Name: non-invasive imaging of disseminated candidiasis in zebrafish larvae
Uploaded: 2012-07-30T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Non-invasive Imaging of Disseminated Candidiasis in Zebrafish Larvae at JoVE.com

המחברים מבקשים להודות במעבדה של ד&quot;ר קרול קים לאימונים microinjection, קלריסה הנרי עצה האצת פיתוח העובר ושימוש בציוד, ונתן לוסון לתרום fli1: דגים EGFP. אנו מודים לחברי המעבדה וילר קירות שון לקריאה ביקורתית של כתב היד. אנו רוצים גם להודות מארק Nilan לטיפול דגים עצות, ריאן Phennicie וקריסטין גאבור עבור ייעוץ טכני על הפרויקט הזה. עבודה זו מומנה על ידי אסיסטנט מחקר MAFES את האחים ק &#39;, האץ&#39; MAFES מענק E08913-08, וכן בפרס NCRR NIH P20RR016463 ר&#39; וילר.

כל הפרוטוקולים טיפול דג הזברה וניסויים שבוצעו תחת טיפול בבעלי חיים מוסדי ועדת שימוש (IACUC) פרוטוקול A2009-11-01. 1. Morpholino ומנות הזרקת הזחל משך הניסוי: * (10-15 דקות) <p class="jove_content" style=";text-align:right;di...

