Name: non-invasive imaging of disseminated candidiasis in zebrafish larvae
Uploaded: 2012-07-30T13:00:00
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저자는 장비의 배아 개발 및 사용 속도에 조언을 microinjection 교육, 고모 헨리 박사 캐롤 김 연구실 감사드립니다, 그리고 fli1 기여에 대한 나단 로손과 같습니다 EGFP 생선. 우리는 원고의 비판적 읽기를 위해 윌러 연구소와 션의 성벽의 회원 감사드립니다. 우리는 또한이 프로젝트에 대한 기술적 조언 생선 관심과 조언을 마크 Nilan, 그리고 라이언 Phennicie와 크리스틴 가보 감사드립니다. 이 작품은 K. 형제, MAFES 해치 기금 E08913-08, 그리고 R. 휠러에 대한 NIH NCRR 보너스 P20RR016463에 MAFES 연구 assistantship에 의해 재정 지원되었다.

모든 zebrafish 관리 프로토콜 및 실험 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC) 프로토콜 A2009-11-01하에 수행되었다. 1. Morpholino와 애벌레 사출 요리 실험 기간 : * (10-15분) 어려움의 정도 : * <ol><li> 달걀 주사 들어, 멸균 물, 전자렌지에 2 % 아가로 오스 솔루션을 준비합니다. 그것의 반을 가득 때까지 솔루션은 별도...

