Name: isolation and characterization of dendritic cells and macrophages from the mouse intestine
Uploaded: 2012-05-21T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Characterization of Dendritic Cells and Macrophages from the Mouse Intestine at JoVE.com

نشكر هارون راي (جامعة إيموري قسم طب الأطفال ورعاية الاطفال في اتلانتا الأساسية تدفق) للفرز الخلية. وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح AA01787001، على جائزة التطوير المهني من كرون والتهاب القولون مؤسسة من أمريكا، والأطفال، Egleston إيموري في مركز SEED للمنح البحثية لTLD

1. تشريح والتفكك من الخلايا الظهارية في الأمعاء إعداد الكواشف والمعدات: <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دافئ كا 2 + / 2 ملغ + خالية PBS (CMF PBS) إلى درجة حرارة الغرفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كا الحار...

<ol>
	<li>Maloy, K. J., Powrie, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+homeostasis+and+its+breakdown+in+inflammatory+bowel+disease.">Intestinal homeostasis and its breakdown in inflammatory bowel disease.</a> Nature. 474, 298-306 (2011).</li><li>Nagler-Anderson, C., Terhoust, C., Bhan, A. K., Podolsky, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mucosal+antigen+presentation+and+the+control+of+tolerance+and+immunity.">Mucosal antigen presentation and the control of tolerance and immunity.</a> Trends Immunol. 22, 120-122 (2001).</li><li>Abraham, C., Medzhitov, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interactions+between+the+host+innate+immune+system+and+microbes+in+inflammatory+bowel+disease.">Interactions between the host innate immune system and microbes in inflammatory bowel disease.</a> Gastroenterology. 140, 1729-1737 (2011).</li><li>Macdonald, T. T., Monteleone, I., Fantini, M. C., Monteleone, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regula+tine.">Regula tine.</a> Gastroenterology. 140, 1768-1775 (2011).</li><li>Rescigno, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+dendritic+cells.">Intestinal dendritic cells.</a> Adv. Immunol. 107, 109-138 (2010).</li><li>Platt, A. M., Bain, C. C., Bordon, Y., Sester, D. P., Mowat, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+independent+subset+of+TLR+expressing+CCR2-dependent+macrophages+promotes+colonic+inflammation.">An independent subset of TLR expressing CCR2-dependent macrophages promotes colonic inflammation.</a> J. Immunol. 184, 6843-6854 (2010).</li><li>Coombes, J. L., Powrie, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cells+in+intestinal+immune+regulation.">Dendritic cells in intestinal immune regulation.</a> Nat. Rev. Immunol. 8, 435-446 (2008).</li><li>Kelsall, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+progress+in+understanding+the+phenotype+and+function+of+intestinal+dendritic+cells+and+macrophages.">Recent progress in understanding the phenotype and function of intestinal dendritic cells and macrophages.</a> Mucosal Immunol. 1, 460-469 (2008).</li><li>Pulendran, B., Tang, H., Denning, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Division+of+labor,+plasticity,+and+crosstalk+between+dendritic+cell+subsets.">Division of labor, plasticity, and crosstalk between dendritic cell subsets.</a> Curr. Opin. Immunol. 20, 61-67 (2008).</li><li>Denning, T. L., Wang, Y. C., Patel, S. R., Williams, I. R., Pulendran, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lamina+propria+macrophages+and+dendritic+cells+differentially+induce+regulatory+and+interleukin+17-producing+T+cell+responses.">Lamina propria macrophages and dendritic cells differentially induce regulatory and interleukin 17-producing T cell responses.</a> Nat. Immunol. 8, 1086-1094 (2007).</li><li>Niess, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CX3CR1-mediated+dendritic+cell+access+to+the+intestinal+lumen+and+bacterial+clearance.">CX3CR1-mediated dendritic cell access to the intestinal lumen and bacterial clearance.</a> Science. 307, 254-258 (2005).</li><li>Milling, S. W., Cousins, L., MacPherson, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+do+DCs+interact+with+intestinal+antigens.">How do DCs interact with intestinal antigens.</a> Trends Immunol. 26, 349-352 (2005).</li><li>Bilsborough, J., Viney, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gastrointestinal+dendritic+cells+play+a+role+in+immunity,+tolerance,+and+disease.">Gastrointestinal dendritic cells play a role in immunity, tolerance, and disease.