שיטת microinjection דג הזברה המוצג כאן שונה Gutzman et al. 34 ב שכאן אנחנו מדגימים הזרקת דרך שלפוחית ​​otic לתוך החדר למוח האחורי של הזחלים hpf 36-48. השיטה מאפשרת לנו לתאר להזרקה קבועה של 10-15 שמרים לתוך החדר למוח האחורי עם נזק לרקמות מופחת. פרוטוקול זה מייצר זיהום מקומי בתחיל?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> הערות (לא חובה) </td></tr><tr><td> הרבייה טנקים </td><td> בתי גידול מימיים </td><td> 2L </td><td></td></tr><tr><td> 1.7 מ&quot;ל צינורות </td><td> Axygen </td><td> MCT-175-C </td><td></td></tr><tr><td> מיידית האוקיינוס </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> S17957C </td><td></td></tr><tr><td> מנות נוספות עמוקים פטרי </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> 08-757-11z </td><td></td></tr><tr><td> סטנדרט פטרי מנות </td><td> VWR מדעי </td><td> 25384-302 </td><td></td></tr><tr><td> העברת בטפי להחדרת נוזלים </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> 13-711-7M </td><td></td></tr><tr><td> תמצית שמרים </td><td> VWR ScientiFIC </td><td> 90000-726 </td><td></td></tr><tr><td> Peptone </td><td> VWR מדעי </td><td> 90000-264 </td><td></td></tr><tr><td> דקסטרוז </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> D16-1 </td><td></td></tr><tr><td> אגר </td><td> VWR מדעי </td><td> 90000-760 </td><td></td></tr><tr><td> פנויה Hemocytometer </td><td> VWR מדעי </td><td> 82030-468 </td><td></td></tr><tr><td> פוספט שנאגרו מלוחים </td><td> VWR מדעי </td><td> 12001-986 </td><td></td></tr><tr><td> דומון Dumoxel מלקטת </td><td> VWR מדעי </td><td> 100501-806 </td><td></td></tr><tr><td> עץ פינים </td><td> VWR מדעי </td><td> 10805-018 </td><td></td></tr><tr><td> KimWipes </td><td> VWR מדעי </td><td> 300053-964 </td><td></td></tr><tr><td> נמוכה ממיסיםAgarose </td><td> VWR מדעי </td><td> 12001-722 </td><td></td></tr><tr><td> Agarose מנות הזרקה </td><td> VWR מדעי </td><td> 12002-102 </td><td></td></tr><tr><td> בראון הלוהט micropipette פולר </td><td> סאטר מכשירים </td><td> P-97 </td><td></td></tr><tr><td> מוטות זכוכית חלולים </td><td> סאטר מכשירים </td><td> BF120-69-10 </td><td> על מוטות זכוכית זכוכית חלקה על ידי חימום מעל בונזן מבער </td></tr><tr><td> פיפטה תיבת אחסון </td><td> סאטר מכשירים </td><td> BX10 </td><td></td></tr><tr><td> MPPI-3 הזרקת מערכת </td><td> מכשור מדעי יישומי </td><td> MPPI-3 </td><td></td></tr><tr><td> לחץ בגב היחידה </td><td> מכשור מדעי יישומי </td><td> BPU </td><td></td></tr><tr><td> Micropipette ערכת מחזיק </td><td> Appliאד מכשור מדעי </td><td> MPIP </td><td></td></tr><tr><td> רגל החלף </td><td> מכשור מדעי יישומי </td><td> FSW </td><td></td></tr><tr><td> Micromanipulator </td><td> מכשור מדעי יישומי </td><td> MM33 </td><td></td></tr><tr><td> בסיס מגנטי </td><td> מכשור מדעי יישומי </td><td> בסיס מגנטי </td><td></td></tr><tr><td> Tricaine sulfonate מתאן </td><td> המערבי כימיים בע&quot;מ </td><td> MS-222 </td><td></td></tr><tr><td> לנתח את היקף </td><td> אולימפוס </td><td> SZ61 בסיס העליון SZX-ILLB2-100 </td><td></td></tr><tr><td> Confocal מיקרוסקופ </td><td> אולימפוס </td><td> IX-81 עם מערכת FV-1000 סריקת לייזר confocal </td><td></td></tr><tr><td> TC-7 תרבות רקמות רולר תוף עם גלגל 14 אינץ בדיקה צינור </td><td> ניו ברונסוויק מדעי </td><td> TC-7 </td><td></td></tr><tr><td> הדמיה מנות </td><td> MatTek Corporation </td><td> P24G-1.0-10-F </td><td></td></tr><tr><td> פיפטה טיפים טוען מחטים </td><td> Eppendorf </td><td> 930001007 </td><td></td></tr><tr><td> צלחת רשתות יציקה </td><td> מסתגלת מדע כלים </td><td> TU-1 </td><td></td></tr><tr><td> מחוממת שלב </td><td> Bioptechs בע&quot;מ </td><td> דלתא T-5 </td><td></td></tr><tr><td> שטוחה מרית </td><td> VWR מדעי </td><td> 82027-486 </td><td></td></tr><tr><td> נפות פלסטיק </td><td> מרכולתם של Knutsford מחובר </td><td> 12 ס&quot;מ </td><td></td></tr><tr><td> Parafilm </td><td> VWR מדעי </td><td> 52858-000 </td><td></td></tr><tr><td> מערבולת Genie </td><td> VWR מדעי </td><td> 14216-184 </td><td></td></tr><tr><td> 150 x 16 מ&quot;מ צינורות תרבות </td><td> VWR מדעי </td><td> 60825-435 </td><td></td></tr><tr><td> Nanodrop </td><td> Thermo Scientific </td><td> ND 2000 </td><td></td></tr><tr><td> פנול אדום </td><td> VWR מדעי </td><td> 97062-478 </td><td></td></tr><tr><td> HCl </td><td> VWR מדעי </td><td> 87003-216 </td><td></td></tr><tr><td> NaCl </td><td> VWR מדעי </td><td> BDH4534-500GP </td><td></td></tr><tr><td> KCl </td><td> VWR מדעי </td><td> BDH4532-500GP </td><td></td></tr><tr><td> MgSO 4 </td><td> VWR מדעי </td><td> BDH0246-500GP </td><td></td></tr><tr><td> Ca (NO 3) 2 </td><td> VWR מדעי </td><td> BDH0226-500GP </td><td></td></tr><tr><td> HEPES </td><td> VWR מדעי </td><td> BDH4520-500GP </td><td></td></tR&gt; <tr><td> Morpholinos </td><td> GeneTools, LLC </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

