Name: non-invasive imaging of disseminated candidiasis in zebrafish larvae
Uploaded: 2012-07-30T13:00:00
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Gli autori desiderano ringraziare il laboratorio del Dr. Carol Kim per la formazione microiniezione, Clarissa Henry per un consiglio per l&#39;accelerazione dello sviluppo embrionale e l&#39;uso di attrezzature e Nathan Lawson per contribuire fli1: pesce EGFP. Ringraziamo i membri del laboratorio di Wheeler e Shawn Mura per la lettura critica del manoscritto. Vorremmo anche ringraziare Mark Nilan per la cura dei pesci e consiglio, e Ryan Phennicie e Kristin Gabor per un parere tecnico su questo progetto. Questo lavoro è stato finanziato da un assistente di ricerca MAFES ai fratelli K., un MAFES Hatch sovvenzione E08913-08, e un premio NIH NCRR P20RR016463 a R. Wheeler.

Tutti i protocolli di cura zebrafish ed esperimenti sono stati eseguiti sotto la cura degli animali e del Comitato Istituzionale uso (IACUC) protocollo A2009-11-01. 1. Morfolino e Piatti iniezione larvali Sperimentale durata: * (10-15 minuti) Grado di difficoltà: * <ol><li> Per le iniezioni a base di uova, preparare una soluzione al 2% di agarosio in acqua sterile e forno a microonde. Quando la sol...

Il metodo di microiniezione zebrafish qui presentata si differenzia da Gutzman et al. In 34 che qui si dimostra l&#39;iniezione attraverso la vescicola otica nel ventricolo rombencefalo di 36-48 larve HPF. Il metodo che permette di descrivere l&#39;iniezione costante del 10-15 lievito nel ventricolo rombencefalo con danno tissutale ridotta. Questo protocollo produce inizialmente una infezione locale che si propaga attraverso il corpo da 24 HPI (figura 1) e determina letalità signifi...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome del reattivo </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td><td> Commenti (opzionale) </td></tr><tr><td> Vasche di deposizione </td><td> Habitat acquatici </td><td> 2L </td><td></td></tr><tr><td> 1,7 ml provette </td><td> Axygen </td><td> MCT-175-C </td><td></td></tr><tr><td> Istantanea Ocean </td><td> Fisher Scientific </td><td> S17957C </td><td></td></tr><tr><td> Extra piastre di Petri profonde </td><td> Fisher Scientific </td><td> 08-757-11Z </td><td></td></tr><tr><td> Standard Scatole Petri </td><td> VWR Scientific </td><td> 25384-302 </td><td></td></tr><tr><td> Pipette di trasferimento </td><td> Fisher Scientific </td><td> 13-711-7M </td><td></td></tr><tr><td> Estratto di lievito </td><td> VWR Scientificafic </td><td> 90000-726 </td><td></td></tr><tr><td> Peptone </td><td> VWR Scientific </td><td> 90000-264 </td><td></td></tr><tr><td> Destrosio </td><td> Fisher Scientific </td><td> D16-1 </td><td></td></tr><tr><td> Agar </td><td> VWR Scientific </td><td> 90000-760 </td><td></td></tr><tr><td> Emocitometro monouso </td><td> VWR Scientific </td><td> 82030-468 </td><td></td></tr><tr><td> Soluzione tampone fosfato </td><td> VWR Scientific </td><td> 12001-986 </td><td></td></tr><tr><td> Dumont Dumoxel Pinzetta </td><td> VWR Scientific </td><td> 100501-806 </td><td></td></tr><tr><td> Tasselli di legno </td><td> VWR Scientific </td><td> 10805-018 </td><td></td></tr><tr><td> Kimwipes </td><td> VWR Scientific </td><td> 300053-964 </td><td></td></tr><tr><td> Low MeltAgarosio </td><td> VWR Scientific </td><td> 12001-722 </td><td></td></tr><tr><td> Agarosio per i piatti di iniezione </td><td> VWR Scientific </td><td> 12002-102 </td><td></td></tr><tr><td> Flaming Brown Micropipetta Puller </td><td> Sutter Instruments </td><td> P-97 </td><td></td></tr><tr><td> Bacchette di vetro Hollow </td><td> Sutter Instruments </td><td> BF120-69-10 </td><td> Per le canne di vetro vetro liscio dal riscaldamento sopra becco Bunsen </td></tr><tr><td> Pipettare Scatola </td><td> Sutter Instruments </td><td> BX10 </td><td></td></tr><tr><td> MPPI-3 Sistema di iniezione </td><td> Applicata strumentazione scientifica </td><td> MPPI-3 </td><td></td></tr><tr><td> Unità di pressione Indietro </td><td> Applicata strumentazione scientifica </td><td> BPU </td><td></td></tr><tr><td> Micropipetta Holder Kit </td><td> AppliStrumentazione scientifica ed </td><td> MPIP </td><td></td></tr><tr><td> Foot Switch </td><td> Applicata strumentazione scientifica </td><td> FSW </td><td></td></tr><tr><td> Micromanipolatore </td><td> Applicata strumentazione scientifica </td><td> MM33 </td><td></td></tr><tr><td> Base magnetica </td><td> Applicata strumentazione scientifica </td><td> Base magnetica </td><td></td></tr><tr><td> Tricaine metano solfonato </td><td> Occidentale Chemical Inc. </td><td> MS-222 </td><td></td></tr><tr><td> Dissezione Scope </td><td> Olimpo </td><td> SZ61 top SZX-ILLB2-100 di base </td><td></td></tr><tr><td> Microscopio confocale </td><td> Olimpo </td><td> IX-81 con la FV-1000 sistema di scansione laser confocale </td><td></td></tr><tr><td> TC-7 Roller Tissue Culture tamburo della ruota con il 14 pollici provetta </td><td> New Brunswick Scientific </td><td> TC-7 </td><td></td></tr><tr><td> Imaging Piatti </td><td> MatTek Corporation </td><td> P24G-1.0-10-F </td><td></td></tr><tr><td> Puntali per il caricamento di aghi </td><td> Eppendorf </td><td> 930001007 </td><td></td></tr><tr><td> Griglie piastra colata </td><td> Adaptive Scienza Tools </td><td> TU-1 </td><td></td></tr><tr><td> Fase riscaldata </td><td> Bioptechs Inc. </td><td> Delta T-5 </td><td></td></tr><tr><td> Spatola piatta </td><td> VWR Scientific </td><td> 82027-486 </td><td></td></tr><tr><td> Setacci di plastica </td><td> Wares di Knutsford online </td><td> 12 cm </td><td></td></tr><tr><td> Parafilm </td><td> VWR Scientific </td><td> 52858-000 </td><td></td></tr><tr><td> Vortex Genie </td><td> VWR Scientific </td><td> 14216-184 </td><td></td></tr><tr><td> 16 x 150 mm Cultura tubi </td><td> VWR Scientific </td><td> 60825-435 </td><td></td></tr><tr><td> NanoDrop </td><td> Thermo Scientific </td><td> ND 2000 </td><td></td></tr><tr><td> Rosso fenolo </td><td> VWR Scientific </td><td> 97062-478 </td><td></td></tr><tr><td> HCl </td><td> VWR Scientific </td><td> 87003-216 </td><td></td></tr><tr><td> NaCl </td><td> VWR Scientific </td><td> BDH4534-500GP </td><td></td></tr><tr><td> KCl </td><td> VWR Scientific </td><td> BDH4532-500GP </td><td></td></tr><tr><td> MgSO 4 </td><td> VWR Scientific </td><td> BDH0246-500GP </td><td></td></tr><tr><td> Ca (NO 3) 2 </td><td> VWR Scientific </td><td> BDH0226-500GP </td><td></td></tr><tr><td> HEPES </td><td> VWR Scientific </td><td> BDH4520-500GP </td><td></td></tr&gt; <tr><td> Morpholinos </td><td> GeneTools, LLC </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