여기서 제시 zebrafish microinjection 방법은 Gutzman 외 다릅니다. 34 저 여기에 우리가 36-48 hpf의 애벌레의 hindbrain의 뇌실에 귀의 소포를 통해 주사를 보여줍니다. 우리가 설명하는 방법은 감소 조직 손상과 hindbrain의 꽂혔어 10-15 효모의 일관된 주입을 허용합니다. 이 프로토콜은 24 hpi (그림 1)과 상당한 주죠 / 병적 5의 결과에 의해 신체 전반에 걸쳐 펼쳐지는 초기에 현...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 댓글 (옵션) </td></tr><tr><td> 산란 탱크 </td><td> 수생 서식처 </td><td> 2L </td><td></td></tr><tr><td> 1.7 ML 튜브 </td><td> Axygen </td><td> MCT-175-C </td><td></td></tr><tr><td> 인스턴트 오션 </td><td> 피셔 과학 </td><td> S17957C </td><td></td></tr><tr><td> 추가 깊은 배양 접시 </td><td> 피셔 과학 </td><td> 08-757-11Z </td><td></td></tr><tr><td> 표준 배양 접시 </td><td> VWR 과학 </td><td> 25384-302 </td><td></td></tr><tr><td> 전송 pipettes </td><td> 피셔 과학 </td><td> 13-711-7M </td><td></td></tr><tr><td> 효모 엑기스 </td><td> VWR Scientific </td><td> 90000-726 </td><td></td></tr><tr><td> 펩톤 </td><td> VWR 과학 </td><td> 90000-264 </td><td></td></tr><tr><td> 우선당 </td><td> 피셔 과학 </td><td> D16-1 </td><td></td></tr><tr><td> 한천 </td><td> VWR 과학 </td><td> 90000-760 </td><td></td></tr><tr><td> 일회용 Hemocytometer </td><td> VWR 과학 </td><td> 82030-468 </td><td></td></tr><tr><td> 인산염은 염분 버퍼 </td><td> VWR 과학 </td><td> 12001-986 </td><td></td></tr><tr><td> 뒤몽 Dumoxel 족집게 </td><td> VWR 과학 </td><td> 100501-806 </td><td></td></tr><tr><td> 나무 Dowels </td><td> VWR 과학 </td><td> 10805-018 </td><td></td></tr><tr><td> KimWipes </td><td> VWR 과학 </td><td> 300053-964 </td><td></td></tr><tr><td> 녹음 낮음아가로 오스 </td><td> VWR 과학 </td><td> 12001-722 </td><td></td></tr><tr><td> 사출 요리 아가로 오스 </td><td> VWR 과학 </td><td> 12002-102 </td><td></td></tr><tr><td> 브라운 Micropipette 풀러에 불타는 </td><td> 셔터 인 스트 루먼트 </td><td> P-97 </td><td></td></tr><tr><td> 중공 유리 막대 </td><td> 셔터 인 스트 루먼트 </td><td> BF120-69-10 </td><td> 분젠 버너 이상 가열하여 유리 봉을위한 부드러운 유리 </td></tr><tr><td> 피펫 스토리지 박스 </td><td> 셔터 인 스트 루먼트 </td><td> BX10 </td><td></td></tr><tr><td> MPPI-3 분사 시스템 </td><td> 응용 과학 계측 </td><td> MPPI-3 </td><td></td></tr><tr><td> 위로 압력 단위 </td><td> 응용 과학 계측 </td><td> BPU </td><td></td></tr><tr><td> Micropipette 홀더 키트 </td><td> Appli에드 과학 계측 </td><td> MPIP </td><td></td></tr><tr><td> 풋 스위치 </td><td> 응용 과학 계측 </td><td> FSW </td><td></td></tr><tr><td> Micromanipulator </td><td> 응용 과학 계측 </td><td> MM33 </td><td></td></tr><tr><td> 마그네틱베이스 </td><td> 응용 과학 계측 </td><td> 마그네틱베이스 </td><td></td></tr><tr><td> Tricaine의 메탄 산염 </td><td> 서양 화학 주식 회사 </td><td> MS-222 </td><td></td></tr><tr><td> 범위를 해부 </td><td> 올림포스 산 </td><td> SZ61 최고 SZX-ILLB2-100베이스 </td><td></td></tr><tr><td> 공촛점 현미경 </td><td> 올림포스 산 </td><td> FV-1000 레이저 스캐닝 공촛점 시스템 IX-81 </td><td></td></tr><tr><td> 14 인치 시험관 휠과 TC-7 조직 문화 롤러 드럼 </td><td> 뉴 브 런 즈윅 과학 </td><td> TC-7 </td><td></td></tr><tr><td> 이미징 요리 </td><td> MatTek 주식 회사 </td><td> P24G-1.0-10-F </td><td></td></tr><tr><td> 바늘을로드하는 피펫 팁 </td><td> Eppendorf </td><td> 930,001,007 </td><td></td></tr><tr><td> 플레이트 붓는 격자 </td><td> 적응형 과학 도구 </td><td> TU-1 </td><td></td></tr><tr><td> 열띤 무대 </td><td> Bioptechs 주식 회사 </td><td> 델타 T-5 </td><td></td></tr><tr><td> 작은 주걱 </td><td> VWR 과학 </td><td> 82027-486 </td><td></td></tr><tr><td> 플라스틱 Sieves </td><td> Knutsford 온라인의 상품 </td><td> 12cm </td><td></td></tr><tr><td> Parafilm </td><td> VWR 과학 </td><td> 52858-000 </td><td></td></tr><tr><td> 와동 지니 </td><td> VWR 과학 </td><td> 14216-184 </td><td></td></tr><tr><td> 16 X 150mm 문화 튜브 </td><td> VWR 과학 </td><td> 60825-435 </td><td></td></tr><tr><td> Nanodrop </td><td> 써모 과학 </td><td> ND 2000 </td><td></td></tr><tr><td> 페놀 레드 </td><td> VWR 과학 </td><td> 97062-478 </td><td></td></tr><tr><td> HCL </td><td> VWR 과학 </td><td> 87003-216 </td><td></td></tr><tr><td> NaCl </td><td> VWR 과학 </td><td> BDH4534-500GP </td><td></td></tr><tr><td> KCl </td><td> VWR 과학 </td><td> BDH4532-500GP </td><td></td></tr><tr><td> MgSO 4 </td><td> VWR 과학 </td><td> BDH0246-500GP </td><td></td></tr><tr><td> 칼슘 (NO 3) 2 </td><td> VWR 과학 </td><td> BDH0226-500GP </td><td></td></tr><tr><td> HEPES </td><td> VWR 과학 </td><td> BDH4520-500GP </td><td></td></tR&gt; <tr><td> Morpholinos </td><td> GeneTools, LLC </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