non-invasive imaging of disseminated candidiasis in zebrafish larvae

קנדידה להפיץ נגרמת על ידי פתוגן קנדידה אלביקנס היא בעיה חשיבות קלינית אצל אנשים מאושפזים והיא קשורה עם תמותה המיוחס 30 עד 40% 6. קנדידה מערכתית נשלטת בדרך כלל על ידי חיסון מולדת, אנשים עם פגמים גנטיים מולדים רכיבי תא החיסון כגון NADPH אוקסידאז תא בלען רגישים יותר candidemia 7-9. מעט מאוד ידוע על הדינמיקה של C. אלביקנס אינטראקציה עם תאים חיסוניים מולדים in vivo. נרחב במבחנה קבעו כי מחוץ המארח ג אלביקנס germinates בתוך מקרופאגים, והוא נהרס במהירות על ידי נויטרופילים 10-14. במבחנה, אך שימושי, לא יכול לשחזר מורכבים בסביבה vivo, הכולל זמן תלויי הדינמיקה של רמות ציטוקינים, קבצים מצורפים תאי מטריקס ואנשי קשר אינטר 10, 15-18 </sup&gt;. כדי לבחון את התרומה של גורמים אלה באינטראקציה בין מאכסן לפתוגן, חשוב למצוא אורגניזם המודל לחזות היבטים אלה של זיהום הלא פולשני שורה שלמה חי. הזחל דג הזברה מציע שורה חוליות ייחודי צדדי לחקר זיהום. במשך 30 הימים הראשונים של התפתחות הזחלים דג הזברה יש רק הגנה החיסון המולדת 2, 19-21, לפשט את חקר מחלות כמו קנדידה שהפיצו, כי הם תלויים במידה רבה חסינות מולדת. גודל שקיפות קטנה של דג הזברה הזחלים לאפשר הדמיה של הדינמיקה זיהום ברמה התאית עבור המארחת והן הפתוגן. הזחלים מהונדס עם קורנים תאים חיסוניים מולדים יכול לשמש כדי לזהות סוגים מסוימים תאים המעורבים זיהום 22-24. שונה נגד תחושת oligonucleotides (Morpholinos) ניתן להשתמש כדי להפיל רכיבים חיסוניים שונים כגון NADPH אוקסידאז תא בלען וללמוד את השינויים בתגובה fungaאני זיהום 5. בנוסף על היתרונות האתיים והמעשיים של השימוש חוליות נמוך קטן, הזחלים דג הזברה מציעה אפשרות ייחודית תמונת הקרב ודק בין הפתוגן ומארח הן intravitally וגם בצבע. דג הזברה נעשה שימוש לזיהום מודל עבור מספר של חיידקים פתוגניים האדם, כבר סייעה התקדמות גדולה בהבנה שלנו של זיהום mycobacterial 3, 25. עם זאת, רק לאחרונה יש פתוגנים הרבה יותר גדול כמו פטריות השתמשו כדי להדביק את הזחל 5, 23, 26, ועד כה לא היתה תיאור ויזואלי מפורט של המתודולוגיה זיהום. כאן אנו מציגים טכניקות שלנו microinjection למוח האחורי החדר של דג הזברה 25 דקדקנית, כולל שינויים שלנו על הפרוטוקולים הקודמים. הממצאים שלנו תוך שימוש במודל דג הזברה הזחל על זיהום פטרייתי לסטות במבחנה ולחזק את הצורך לבחון בין מאכסן לפתוגן interaction בסביבה מורכבת של המארח ולא מערכת פשוטה של צלחת פטרי 5.

Watch this Scientific Journal Video about Non-invasive Imaging of Disseminated Candidiasis in Zebrafish Larvae at JoVE.com

Non-invasive Imaging of Disseminated Candidiasis in Zebrafish Larvae

ההתפתחות המהירה, גודל קטן השקיפות של דג הזברה הם יתרונות עצומים למחקר שליטה החיסון המולדת של זיהום<sup&gt; 1-4</sup&gt;. כאן אנו מדגימים טכניקות הדבקה הזחלים דג הזברה באמצעות הפתוגן פטרייתי<em&gt; קנדידה אלביקנס</em&gt; על ידי microinjection, המתודולוגיה בשימוש לאחרונה לערב פעילות תא בלען NADPH אוקסידאז שולט dimorphism פטרייתי<sup&gt; 5</sup&gt;.