non-invasive imaging of disseminated candidiasis in zebrafish larvae

Candidiasi disseminata causata dal patogeno Candida albicans è un problema importante negli individui clinicamente ospedalizzati e viene associato ad una mortalità 30 al 40% attribuibile 6. Candidosi sistemica è normalmente controllata da immunità innata, e gli individui con difetti genetici in cellule immunitarie innate componenti come NADPH ossidasi dei fagociti sono più sensibili alla candidemia 7-9. Molto poco si sa circa la dinamica di C. l&#39;interazione con le innate albicans cellule immunitarie in vivo. Ampia studi in vitro hanno stabilito che al di fuori dello Stato membro ospitante C. albicans germina all&#39;interno dei macrofagi, ed è rapidamente distrutto da neutrofili 10-14. Gli studi in vitro, anche se utile, non può ricapitolare il complesso in un ambiente vivo, che include dipendenti dal tempo la dinamica dei livelli di citochine, gli allegati della matrice extracellulare, e contatti intercellulari 10, 15-18 </sup&gt;. Per sondare il contributo di questi fattori in interazione ospite-patogeno, è fondamentale trovare un organismo modello per visualizzare questi aspetti di infezione non-invasiva in un ospite in diretta intatto. La larva zebrafish offre un ospite vertebrato unico e versatile per lo studio di infezione. Per i primi 30 giorni di larve di sviluppo zebrafish hanno solo le difese immunitarie innate 2, 19-21, semplificando lo studio di malattie come la candidosi disseminata, che sono altamente dipendenti sull&#39;immunità innata. Le dimensioni ridotte e la trasparenza delle larve zebrafish consentire l&#39;imaging delle dinamiche dell&#39;infezione a livello cellulare sia per ospite e patogeno. Larve transgenica con fluorescenti innate cellule immunitarie possono essere utilizzate per identificare specifici tipi di cellule coinvolte nella infezione 22-24. Modificati oligonucleotidi antisenso (Morpholinos) possono essere utilizzati per abbattere i vari componenti del sistema immunitario come NADPH ossidasi dei fagociti e di studiare i cambiamenti in risposta a Fungal infezione 5. Oltre ai vantaggi etici e pratici di utilizzo di un piccolo vertebrato inferiore, le larve zebrafish offre la possibilità unica di immagine la battaglia campale tra patogeno e ospite sia intravitally e nel colore. Il pesce zebra è stato utilizzato per l&#39;infezione modello per un numero di batteri patogeni umani, e ha contribuito a notevoli progressi nella nostra comprensione delle infezioni da micobatteri 3, 25. Tuttavia, solo recentemente sono molto più grandi patogeni quali funghi stati utilizzati per infettare larva 5, 23, 26, e ad oggi non c&#39;è stata una descrizione dettagliata visiva della metodologia infezione. Qui vi presentiamo le nostre tecniche di microiniezione ventricolo rombencefalo di prim 25 zebrafish, comprese le nostre modifiche ai protocolli precedenti. I nostri risultati con il modello larvale zebrafish per infezione fungina divergono da studi in vitro e rafforzare la necessità di esaminare l&#39;ospite-patogeno Interaazione nel complesso contesto del paese ospitante, piuttosto che il sistema semplificato del piatto Petri 5.

