Name: transplantation of pancreatic islets into the kidney capsule of diabetic mice
Uploaded: 2007-10-31T23:37:26
Description: Watch this Scientific Journal Video about Transplantation of Pancreatic Islets Into the Kidney Capsule of Diabetic Mice at JoVE.com

<p> UCSF Diabetes Center. NIH UCSF DERC Islet Core. JDRF. LifeScan Inc. Johnson &amp; Johnson Company. </p>

<p class="jove_title"> Vorbereitung der Inseln für die Transplant (Tx) </p><ol><li> Unter einem inversen Mikroskop, hand-pick Inselchen mit einem P200 Pipetman und gerade Pipettenspitze aus den kultivierten Inseln in einem 100mm Platte. </li><li> Graf Inselchen 100 pro und Transfer in jede Mikrozentrifugenröhrchen (~ 500 Inseln / Rohr / Maus). </li><li> Lassen Inseln auf den Grund des Mikrozentrifugenröhrchen begleichen. </li><li> Zeichnen Sie eine kleine Insel Pellets in ein P200 Pipetman (eingestellt auf 130ul) mit einer geraden dünnwandi...

<ol>
	<li>Tang, Q., Henriksen, K. J., Bi, M., Finger, E. B., Szot, G., Ye, J., Masteller, E. L., McDevitt, H., Bonyhadi, M., Bluestone, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro-expanded+antigen-specific+regulatory+T+cells+suppress+autoimmune+diabetes.">In vitro-expanded antigen-specific regulatory T cells suppress autoimmune diabetes.</a> <em style='font-style: italic'>J Exp Med</em>. <b>199</b>, 1455-1465 (2004).</li><li>Rulifson, I. C., Szot, G. L., Palmer, E., Bluestone, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inability+to+induce+tolerance+through+direct+antigen+presentation.">Inability to induce tolerance through direct antigen presentation.</a> <em style='font-style: italic'>Am J Transplant</em>. <b>2</b>, 510-519 (2002).</li><li>Lenschow, D. J., Zeng, Y., Hathcock, K. S., Zuckerman, L. A., Freeman, G., Thistlethwaite, J. R., Gray, G. S., Hodes, R. J., Bluestone, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+transplant+rejection+following+treatment+with+anti-B7-2+and+anti-B7-1+antibodies.+Transplantation.">Inhibition of transplant rejection following treatment with anti-B7-2 and anti-B7-1 antibodies. Transplantation.</a> <em style='font-style: italic'>Transplantation</em>. <b>60</b>, 1171-1178 (1995).</li><li>Lenschow, D. J., Zeng, Y., Thistlethwaite, J. R., Montag, A., Brady, W., Gibson, M. G., Linsley, P. S., Bluestone, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+survival+of+xenogeneic+pancreatic+islet+grafts+induced+by+CTLA4lg.">Long-term survival of xenogeneic pancreatic islet grafts induced by CTLA4lg.</a> <em style='font-style: italic'>Science</em>. <b>257</b>, 789-792 (1992).</li></ol>

<p> Dieses Protokoll bietet eine praktische und effiziente Möglichkeit für die sauber und einfach liefern Inseln oder Zellen unter die Nierenkapsel diabetischer oder normalen Mäusen. Die Technik der Konzentration und Pelletierung der Inseln oder Zellen in den letzten Förderschlauch (PE50) verwendet werden, um die Zellen unter die Nierenkapsel Transplantation bietet eine einfache und effektive Methode der Transplantation von Zellen bei gleichzeitiger Verringerung unnötigen Stress auf die Zellen oder die Maus. </p>

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Surgical gloves</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>11-394-95(sz)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Surgical scrub sponges</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Moore medical</td>
<td>42940AK</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Forceps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltex</td>
<td>6-114 and 6-26</td>
<td>2 with teeth, 2 straight</td>
</tr>
<tr>
<td>Dissecting scissors n=2</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltex</td>
<td>5-290</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Oster razor (sz. 40 blade)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>01-305-10B</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>4x4 Sterile gauze pads</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Moore Medical</td>
<td>08252AK</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Povidone Iodine pads</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Moore Medical</td>
<td>08486AK</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Alcohol pads</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>14-819-2</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Heating pad</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Moore Medical</td>
<td>42508AK</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>23G or 25G needles</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>1" long</td>
</tr>
<tr>
<td>Cidex solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Moore Medical</td>
<td>07535AK</td>
<td>for cleaning/santizing instruments</td>
</tr>
<tr>
<td>PE50 polyethylene tubing</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD</td>
<td>427411</td>
<td>PE50, 0.965mm O.D. x 0.58mm I.D.</td>
</tr>
<tr>
<td>Cidex + 28 day soln</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Moore</td>
<td>35625AK</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Silicone tubing</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Spectrum Chromat.</td>
<td>123732</td>
<td>5/32&#x201D;OD x 1/32&#x201D; ID</td>
</tr>
<tr>
<td>Instrument sterilizing container</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Moore Medical</td>
<td>39074AK</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Straight Pipet Tips</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>TipOne</td>
<td>1111-0810</td>
<td>sterile</td>
</tr>
<tr>
<td>Glass syringe w/screw-drive</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hamilton</td>
<td>1001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cauterizing tool</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roboz</td>
<td>RS230</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Needle Holder</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Moore Medical</td>
<td>41-067</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>5-0 silk</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Look</td>
<td>754B</td>
<td>for suture (6-C) </td>
</tr>
<tr>
<td>Cotton tipped swab</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Moore Medical</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>9mm autoclip stapler</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD</td>
<td>7630</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>9mm staples</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD</td>
<td>7631</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>9mm staple remover</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD</td>
<td>7637</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
			<div>
					</div>
		

