Name: non-invasive imaging of disseminated candidiasis in zebrafish larvae
Uploaded: 2012-07-30T13:00:00
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Os autores gostariam de agradecer ao laboratório do Dr. Carol Kim para a formação microinjeção, Clarissa Henry para o conselho, que visa acelerar o desenvolvimento do embrião e utilização de equipamentos, e Nathan Lawson para contribuir fli1: peixe EGFP. Agradecemos os membros do laboratório Wheeler e Shawn Paredes para a leitura crítica do manuscrito. Gostaríamos também de agradecer a Mark Nilan para cuidado dos peixes e conselhos, e Ryan Phennicie e Kristin Gabor para consultoria técnica sobre este projeto. Este trabalho foi financiado por um estágio de pesquisa para MAFES K. Brothers, um MAFES escotilha concessão E08913-08, e um prêmio NIH NCRR P20RR016463 a R. Wheeler.

Todos os protocolos de atendimento zebrafish e experimentos foram realizados sob Animal Care Institucional e Comitê de Uso (IACUC) protocolo A2009-11-01. 1. Morfolino e Pratos de injeção larval Duração Experimental: * (10-15 minutos) Grau de dificuldade: * <ol><li> Para injecções de ovo, preparar uma solução a 2% de agarose em água estéril e microondas. Quando a solução tiver arrefecido...

