Name: non-invasive imaging of disseminated candidiasis in zebrafish larvae
Uploaded: 2012-07-30T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Non-invasive Imaging of Disseminated Candidiasis in Zebrafish Larvae at JoVE.com

Forfatterne vil gerne takke laboratorium Dr. Carol Kim for mikroinjektion uddannelse, Clarissa Henry for at få råd om fremskyndelse embryo udvikling og anvendelse af udstyr, og Nathan Lawson for at bidrage fli1: EGFP fisk. Vi takker medlemmerne af Wheeler laboratoriet og Shawn Vægge til kritisk læsning af manuskriptet. Vi vil også gerne takke Mark Nilan for fisk pleje og rådgivning, og Ryan Phennicie og Kristin Gabor for teknisk rådgivning om dette projekt. Dette arbejde blev finansieret af en MAFES forskning assistentopholdet til K. Brothers, en MAFES Hatch tilskud E08913-08, og en NIH NCRR pris P20RR016463 til R. Wheeler.

Alle zebrafisk pleje protokoller og eksperimenter blev udført under Institutional Animal Care og Use Committee (IACUC) protokol A2009-11-01. 1. Morpholino og larver Injection Dishes Eksperimentel varighed: * (10-15 minutter) Sværhedsgrad: * <ol><li> For æg injektioner, udarbejde en 2% agarose-opløsning i sterilt vand og mikroovn. Når opløsningen er afkølet hælde noget af det til en ekstra dy...

Den Zebrafisken mikroinjektion, der præsenteres her, adskiller sig fra Gutzman et al. 34 i dette her, vi viser injektion gennem otiske vesikel i baghjerne ventrikel 36 til 48 HPF larver. Metoden beskriver vi giver mulighed for konsekvent injektion af 10-15 gær i baghjerne ventrikel med reduceret vævsskader. Denne protokol giver en indledningsvis lokal infektion, der spredes i hele kroppen ved 24 HPI (figur 1) og resulterer i betydelig dødelighed / morbiditet 5. Den bag...