</a> Gastroenterology. 127, 300-309 (2004).</li><li>Stagg, A. J., Hart, A. L., Knight, S. C., Kamm, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+dendritic+cell:+its+role+in+intestinal+inflammation+and+relationship+with+gut+bacteria.">The dendritic cell: its role in intestinal inflammation and relationship with gut bacteria.</a> Gut. 52, 1522-1529 (2003).</li><li>Medina-Contreras, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CX3CR1+regulates+intestinal+macrophage+homeostasis,+bacterial+translocation,+and+colitogenic+Th17+responses+in+mice.">CX3CR1 regulates intestinal macrophage homeostasis, bacterial translocation, and colitogenic Th17 responses in mice.</a> J. Clin. Invest. 121, 4787-4795 (2011).</li><li>Denning, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+Specializations+of+Intestinal+Dendritic+Cell+and+Macrophage+Subsets+That+Control+Th17+and+Regulatory+T+Cell+Responses+Are+Dependent+on+the+T+Cell/APC+Ratio,+Source+of+Mouse+Strain,+and+Regional+Localization.">Functional Specializations of Intestinal Dendritic Cell and Macrophage Subsets That Control Th17 and Regulatory T Cell Responses Are Dependent on the T Cell/APC Ratio, Source of Mouse Strain, and Regional Localization.</a> J. Immunol. , 187-733 (2011).</li><li>Kim, Y. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Nod2+sensor+promotes+intestinal+pathogen+eradication+via+the+chemokine+CCL2-dependent+recruitment+of+inflammatory+monocytes.">The Nod2 sensor promotes intestinal pathogen eradication via the chemokine CCL2-dependent recruitment of inflammatory monocytes.</a> Immunity. 34, 769-780 (2011).</li><li>Schulz, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+CD103+,+but+not+CX3CR1+,+antigen+sampling+cells+migrate+in+lymph+and+serve+classical+dendritic+cell+functions.">Intestinal CD103+, but not CX3CR1+, antigen sampling cells migrate in lymph and serve classical dendritic cell functions.</a> J. Exp. Med. 206, 3101-3114 (2009).</li><li>Jaensson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small+intestinal+CD103++dendritic+cells+display+unique+functional+properties+that+are+conserved+between+mice+and+humans.">Small intestinal CD103+ dendritic cells display unique functional properties that are conserved between mice and humans.</a> J. Exp. Med. 205, 2139-2149 (2008).</li><li>Uematsu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+humoral+and+cellular+gut+immunity+by+lamina+propria+dendritic+cells+expressing+Toll-like+receptor+5.">Regulation of humoral and cellular gut immunity by lamina propria dendritic cells expressing Toll-like receptor 5.</a> Nat. Immunol. 9, 769-776 (2008).</li><li>Schenk, M., Bouchon, A., Seibold, F., Mueller, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TREM-1--expressing+intestinal+macrophages+crucially+amplify+chronic+inflammation+in+experimental+colitis+and+inflammatory+bowel+diseases.">TREM-1--expressing intestinal macrophages crucially amplify chronic inflammation in experimental colitis and inflammatory bowel diseases.</a> J. Clin. Invest. 117, 3097-3106 (2007).</li><li>Sun, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small+intestine+lamina+propria+dendritic+cells+promote+de+novo+generation+of+Foxp3+T+reg+cells+via+retinoic+acid.">Small intestine lamina propria dendritic cells promote de novo generation of Foxp3 T reg cells via retinoic acid.</a> J. Exp. Med. 204, 1775-1785 (2007).</li><li>Kamada, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abnormally+differentiated+subsets+of+intestinal+macrophage+play+a+key+role+in+Th1-dominant+chronic+colitis+through+excess+production+of+IL-12+and+IL-23+in+response+to+bacteria.">Abnormally differentiated subsets of intestinal macrophage play a key role in Th1-dominant chronic colitis through excess production of IL-12 and IL-23 in response to bacteria.</a> J. Immunol. 175, 6900-6908 (2005).</li><li>Denning, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD4++Th+cells+resembling+regulatory+T+cells+that+inhibit+chronic+colitis+differentiate+in+the+absence+of+interactions+between+CD4+and+class+II+MHC.">CD4+ Th cells resembling regulatory T cells that inhibit chronic colitis differentiate in the absence of interactions between CD4 and class II MHC.</a> J. Immunol. 171, 2279-2286 (2003).</li></ol>