הדמיה לא פולשנית של פטרת מופצת הזחלים דג הזברה

Disseminated candidiasis caused by the pathogen Candida albicans is a clinically important problem in hospitalized individuals and is associated with a 30 ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Non-invasive Imaging of Leukocyte Homing and Migration in vivo

Non-invasive Imaging of Leukocyte Homing and Migration in vivo

לא פולשני הדמיה של ביות ליקוציט והגירה In vivo</em

Two-photon (2P) microscopy is a high resolution imaging technique that has been broadly adapted by biologists.  The value of 2P microscopy is that it ...

Non-invasive Optical Imaging of the Lymphatic Vasculature of a Mouse

דימות אופטי לא פולשנית של כלי דם הלימפה של עכבר

The lymphatic  vascular system is an important component of the circulatory system that  maintains fluid homeostasis, provides immune surveillance, and ...

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

דגם לא פולשנית של Neuropathogenic<em&gt; Coli Escherichia</em&gt; זיהום בעכברוש הילודים

Investigation of the interactions between animal host and bacterial pathogen is only meaningful if the infection model employed replicates the principal ...

Complete Thymectomy in Adult Rats with Non-invasive Endotracheal Intubation

Thymectomy מלא בחולדות מבוגרות עם לא פולשני endotracheal אינטובציה

Thymectomy in neonatal rodents is an established and reliable procedure for immunological studies. However, in adult rats, complications of hemorrhage and ...

Modeling Mucosal Candidiasis in Larval Zebrafish by Swimbladder Injection

דוגמנות רירית פטרת בזחל דג הזברה על ידי הזרקת Swimbladder

Early defense against mucosal pathogens consists of both an epithelial barrier and innate immune cells. The immunocompetency of both, and their ...

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

הדמיה לא פולשנית של התגובה החיסונית המולדת בדגם דג הזברה הזחל של<em&gt; Streptococcus iniae</em&gt; זיהום

The aquatic pathogen, Streptococcus iniae, is responsible for over 100 million dollars in annual losses for the aquaculture industry and is capable of ...

A Non-invasive and Technically Non-intensive Method for Induction and Phenotyping of Experimental Bacterial Pneumonia in Mice

שיטה לא פולשנית הטכנית ללא עתירי עבור אינדוקצית phenotyping של דלקת ריאות חיידקית הניסויית עכברים

Although community-acquired pneumonia remains a major public health problem, murine models of bacterial pneumonia have recently facilitated significant ...

Non-invasive In Vivo Fluorescence Optical Imaging of Inflammatory MMP Activity Using an Activatable Fluorescent Imaging Agent

Non-invasive In Vivo Fluorescence Optical Imaging of Inflammatory MMP Activity Using an Activatable Fluorescent Imaging Agent

לא פולשני<em&gt; בויבו</em&gt; פלואורסצנטי הדמיה אופטית של פעילות MMP דלקתית באמצעות Activatable פלואורסצנטי סוכן הדמיה

This paper describes a non-invasive method for imaging matrix metalloproteinases (MMP)-activity by an activatable fluorescent probe, via in vivo ...

A Non-invasive Way to Isolate and Phenotype Cells from the Conjunctiva

דרך לא פולשנית לבודד תאים פנוטיפ מן הקונגרס

Traditionally, ocular surface cytology is studied with techniques such as spatula technology and brush technology. The problem with these techniques is ...

Detection of Enterohemorrhagic Escherichia Coli Colonization in Murine Host by Non-invasive In Vivo Bioluminescence System

Detection of Enterohemorrhagic Escherichia Coli Colonization in Murine Host by Non-invasive In Vivo Bioluminescence System

זיהוי של כיבוש Escherichia Coli Enterohemorrhagic מאתר מארח על-ידי המערכת לא פולשנית In Vivo ביולומינסנציה

Enterohemorrhagic E. coli (EHEC) O157:H7, which is a foodborne pathogen that causesdiarrhea, hemorrhagic colitis (HS), and hemolytic uremic syndrome ...