<table border="1"><tbody><tr><td> Navn på reagenset </td><td> Firma </td><td> Katalog nr. </td><td> Kommentarer (valgfri) </td></tr><tr><td> Akvarier </td><td> Akvatiske habitater </td><td> 2L </td><td></td></tr><tr><td> 1,7 ml rør </td><td> Axygen </td><td> MCT-175-C </td><td></td></tr><tr><td> Instant Ocean </td><td> Fisher Scientific </td><td> S17957C </td><td></td></tr><tr><td> Ekstra dybe petriskåle </td><td> Fisher Scientific </td><td> 08 til 757-11Z </td><td></td></tr><tr><td> Standard petriskåle </td><td> VWR Scientific </td><td> 25384-302 </td><td></td></tr><tr><td> Overførselspipetter </td><td> Fisher Scientific </td><td> 13-711-7M </td><td></td></tr><tr><td> Gærekstrakt </td><td> VWR videnskabeFIC </td><td> 90000-726 </td><td></td></tr><tr><td> Pepton </td><td> VWR Scientific </td><td> 90000-264 </td><td></td></tr><tr><td> Dextrose </td><td> Fisher Scientific </td><td> D16-1 </td><td></td></tr><tr><td> Agar </td><td> VWR Scientific </td><td> 90000-760 </td><td></td></tr><tr><td> Engangs hæmocytometer </td><td> VWR Scientific </td><td> 82030-468 </td><td></td></tr><tr><td> Phosphatbufret saltvand </td><td> VWR Scientific </td><td> 12001-986 </td><td></td></tr><tr><td> Dumont Dumoxel pincet </td><td> VWR Scientific </td><td> 100501-806 </td><td></td></tr><tr><td> Trædyvler </td><td> VWR Scientific </td><td> 10805-018 </td><td></td></tr><tr><td> KimWipes </td><td> VWR Scientific </td><td> 300053-964 </td><td></td></tr><tr><td> LavtsmeltendeAgarose </td><td> VWR Scientific </td><td> 12001-722 </td><td></td></tr><tr><td> Agarose til injektion retter </td><td> VWR Scientific </td><td> 12002-102 </td><td></td></tr><tr><td> Flaming Brown Mikropipette Puller </td><td> Sutter Instruments </td><td> P-97 </td><td></td></tr><tr><td> Hule glasstænger </td><td> Sutter Instruments </td><td> BF120-69 til 10 </td><td> For glasstænger glat glas ved opvarmning over bunsenbrænder </td></tr><tr><td> Pipette Opbevaring Box </td><td> Sutter Instruments </td><td> BX10 </td><td></td></tr><tr><td> MPPI-3 Indsprøjtningssystem </td><td> Anvendt videnskabelige instrumenter </td><td> MPPI-3 </td><td></td></tr><tr><td> Tilbage Pressure Unit </td><td> Anvendt videnskabelige instrumenter </td><td> BPU </td><td></td></tr><tr><td> Mikropipette Holder kit </td><td> Ansøgninged videnskabelige instrumenter </td><td> MPIP </td><td></td></tr><tr><td> Foot Switch </td><td> Anvendt videnskabelige instrumenter </td><td> FSW </td><td></td></tr><tr><td> Mikromanipulator </td><td> Anvendt videnskabelige instrumenter </td><td> MM33 </td><td></td></tr><tr><td> Magnetic Base </td><td> Anvendt videnskabelige instrumenter </td><td> Magnetic Base </td><td></td></tr><tr><td> Tricainmethansulfonat sulfonat </td><td> Vestlige Chemical Inc. </td><td> MS-222 </td><td></td></tr><tr><td> Dissektionsmikroskop </td><td> Olympus </td><td> SZ61 top SZX-ILLB2-100 bund </td><td></td></tr><tr><td> Konfokalt mikroskop </td><td> Olympus </td><td> IX-81 med FV-1000 laser scanning konfokal-system </td><td></td></tr><tr><td> TC-7 Tissue Culture Roller tromle med 14 inch reagensglas hjulet </td><td> New Brunswick Scientific </td><td> TC-7 </td><td></td></tr><tr><td> Imaging Dishes </td><td> Mattek Corporation </td><td> P24G-1.0-10-F </td><td></td></tr><tr><td> Pipettespidser til påfyldning af nåle </td><td> Eppendorf </td><td> 930001007 </td><td></td></tr><tr><td> Plate hælde net </td><td> Adaptive Science Tools </td><td> TU-1 </td><td></td></tr><tr><td> Opvarmet Stage </td><td> Bioptechs Inc. </td><td> Delta T-5 </td><td></td></tr><tr><td> Flat Spatel </td><td> VWR Scientific </td><td> 82027-486 </td><td></td></tr><tr><td> Plastic Sigter </td><td> Varer af Knutsford Online </td><td> 12 cm </td><td></td></tr><tr><td> Parafilm </td><td> VWR Scientific </td><td> 52858-000 </td><td></td></tr><tr><td> Vortex Genie </td><td> VWR Scientific </td><td> 14216-184 </td><td></td></tr><tr><td> 16 x 150 mm dyrkningsrør </td><td> VWR Scientific </td><td> 60825-435 </td><td></td></tr><tr><td> Nanodrop </td><td> Thermo Scientific </td><td> ND 2000 </td><td></td></tr><tr><td> Phenolrødt </td><td> VWR Scientific </td><td> 97062-478 </td><td></td></tr><tr><td> HCI </td><td> VWR Scientific </td><td> 87003-216 </td><td></td></tr><tr><td> NaCl </td><td> VWR Scientific </td><td> BDH4534-500gP </td><td></td></tr><tr><td> KCl </td><td> VWR Scientific </td><td> BDH4532-500gP </td><td></td></tr><tr><td> MgSO4 </td><td> VWR Scientific </td><td> BDH0246-500gP </td><td></td></tr><tr><td> Ca (NO3) 2 </td><td> VWR Scientific </td><td> BDH0226-500gP </td><td></td></tr><tr><td> HEPES </td><td> VWR Scientific </td><td> BDH4520-500gP </td><td></td></tr&gt; <tr><td> Morpholinos </td><td> GeneTools, LLC </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