O método de microinjecção peixe-zebra aqui apresentado difere da Gutzman et al. 34 em que aqui se demonstrar a injecção através da vesícula ótica para o ventrículo rombencéfalo de 36-48 larvas hpf. O método permite que descrevemos injectável consistente de 10-15 levedura para o ventrículo rombencéfalo com danos nos tecidos reduzida. Este protocolo produz uma infecção local que inicialmente se espalha em todo o corpo por 24 hpi (Figura 1) e resulta em letalidade signif...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome do reagente </td><td> Companhia </td><td> Número de Catálogo </td><td> Comentários (opcional) </td></tr><tr><td> Tanques de desova </td><td> Habitats aquáticos </td><td> 2L </td><td></td></tr><tr><td> 1,7 ml tubos </td><td> Axygen </td><td> MCT-175-C </td><td></td></tr><tr><td> Instant Ocean </td><td> Fisher Scientific </td><td> S17957C </td><td></td></tr><tr><td> Extra profundo placas de Petri </td><td> Fisher Scientific </td><td> 08-757-11Z </td><td></td></tr><tr><td> Padrão placas de Petri </td><td> VWR Scientific </td><td> 25384-302 </td><td></td></tr><tr><td> Pipetas de transferência </td><td> Fisher Scientific </td><td> 13-711-7M </td><td></td></tr><tr><td> Extracto de levedura </td><td> VWR científic </td><td> 90000-726 </td><td></td></tr><tr><td> Peptona </td><td> VWR Scientific </td><td> 90000-264 </td><td></td></tr><tr><td> Dextrose </td><td> Fisher Scientific </td><td> D16-1 </td><td></td></tr><tr><td> Agar </td><td> VWR Scientific </td><td> 90000-760 </td><td></td></tr><tr><td> Hemocitômetro descartável </td><td> VWR Scientific </td><td> 82030-468 </td><td></td></tr><tr><td> Tampão fosfato salino </td><td> VWR Scientific </td><td> 12001-986 </td><td></td></tr><tr><td> Dumont Dumoxel Pinças </td><td> VWR Scientific </td><td> 100501-806 </td><td></td></tr><tr><td> Cavilhas de madeira </td><td> VWR Scientific </td><td> 10805-018 </td><td></td></tr><tr><td> KimWipes </td><td> VWR Scientific </td><td> 300053-964 </td><td></td></tr><tr><td> Low MeltAgarose </td><td> VWR Scientific </td><td> 12001-722 </td><td></td></tr><tr><td> Agarose para pratos de injeção </td><td> VWR Scientific </td><td> 12002-102 </td><td></td></tr><tr><td> Flaming Brown Micropipeta Puller </td><td> Sutter Instruments </td><td> P-97 </td><td></td></tr><tr><td> Ocos bastões de vidro </td><td> Sutter Instruments </td><td> BF120-69-10 </td><td> Para bastões de vidro vidro liso por aquecimento sobre Bico de Bunsen </td></tr><tr><td> Pipetar Caixa de armazenamento </td><td> Sutter Instruments </td><td> BX10 </td><td></td></tr><tr><td> MPPI-3 Sistema de injecção </td><td> Aplicada Instrumentação Científica </td><td> MPPI-3 </td><td></td></tr><tr><td> Unidade de pressão Voltar </td><td> Aplicada Instrumentação Científica </td><td> BPU </td><td></td></tr><tr><td> Micropipeta kit Titular </td><td> Aplicaçãoed Instrumentação Científica </td><td> MPIP </td><td></td></tr><tr><td> Foot Switch </td><td> Aplicada Instrumentação Científica </td><td> FSW </td><td></td></tr><tr><td> Micromanipulador </td><td> Aplicada Instrumentação Científica </td><td> MM33 </td><td></td></tr><tr><td> Base Magnética </td><td> Aplicada Instrumentação Científica </td><td> Base Magnética </td><td></td></tr><tr><td> Tricaina sulfonato de metano </td><td> Ocidental Chemical Inc. </td><td> MS-222 </td><td></td></tr><tr><td> Dissecando Âmbito </td><td> Olimpo </td><td> SZ61 base de SZX-ILLB2 top-100 </td><td></td></tr><tr><td> Microscópio confocal </td><td> Olimpo </td><td> IX-81 com FV-1000 sistema de varredura a laser confocal </td><td></td></tr><tr><td> TC-7 Tissue monocilíndrico Cultura com 14 polegadas roda tubo de ensaio </td><td> New Brunswick Scientific </td><td> TC-7 </td><td></td></tr><tr><td> Pratos de imagem </td><td> MatTek Corporação </td><td> P24G-1.0-10-F </td><td></td></tr><tr><td> Ponteira para colocar as agulhas </td><td> Eppendorf </td><td> 930001007 </td><td></td></tr><tr><td> Grades Placa vazamento </td><td> Ferramentas adaptativas Ciência </td><td> TU-1 </td><td></td></tr><tr><td> Estágio aquecida </td><td> Bioptechs Inc. </td><td> Delta T-5 </td><td></td></tr><tr><td> Espátula Plana </td><td> VWR Scientific </td><td> 82027-486 </td><td></td></tr><tr><td> Peneiras de plástico </td><td> Wares de Knutsford online </td><td> 12 centímetros </td><td></td></tr><tr><td> Parafilm </td><td> VWR Scientific </td><td> 52858-000 </td><td></td></tr><tr><td> Vortex Genie </td><td> VWR Scientific </td><td> 14216-184 </td><td></td></tr><tr><td> 16 x 150 mm tubos de cultura </td><td> VWR Scientific </td><td> 60825-435 </td><td></td></tr><tr><td> Nanodrop </td><td> Thermo Scientific </td><td> ND 2000 </td><td></td></tr><tr><td> Vermelho de Fenol </td><td> VWR Scientific </td><td> 97062-478 </td><td></td></tr><tr><td> HCl </td><td> VWR Scientific </td><td> 87003-216 </td><td></td></tr><tr><td> NaCl </td><td> VWR Scientific </td><td> BDH4534-500gP </td><td></td></tr><tr><td> KCl </td><td> VWR Scientific </td><td> BDH4532-500gP </td><td></td></tr><tr><td> MgSO4 </td><td> VWR Scientific </td><td> BDH0246-500gP </td><td></td></tr><tr><td> Ca (NO3) 2 </td><td> VWR Scientific </td><td> BDH0226-500gP </td><td></td></tr><tr><td> HEPES </td><td> VWR Scientific </td><td> BDH4520-500gP </td><td></td></tr&gt; <tr><td> Morpholinos </td><td> GeneTools, LLC </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