<img src="/files/ftp_upload/4040/4040fig3.jpg" alt="الشكل (3)"/> الشكل 3. وتتأثر مباشرة من العوامل الهامة لتعظيم العائد الخلية والتعبير سطح المستضد. العائد خلية والتعبير سطح المستضد من قبل مدة من هضم الأنسجة، والخصائص المميزة للكولاجيناز، ودرجة الأنسجة تنميق، ووجود أو ع?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم الكاشف </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> 1X PBS، كا 2 + - و 2 ملغ + خالية </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> هانك في محلول ملحي متوازن (HBSS) مع الفينول الحمراء </td><td> فيشر العلمية </td><td> SH3001603 </td><td></td></tr><tr><td> بيكربونات الصوديوم </td><td> سيغما </td><td> S6014 </td><td></td></tr><tr><td> 1M HEPES في كلوريد الصوديوم 0.85٪ </td><td> Lonza </td><td> 17-737E </td><td></td></tr><tr><td> الجنين مصل بقري (FBS) </td><td> اتلانتا البيولوجية </td><td> S11150H </td><td> حرارة المعطل </td></tr><tr><td> 0.5M EDTA (درجة الحموضة 8.0) </td><td> Cellgro </td><td> 46-034-CI </td><td></td></tr><tr><td> Collagenasه نوع الثامن </td><td> سيغما </td><td> C2139 </td><td></td></tr><tr><td> أنا الدناز </td><td> روش </td><td> 14785000 </td><td> حل الأوراق المالية: 100mg/ml </td></tr><tr><td> لايف / الميت قابل للتثبيت أكوا كيت خلية الميت اللطخة لإثارة نانومتر 405 </td><td> إينفيتروجن </td><td> L34957 </td><td> استخدم في 1:1000 </td></tr><tr><td> CD45-PerCP خريطة موقع (30F11) </td><td> دينار بحريني </td><td> 557235 </td><td> استخدم في 1:100 </td></tr><tr><td> CD103-PE خريطة موقع (M290) </td><td> دينار بحريني </td><td> 557495 </td><td> استخدم في 1:100 </td></tr><tr><td> FcγRIII / II خريطة موقع (2.4G2) </td><td> دينار بحريني </td><td> 553141 </td><td> استخدم في 1:200 </td></tr><tr><td> CD11c-APC خريطة موقع (N418) </td><td> eBioscience </td><td> 17-0114-82 </td><td> استخدم في 1:100 </td></tr><tr><td> MHC-II (I-AB)، فلور 700 خريطة موقع اليكسا </td><td> eBioscience </td><td> 56-5321-82 </td><td> استخدم في 1:100 </td></tr><tr><td> CD11b eFluor-450خريطة موقع (M1/70) </td><td> eBioscience </td><td> 48-0112-82 </td><td> استخدم في 1:200 </td></tr><tr><td> F4/80-PE-Cy7 خريطة موقع (BM8) </td><td> eBioscience </td><td> 25-4801-82 </td><td></td></tr><tr><td> CD11b microbeads </td><td> Miltenyi بيوتيك </td><td> 130-049-601 </td><td></td></tr><tr><td> CD11c microbeads </td><td> Miltenyi بيوتيك </td><td> 130-052-001 </td><td></td></tr><tr><td> 50 مل من أنابيب مخروطية </td><td> دينار بحريني الصقر </td><td> 352098 </td><td></td></tr><tr><td> وحيد مصفاة سلكية </td><td> Chefmate </td><td></td><td></td></tr><tr><td> قارب صغير يزن </td><td> فيشر العلمية </td><td> 08-732-116 </td><td></td></tr><tr><td> 100 مصفاة خلية ميكرومتر </td><td> دينار بحريني الصقر </td><td> 352360 </td><td></td></tr><tr><td> 40 مصفاة خلية ميكرومتر </td><td> دينار بحريني الصقر </td><td> 352340 </td><td></td></tr><tr><td> 5 مل البوليسترين ذهابا وأسفل الأنابيب </td><td> دينار بحريني الصقر </td><td> 352235 </td><td> استخدم في 1:100 </td></tr><tr><td> MaxQ 4450 الفوق المدارية شاكر </td><td> الحرارية العلمية </td><td></td><td></td></tr><tr><td> LS MACS عمود </td><td> Miltenyi بيوتيك </td><td> 130-042-401 </td><td></td></tr><tr><td> LSR الثاني </td><td> دينار بحريني </td><td></td><td></td></tr><tr><td> FACSAria الثاني </td><td> دينار بحريني </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

