detallado para la Vigilancia transpiración utilizando un nuevo, pequeño, dispositivo inalámbrico

Perspiration monitoring can be utilized for the detection of certain diseases, such as thermoregulation and mental disorders, particularly when the ...

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Modelo murino de trasplante de páncreas mediante una técnica modificada del pun ¢ o

Mouse models have several advantages in transplantation research, including easy handling, a variety of genetically well-defined strains, and the ...

Dissection of the Mouse Pancreas for Histological Analysis and Metabolic Profiling

Disección del páncreas de ratón para análisis histológico y perfiles metabólicos

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Pancreaticojejunostomía lateral robótica para la pancreatitis crónica

Lateral pancreaticojejunostomy (LPJ) has shown good postoperative outcomes in patients with painful, morphine dependent, chronic pancreatitis (CP). The ...

Laparoscopic Radical Left Pancreatectomy for Pancreatic Cancer: Surgical Strategy and Technique Video

Pancreatectomía Izquierda Radical Laparoscópica para Cáncer de Páncreas: Estrategia Quirúrgica y Video Técnica

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Robot-Assisted Kidney Transplantation

Trasplante de riñón asistido por robot

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Stabilized Longitudinal In Vivo Cellular-Level Visualization of the Pancreas in a Murine Model with a Pancreatic Intravital Imaging Window

Stabilized Longitudinal In Vivo Cellular-Level Visualization of the Pancreas in a Murine Model with a Pancreatic Intravital Imaging Window

Visualización longitudinal estabilizada a nivel celular in vivo del páncreas en un modelo murino con una ventana de imágenes intravitales pancreáticas

Direct in vivo cellular-resolution imaging of the pancreas in a live small animal model has been technically challenging. A recent intravital imaging ...

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Recopilación, expansión y diferenciación de modelos primarios de células epiteliales nasales humanas para la cuantificación de la frecuencia de latido de los cilios

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