non-invasive imaging of disseminated candidiasis in zebrafish larvae

병원균 칸디다 albicans에 의한 전파 칸디다 증은 입원 개인에서 임상적으로 중요한 문제이며 30~40% 기인 사망률 6 연결되어 있습니다. 침투성 칸디다 증은 보통 타고난 면역에 의해 제어와 같은 식세포 NADPH 산화 효소로서 타고난 면역 세포 구성 요소의 유전적 결함을 가진 개인은 candidemia 7-9에 더 감염될 수 있습니다된다. 아주 조금은 C.의 역학에 대한 알려져있다 생체내의 타고난 면역 세포와 albicans 상호 작용. 체외 연구에서 광범위한 설립 있지 않은 호스트 C의 외부 albicans은 macrophages 안에서 germinates, 빠르게 neutrophils 10-14 의해 파괴된다. 체외 연구에서 유용하지만, 시토킨 레벨, 세포외 기질 첨부 파일 및 세포 연락처 10 시간 종속적인 역학을 포함 생체내 환경에서 복잡한 요점을 되풀이 수 없습니다 15-18 </sup&gt;. 호스트 병원체 상호 작용에서 이러한 요인 공헌을 알아내기 위해서는 살아있는 그대로 호스트에 비 invasively 감염의 이러한 측면을 시각화하는 모델 생물을 찾을 중요합니다. zebrafish의 유충이 감염 연구를위한 독특하고 다양한 척추 호스트를 제공합니다. 개발 zebrafish 애벌레의 첫 30 일 동안에만 타고난 면역 방어 2, 19-21는 타고난 면역력에 크게 의존 전파 칸디다 증과 같은 질병의 연구를 단순화합니다. zebrafish 애벌레의 작은 크기와 투명성은 모두 호스트 및 병원체에 대한 세포 수준에서 감염 역학 이미징을 가능하게합니다. 타고난 면역 세포를 fluorescing있는 유전자 변형 애벌레는 감염 22-24에 관련된 특정 세포 유형을 식별하는 데 사용할 수 있습니다. 수정된 안티 센스 oligonucleotides (Morpholinos)은 같은 식세포 NADPH 산화 효소 등 다양한 면역 요소를 허물고 funga에 대한 응답으로 변화를 연구하는 데 사용할 수 있습니다난 감염 5. 작은 낮은 척추를 사용하는 윤리적하고 실용적인 장점 이외에도, zebrafish 애벌레 이미지 모두 intravitally와 색상의 병원체와 호스트 간의 총력전을에 독특한 기능을 제공한다. zebrafish는 인간 병원성 박테리아의 여러 모델 감염에 사용되었으며, mycobacterial 감염 3 25 우리의 이해에 큰 발전의 수단이되었습니다. 단, 최근에 이러한 유충 5를 감염하는 데 사용되었습니다 진균류, 23, 26, 훨씬 더 많은 병원체를 가지고 있고, 감염 방법에 대한 자세한 영상 설명도 없어 데이트. 여기에서 우리는 이전 프로토콜에 대한 우리의 수정을 포함하여 꼼꼼한 25 zebrafish의 hindbrain의 뇌실의 microinjection을 위해 우리의 기술을 소개합니다. 곰팡이 감염 애벌레 zebrafish 모델을 사용하여 우리의 연구 결과는 체외 연구에서에서 갈리는과 호스트 병원체 intera 검사의 필요성을 강화오히려 배양 접시 5 간소화 시스템보다 호스트의 복잡한 환경에서 ction.

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Non-invasive Imaging of Disseminated Candidiasis in Zebrafish Larvae

zebrafish의 급속한 발전, 소형 크기 및 투명성은 감염의 타고난 면역 제어 연구를위한 엄청난 장점입니다<sup&gt; 1-4</sup&gt;. 여기 곰팡이 병원균을 사용 zebrafish 애벌레를 감염시키는 기술을 입증<em&gt; 칸디다 albicans</em&gt; microinjection하여 방법론는 최근 곰팡이 동종 이형 통제하에 식세포 NADPH 산화 효소 활동을 연루하는 데 사용<sup&gt; 5</sup&gt;.