isolation and characterization of dendritic cells and macrophages from the mouse intestine

داخل الأمعاء يقيم السكان فريدة من الخلايا المناعية الفطرية والتكيفية التي تشارك في تعزيز التسامح تجاه النباتات commensal ومضادات الطعام في حين تستعد بصورة متزامنة المتبقية لتركيب الاستجابات الالتهابية نحو 1،2 مسببات الأمراض الغازية. الخلايا مستضد تقديم، ولا سيما البلدان النامية والضامة، لعب أدوارا حاسمة في الحفاظ على توازن المناعة في الأمعاء عن طريق قدرتها على الإحساس والاستجابة بشكل مناسب للالجراثيم 3-14. العزلة الفعالة من البلدان النامية في الامعاء والضامة هو خطوة حاسمة في تحديد خصائص النمط الظاهري ووظيفة هذه الخلايا. في حين وصفت وسائل فعالة العديد من عزل خلايا المناعة في الأمعاء، بما في ذلك البلدان النامية والضامة، 6،10،15-24، كثير الاعتماد على الهضم الأوقات الطويلة التي قد تؤثر سلبا على التعبير الخلية المستضد السطحي، بقاء الخلية، و / أو العائد الخلية. هنا، نحن من التفصيل منهجية لعزل السريع لأعداد كبيرة من viablه، ن المعوية والضامة. ويتم توصيف المظهري من البلدان النامية في الامعاء والضامة بها تلطيخ مباشرة الخلايا المعوية المعزولة مع الأجسام المضادة وحيدة النسيلة محددة مضان المسمى لتحليل تدفق متعدد الألوان cytometric. وعلاوة على ذلك، يتم عزل العاصمة نقية للغاية والسكان البلاعم للدراسات الفنية والاستفادة من CD11c CD11b حبات خلية المغناطيسي تنشيط فرز يليه الفرز الخلية.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Characterization of Dendritic Cells and Macrophages from the Mouse Intestine at JoVE.com

Isolation and Characterization of Dendritic Cells and Macrophages from the Mouse Intestine

هنا، نحن من التفصيل منهجية لعزل السريع للخلايا فأر الجذعية المعوية (DCS) والضامة. يتم تنفيذ التوصيف المظهري من البلدان النامية في الامعاء والضامة باستخدام متعدد الألوان تدفق تحليل cytometric في حين تستخدم لتخصيب حبة المغناطيسي يليه الفرز الخلية لانتاج السكان نقي جدا للدراسات الفنية.