non-invasive imaging of disseminated candidiasis in zebrafish larvae

Dissemineret candidiasis forårsaget af patogenet Candida albicans er en klinisk vigtigt problem indlagte individer og er forbundet med en 30 til 40% kan tilskrives mortalitet 6. Systemisk candidiasis normalt styres af medfødte immunitet, og individer med genetiske defekter i medfødte immunsystem cellekomponenter, såsom fagocyt NADPH-oxidase er mere modtagelige for candidemia 7-9. Meget lidt er kendt om dynamikken i C. albicans interaktion med medfødte immunsystem-celler in vivo. omfattende in vitro-undersøgelser har fastslået, at uden for værten C. albicans spirer indersiden af makrofager og hurtigt ødelægges af neutrofiler 10-14. In vitro-undersøgelser, men nyttige ikke rekapitulere komplekset in vivo-miljø, der omfatter tidsafhængige dynamik cytokinniveauer, ekstracellulære matrixproteiner vedhæftede filer og intercellulære kontakter 10, 15-18 </sup&gt;. At undersøge bidraget af disse faktorer i værtspatogene interaktion, er det vigtigt at finde en modelorganisme at visualisere disse aspekter af infektionen ikke-invasivt på en levende intakt vært. Zebrafisken larve giver en unik og alsidig vertebrat vært til undersøgelse af infektion. I de første 30 dage af udviklingen zebrafisk larver kun har medfødte immunforsvar 2, 19-21, forenkle undersøgelse af sygdomme, såsom dissemineret candidiasis, der er stærkt afhængige af medfødte immunitet. Den lille størrelse og gennemsigtighed i zebrafisk larver muliggøre scanning af infektion dynamik på det cellulære niveau for både vært og patogen. Transgene larver med fluorescerende medfødte immunsystem-celler kan anvendes til at identificere specifikke celletyper involveret i infektionen 22-24. Modificerede antisense-oligonukleotider (Morpholinos) kan anvendes til at vælte forskellige immun komponenter såsom fagocyt NADPH-oxidase og studere ændringer som reaktion på fungal infektion 5. Ud over de etiske og praktiske fordele ved at bruge en lille lavere hvirveldyr, tilbyder zebrafisk larverne unik mulighed for at billedet af slag mellem patogen og vært både intravitally og i farver. Den Zebrafisken er blevet brugt til model-infektion for en række af de menneskelige sygdomsfremkaldende bakterier, og har været medvirkende til store fremskridt i vores forståelse af mycobakteriel infektion 3, 25. Men først for nylig har meget større patogener, såsom svampe blevet brugt til at inficere larve 5, 23, 26, og til dato har der ikke været en detaljeret visuel beskrivelse af infektionen metode. Her præsenterer vi vores teknikker til baghjerne ventrikel mikroinjektion af Prim 25 zebrafisk, herunder vores ændringer til tidligere protokoller. Vores resultater ved hjælp af larve zebrafisk model for svampeinfektion afvige fra in vitro undersøgelser og forstærke behovet for at undersøge vært-patogen vekselvirkningIndsatsen i komplekset miljø værten i stedet for en forenklet af petriskålen 5.

Watch this Scientific Journal Video about Non-invasive Imaging of Disseminated Candidiasis in Zebrafish Larvae at JoVE.com

Non-invasive Imaging of Disseminated Candidiasis in Zebrafish Larvae

Den hastige udvikling, lille størrelse og gennemsigtighed i zebrafisk er enorme fordele for studiet af medfødte immunsystem kontrol af infektion<sup&gt; 1-4</sup&gt;. Her viser vi teknikker til at inficere zebrafisk larver ved hjælp af svampepatogen<em&gt; Candida albicans</em&gt; Ved mikroinjektion, for nylig metode, der anvendes til at indblande phagocyt NADPH oxidase aktivitet i kontrol af svampe dimorfi<sup&gt; 5</sup&gt;.