non-invasive imaging of disseminated candidiasis in zebrafish larvae

Candidíase disseminada causada pelo patógeno Cândida albicans é um problema clínico importante em indivíduos hospitalizados e está associada com uma mortalidade de 30 a 40% atribuível 6. A candidíase sistêmica é normalmente controlada pela imunidade inata, e indivíduos com defeitos genéticos em células imunes inatas componentes, tais como NADPH oxidase de fagócitos são mais suscetíveis à candidemia 7-9. Muito pouco é conhecido sobre a dinâmica de C. albicans interacção com as células imunes inatas in vivo. extensa em estudos in vitro demonstraram que fora do hospedeiro C. albicans germina dentro de macrófagos, e é rapidamente destruída por neutrófilos 10-14. Os estudos in vitro, embora úteis, não pode recapitular o complexo in vivo ambiente, que inclui dependentes do tempo dinâmica dos níveis de citocinas, anexos da matriz extracelular, e os contactos intercelulares 10, 15-18 </sup&gt;. Para investigar a contribuição desses fatores no sistema patógeno-hospedeiro interação, é fundamental para encontrar um organismo modelo para visualizar estes aspectos da infecção não-invasiva em um hospedeiro vivo intacto. A larva do peixe-zebra oferece um hospedeiro vertebrado único e versátil para o estudo da infecção. Durante os primeiros 30 dias de desenvolvimento larvas do peixe têm apenas inatas defesas imunitárias 2, 19-21, simplificando o estudo de doenças como a candidíase disseminada que são altamente dependentes da imunidade inata. O tamanho pequeno e transparência das larvas do peixe permitir imagem de dinâmica da infecção a nível celular, tanto para hospedeiro e do patógeno. Larvas transgénico com fluorescentes inatos células do sistema imunológico pode ser usado para identificar os tipos específicos de células envolvidas na infecção 22-24. Modificados oligonucleótidos anti-sentido (Morpholinos) pode ser usado para derrubar vários componentes imunológicos, tais como NADPH oxidase de fagócitos e estudar as alterações em resposta a fungal infecção 5. Além das vantagens éticas e práticas da utilização de um vertebrado pequeno inferior, as larvas do peixe-zebra oferece a possibilidade única para a imagem da batalha lançada entre patógeno e tanto intravitally e na cor. O peixe-zebra tem sido utilizada para a infecção modelo para um número de bactérias patogénicas humanas, e tem sido instrumental em grandes avanços na compreensão da infecção micobacteriana 3, 25. No entanto, só recentemente patógenos muito maiores, tais como fungos foram utilizados para infectar larvas 5, 23, 26, e até à data não tem havido uma descrição detalhada visual da metodologia infecção. Aqui apresentamos as nossas técnicas de microinjeção rombencéfalo ventrículo de zebrafish 25 prim, incluindo os nossos alterações aos protocolos anteriores. Nossos resultados utilizando o modelo de zebrafish larval para infecção fúngica divergem dos estudos in vitro e reforçam a necessidade de examinar a Intera patógeno-hospedeiroction no complexo ambiente do hospedeiro em vez do sistema simplificado da placa de Petri 5.

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Non-invasive Imaging of Disseminated Candidiasis in Zebrafish Larvae

O desenvolvimento rápido, tamanho pequeno e transparência de peixes-zebra são enormes vantagens para o estudo do controle imunológico inato de infecção<sup&gt; 1-4</sup&gt;. Aqui demonstramos técnicas para infectar larvas do peixe utilizando o agente patogénico fúngica<em&gt; Candida albicans</em&gt; Por microinjeção, a metodologia usada recentemente para implicar atividade oxidase NADPH de fagócitos no controle de dimorfismo fúngico<sup&gt; 5</sup&gt;.

Não-invasivos de imagem de candidíase disseminada em larvas do peixe

Disseminated candidiasis caused by the pathogen Candida albicans is a clinically important problem in hospitalized individuals and is associated with a 30 ...

Research

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Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

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Modelo não-invasiva da neuropatogênicos<em&gt; Escherichia coli</em&gt; Infecção no Rato Neonatal

Investigation of the interactions between animal host and bacterial pathogen is only meaningful if the infection model employed replicates the principal ...

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Modeling Mucosal Candidiasis in Larval Zebrafish by Swimbladder Injection

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Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

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Imagem não invasivo do imunitário inatas Response em um modelo de peixe-zebra larval de<em&gt; Streptococcus iniae</em&gt; Infection

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A Non-invasive and Technically Non-intensive Method for Induction and Phenotyping of Experimental Bacterial Pneumonia in Mice

Um método não-invasivo e tecnicamente não-intensivo para indução e fenotipagem of Experimental pneumonia bacteriana em ratos

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Non-invasive In Vivo Fluorescence Optical Imaging of Inflammatory MMP Activity Using an Activatable Fluorescent Imaging Agent

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Non-invasive<em&gt; In Vivo</em&gt; Fluorescência de imagem óptico de Inflamatória MMP Atividade Usando um Agente de Imaging Activatable fluorescente

This paper describes a non-invasive method for imaging matrix metalloproteinases (MMP)-activity by an activatable fluorescent probe, via in vivo ...

A Non-invasive Way to Isolate and Phenotype Cells from the Conjunctiva

Uma maneira não invasiva de isolar e células de fenótipo da Conjuntiva

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Detection of Enterohemorrhagic Escherichia Coli Colonization in Murine Host by Non-invasive In Vivo Bioluminescence System

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Deteção de colonização Enterohemorrhagic Escherichia Coli murino Host pelo sistema não-invasivo na Vivo bioluminescência

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