transplantation of pancreatic islets into the kidney capsule of diabetic mice

<p class="jove_content"> Unser Protokoll wurde entwickelt, um sauber und einfach liefern Inseln oder Zellen unter die Nierenkapsel diabetischer oder normalen Mäusen. Wir fanden, dass es leichter war, die kleinen Inseln oder Zellen in Pellets in den letzten Förderschlauch (PE50) verwendet werden, um die Zellen unter die Nierenkapsel Transplantation zu konzentrieren. Diese Technik bietet sowohl Geschwindigkeit und Leichtigkeit bei gleichzeitiger Verringerung unnötigen Stress auf die Zellen oder die Maus. </p><p class="jove_content"> Loading: Settled, hob die Hand, Inseln oder pelletierten Zellen werden sorgfältig aus dem Boden eines 1,5 mL Mikrozentrifugenröhrchen mit einem p200 pipetteman und eine gerade, dünnwandige Pipettenspitze aufgenommen. Eine Länge von PE50 Schlauch wird die Pipettenspitze mit einem kleinen Silikon-Adapter Schlauch befestigt. Die Zellen sind absitzen, in die Spitze, und dann sind die PE50 Rohr durch langsames Wahl der pipetteman übertragen. Sobald die Zellen in der Nähe des Ende des PE50 Schläuche sind, ist ein Knick machte und die Silikon-Adapter Schlauch wird über den Knick gestellt. Der PE50 Schlauch wird in ein 15 ml konische mit einem Schnitt 5 ml Pipette übertragen, und die PE50 Schlauch wird über die Seite der 5 ml-Pipette mit Klebeband zu verhindern Eisstockschießen beim Zentrifugieren. Die Zellen sind erlaubt bis 1.000 Umdrehungen pro Minute erreichen und blieb stehen. </p><p class="jove_content"> Transplantation: Empfänger Mäuse betäubt, rasiert und gereinigt. Durch einen kleinen Schnitt an der linken Flanke der Maus gemacht und die Niere freigelegt. Die Niere, Fett und Gewebe feucht gehalten mit physiologischer Kochsalzlösung Tupfer. Das distale Ende des PE50 ist ein Hamilton Schneckenantrieb Spritze befestigt ist, mit einer Pipettenspitze, mit dem Silikon-Adapter Schlauch. Eine kleine nick ist auf der rechten Flanke Seite der Nieren gemacht, nicht zu groß noch zu tief. Die abgeschrägte Ende des PE50-Schlauch, am nächsten die Zellen, wird sorgfältig unter der Kapsel wird der Schlauch um sanft bewegt, um Platz zu machen, während swabbing physiologischer Kochsalzlösung; einem trockenen Kapsel kann leicht reißen. Eine kleine Luftblase unter der Kapsel durch langsames Wählen Sie die Spritze Schneckenantrieb geliefert. Inseln sind dann langsam hinter die Luftblase geliefert. Sobald die Inseln geliefert worden Nieren Homöostase erhalten bleibt und die knick ist bei niedriger Hitze verödet. Die Niere ist zurück in die Höhle gebracht und das Bauchfell und Haut werden vernäht und geheftet. Mäuse sind sofort mit Flunixin und Buprenorphin sq behandelt und in einem Käfig auf einem Heizkissen. </p>

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Transplantation of Pancreatic Islets Into the Kidney Capsule of Diabetic Mice

<p class="jove_content">Unser Protokoll wurde entwickelt, um sauber und einfach liefern Inseln oder Zellen unter die Nierenkapsel von Mäusen. Die Zellen werden zu Pellets in den letzten Schlauch für die Transplantation der Zellen unter die Nierenkapsel verwendet konzentriert. Die Leichtigkeit dieser Technik reduziert den Stress auf die Zellen und der Maus.</p>

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