Non-invasiv Imaging af dissemineret candidiasis hos zebrafisk Larver

Disseminated candidiasis caused by the pathogen Candida albicans is a clinically important problem in hospitalized individuals and is associated with a 30 ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Non-invasive Imaging of Leukocyte Homing and Migration in vivo

Non-invasive Imaging of Leukocyte Homing and Migration in vivo

Two-photon (2P) microscopy is a high resolution imaging technique that has been broadly adapted by biologists.  The value of 2P microscopy is that it ...

Non-invasive Optical Imaging of the Lymphatic Vasculature of a Mouse

Ikke-invasiv optisk billeddannelse af lymfatisk vaskulatur på en mus

The lymphatic  vascular system is an important component of the circulatory system that  maintains fluid homeostasis, provides immune surveillance, and ...

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Non-invasive Model of Neuropathogenic<em&gt; Escherichia coli</em&gt; Infektion i Neonatal Rat

Investigation of the interactions between animal host and bacterial pathogen is only meaningful if the infection model employed replicates the principal ...

Complete Thymectomy in Adult Rats with Non-invasive Endotracheal Intubation

Komplet thymektomi i voksne rotter med Non-invasiv endotrakeal intubation

Thymectomy in neonatal rodents is an established and reliable procedure for immunological studies. However, in adult rats, complications of hemorrhage and ...

Modeling Mucosal Candidiasis in Larval Zebrafish by Swimbladder Injection

Modeling Mucosal Candidiasis i Larve Zebrafisk af swimbladder Injection

Early defense against mucosal pathogens consists of both an epithelial barrier and innate immune cells. The immunocompetency of both, and their ...

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

Ikke-invasiv billeddannelse af Innate immunrespons i en zebrafisk Larve Model af<em&gt; Streptococcus iniae</em&gt; Infektion

The aquatic pathogen, Streptococcus iniae, is responsible for over 100 million dollars in annual losses for the aquaculture industry and is capable of ...

A Non-invasive and Technically Non-intensive Method for Induction and Phenotyping of Experimental Bacterial Pneumonia in Mice

En ikke-invasiv og Teknisk Ikke-intensive Metode til induktion og fænotype for Eksperimentel bakteriel lungebetændelse i mus

Although community-acquired pneumonia remains a major public health problem, murine models of bacterial pneumonia have recently facilitated significant ...

Non-invasive In Vivo Fluorescence Optical Imaging of Inflammatory MMP Activity Using an Activatable Fluorescent Imaging Agent

Non-invasive In Vivo Fluorescence Optical Imaging of Inflammatory MMP Activity Using an Activatable Fluorescent Imaging Agent

Ikke-invasiv<em&gt; In vivo</em&gt; Fluorescens optisk billeddannelse af inflammatorisk MMP Aktivitet Brug et aktiverbart Fluorescent Imaging Agent

This paper describes a non-invasive method for imaging matrix metalloproteinases (MMP)-activity by an activatable fluorescent probe, via in vivo ...

A Non-invasive Way to Isolate and Phenotype Cells from the Conjunctiva

En ikke-invasiv måde at isolere og fænotype celler fra konjunktiva

Traditionally, ocular surface cytology is studied with techniques such as spatula technology and brush technology. The problem with these techniques is ...

Detection of Enterohemorrhagic Escherichia Coli Colonization in Murine Host by Non-invasive In Vivo Bioluminescence System

Detection of Enterohemorrhagic Escherichia Coli Colonization in Murine Host by Non-invasive In Vivo Bioluminescence System

Påvisning af Enterohemorrhagic Escherichia Coli kolonisering i Murine vært ved Non-invasiv In Vivo bioluminescens System

Enterohemorrhagic E. coli (EHEC) O157:H7, which is a foodborne pathogen that causesdiarrhea, hemorrhagic colitis (HS), and hemolytic uremic syndrome ...