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Non-invasive Imaging of Disseminated Candidiasis in Zebrafish Larvae

Il rapido sviluppo, di piccola dimensione e la trasparenza delle zebrafish sono vantaggi enormi per lo studio del sistema immunitario innato il controllo delle infezioni<sup&gt; 1-4</sup&gt;. Qui mostriamo le tecniche per infettare le larve di zebrafish con il patogeno fungino<em&gt; Candida albicans</em&gt; Con microiniezione, la metodologia recentemente utilizzata per coinvolgere fagocita l&#39;attività NADPH ossidasi nel controllo del dimorfismo fungino<sup&gt; 5</sup&gt;.

Non invasiva Imaging di candidosi disseminata nelle larve Zebrafish

Disseminated candidiasis caused by the pathogen Candida albicans is a clinically important problem in hospitalized individuals and is associated with a 30 ...

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Two-photon (2P) microscopy is a high resolution imaging technique that has been broadly adapted by biologists.  The value of 2P microscopy is that it ...

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Non invasiva Modello di neuropatogeno<em&gt; Escherichia coli</em&gt; L&#39;infezione neonatale nel ratto

Investigation of the interactions between animal host and bacterial pathogen is only meaningful if the infection model employed replicates the principal ...

Complete Thymectomy in Adult Rats with Non-invasive Endotracheal Intubation

Thymectomy completa in ratti adulti con non-invasiva intubazione endotracheale

Thymectomy in neonatal rodents is an established and reliable procedure for immunological studies. However, in adult rats, complications of hemorrhage and ...

Modeling Mucosal Candidiasis in Larval Zebrafish by Swimbladder Injection

Modellazione mucosa Candidosi in Zebrafish larvale da vescica natatoria Injection

Early defense against mucosal pathogens consists of both an epithelial barrier and innate immune cells. The immunocompetency of both, and their ...

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

Imaging non invasiva della risposta immunitaria innata in un modello di Zebrafish larvale<em&gt; Streptococcus iniae</em&gt; Infezione

The aquatic pathogen, Streptococcus iniae, is responsible for over 100 million dollars in annual losses for the aquaculture industry and is capable of ...

A Non-invasive and Technically Non-intensive Method for Induction and Phenotyping of Experimental Bacterial Pneumonia in Mice

Un metodo non invasivo e tecnicamente non intensiva per l&#39;induzione e Fenotipizzazione Sperimentale polmonite batterica nei topi

Although community-acquired pneumonia remains a major public health problem, murine models of bacterial pneumonia have recently facilitated significant ...

Non-invasive In Vivo Fluorescence Optical Imaging of Inflammatory MMP Activity Using an Activatable Fluorescent Imaging Agent

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Non invasivo<em&gt; In Vivo</em&gt; Fluorescenza ottica di imaging dell&#39;attività MMP infiammatoria utilizzando un agente fluorescente di imaging attivo

This paper describes a non-invasive method for imaging matrix metalloproteinases (MMP)-activity by an activatable fluorescent probe, via in vivo ...

A Non-invasive Way to Isolate and Phenotype Cells from the Conjunctiva

Un modo non invasivo per isolare e fenotipo le cellule della Conjunctiva

Traditionally, ocular surface cytology is studied with techniques such as spatula technology and brush technology. The problem with these techniques is ...

Detection of Enterohemorrhagic Escherichia Coli Colonization in Murine Host by Non-invasive In Vivo Bioluminescence System

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Rilevamento della colonizzazione di Escherichia Coli enteroemorragica in murino Host di sistema Non invasivo In Vivo bioluminescenza

Enterohemorrhagic E. coli (EHEC) O157:H7, which is a foodborne pathogen that causesdiarrhea, hemorrhagic colitis (HS), and hemolytic uremic syndrome ...