Zebrafish 애벌레의 분해해 칸디다 증의 비침습 이미징

Disseminated candidiasis caused by the pathogen Candida albicans is a clinically important problem in hospitalized individuals and is associated with a 30 ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Non-invasive Imaging of Leukocyte Homing and Migration in vivo

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백혈구 호밍 및 마이 그 레이션의 비침습 영상 생체내에</em

Two-photon (2P) microscopy is a high resolution imaging technique that has been broadly adapted by biologists.  The value of 2P microscopy is that it ...

연구

면역학 및 감염병학

Non-invasive Optical Imaging of the Lymphatic Vasculature of a Mouse

마우스의 림프 Vasculature의 비 침습적 광학 이미징

The lymphatic  vascular system is an important component of the circulatory system that  maintains fluid homeostasis, provides immune surveillance, and ...

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

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Neuropathogenic의 비 침습 모델<em&gt; 대장균</em&gt; 신생아 쥐에 감염

Investigation of the interactions between animal host and bacterial pathogen is only meaningful if the infection model employed replicates the principal ...

Complete Thymectomy in Adult Rats with Non-invasive Endotracheal Intubation

비 침습적 기관 내 삽관 성인 쥐에서 전체 흉선

Thymectomy in neonatal rodents is an established and reliable procedure for immunological studies. However, in adult rats, complications of hemorrhage and ...

Modeling Mucosal Candidiasis in Larval Zebrafish by Swimbladder Injection

Swimbladder 주입에 의해 애벌레 Zebrafish의 점막 칸디다증 모델링

Early defense against mucosal pathogens consists of both an epithelial barrier and innate immune cells. The immunocompetency of both, and their ...

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

의 Zebrafish의 애벌레 모델의 선천성 면역 반응의 비 침습적 영상<em&gt; 연쇄상 구균 iniae</em&gt; 감염

The aquatic pathogen, Streptococcus iniae, is responsible for over 100 million dollars in annual losses for the aquaculture industry and is capable of ...

A Non-invasive and Technically Non-intensive Method for Induction and Phenotyping of Experimental Bacterial Pneumonia in Mice

마우스의 실험 세균성 폐렴의 유도 및 표현형에 대한 비 침습적 및 기술적 비 집약적 인 방법

Although community-acquired pneumonia remains a major public health problem, murine models of bacterial pneumonia have recently facilitated significant ...

Non-invasive In Vivo Fluorescence Optical Imaging of Inflammatory MMP Activity Using an Activatable Fluorescent Imaging Agent

Non-invasive In Vivo Fluorescence Optical Imaging of Inflammatory MMP Activity Using an Activatable Fluorescent Imaging Agent

비 침습적<em&gt; In Vivo</em&gt; 활성화 가능한 형광 이미징 에이전트를 사용한 염증성 MMP 활성의 형광 광학 이미징

This paper describes a non-invasive method for imaging matrix metalloproteinases (MMP)-activity by an activatable fluorescent probe, via in vivo ...

A Non-invasive Way to Isolate and Phenotype Cells from the Conjunctiva

결막에서 세포를 분리하고 표현하기위한 비 침습적 방법

Traditionally, ocular surface cytology is studied with techniques such as spatula technology and brush technology. The problem with these techniques is ...

Detection of Enterohemorrhagic Escherichia Coli Colonization in Murine Host by Non-invasive In Vivo Bioluminescence System

Detection of Enterohemorrhagic Escherichia Coli Colonization in Murine Host by Non-invasive In Vivo Bioluminescence System

생물 발광 시스템 비-침략 적 비보에 의해 Murine 호스트에서 Enterohemorrhagic 대장균 식민지의 검출

Enterohemorrhagic E. coli (EHEC) O157:H7, which is a foodborne pathogen that causesdiarrhea, hemorrhagic colitis (HS), and hemolytic uremic syndrome ...