عزل وتوصيف الخلايا الجذعية والضامة من الأمعاء ماوس

Within the intestine reside unique populations of innate and adaptive immune cells that are involved in promoting tolerance towards commensal flora and ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Isolation of Mouse Lung Dendritic Cells

عزل خلايا الرئة ماوس شجيرى

Lung dendritic cells (DC) play a fundamental role in sensing invading pathogens 1,2 as well as in the control of tolerogenic responses 3 in the ...

Isolation of Myeloid Dendritic Cells and Epithelial Cells from Human Thymus

عزل الخلايا الجذعية متعلق بالنخاع الشوكي والخلايا الظهارية من الغدة الصعترية الإنسان

In this protocol we provide a method to isolate dendritic cells (DC) and epithelial cells (TEC) from the human thymus. DC and TEC are the major antigen ...

T Cells Capture Bacteria by Transinfection from Dendritic Cells

T خلايا التقاط البكتيريا التي كتبها Transinfection من الخلايا الجذعية

Recently, we have shown, contrary to what is described, that CD4+ T cells, the paradigm of adaptive immune cells, capture bacteria from infected dendritic ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Immune Cells from the Ischemic Mouse Brain

العزلة وتحليل تدفق Cytometric من الخلايا المناعية من الدماغ الدماغية ماوس

Ischemic stroke initiates a robust inflammatory response that starts in the intravascular compartment and involves rapid activation of brain resident ...

Generation and Identification of GM-CSF Derived Alveolar-like Macrophages and Dendritic Cells From Mouse Bone Marrow

جيل وتحديد GM-CSF المشتقة مثل السنخية الضامة والخلايا الجذعية من الفأر نخاع العظم

Macrophages and dendritic cells (DCs) are innate immune cells found in tissues and lymphoid organs that play a key role in the defense against pathogens. ...

Characterization of Human Monocyte-derived Dendritic Cells by Imaging Flow Cytometry: A Comparison between Two Monocyte Isolation Protocols

توصيف الخلايا الجذعية البشرية الوحيدات المستمدة من التصوير التدفق الخلوي: مقارنة بين اثنين من بروتوكولات الوحيدات عزل

Dendritic cells (DCs) are antigen presenting cells of the immune system that play a crucial role in lymphocyte responses, host defense mechanisms, and ...

Phenotypic Characterization of Macrophages from Rat Kidney by Flow Cytometry

التوصيف المظهري لالضامة من الكلى الجرذ بواسطة التدفق الخلوي

There is increasing evidence suggesting the important role of inflammation and, subsequently, macrophages in the development and progression of renal ...

Fluorescence-activated Cell Sorting for Purification of Plasmacytoid Dendritic Cells from the Mouse Bone Marrow

مضان تنشيط الفرز الخليوي لتنقية الخلايا الجذعية بلازماوية الشكل من الفأر نخاع العظم

Fluorescence-activated cell sorting (FACS) is a technique to purify specific cell populations based on phenotypes detected by flow cytometry. This method ...

Generation of Human Monocyte-derived Dendritic Cells from Whole Blood

جيل من الوحيدات المستمدة الخلايا الجذعية البشرية من الدم الكامل

Dendritic cells (DCs) recognize foreign structures of different pathogens, such as viruses, bacteria, and fungi, via a variety of pattern recognition ...

Isolation, Characterization, and Purification of Macrophages from Tissues Affected by Obesity-related Inflammation

عزل وتوصيف وتنقية الضامة من الأنسجة المتضررة من التهاب المتصلة بالسمنة

Obesity promotes a chronic inflammatory state that is largely mediated by tissue-resident macrophages as well as monocyte-derived macrophages. ...