Name: non-invasive imaging of disseminated candidiasis in zebrafish larvae
Uploaded: 2012-07-30T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Non-invasive Imaging of Disseminated Candidiasis in Zebrafish Larvae at JoVE.com

Авторы хотели бы поблагодарить лабораторию доктора Кэрол Ким микроинъекции для обучения, Кларисса Генри совет по ускорению развития эмбриона и использования оборудования, и Натан Лоусон за вклад fli1: EGFP рыбы. Мы благодарим членов Уилер лаборатории и Шон стены на критическое чтение рукописи. Мы также хотели бы поблагодарить Марка Nilan для ухода рыбы и советами, и Райан Phennicie и Кристин Габора для технических консультаций по этому проекту. Эта работа финансировалась ассистентом MAFES исследования К. Brothers, MAFES Hatch грант E08913-08, и награда NIH NCRR P20RR016463 Р. Уилер.

Все данио протоколы ухода и эксперименты проводились в условиях институционального ухода и использования животных комитета (IACUC) протокол A2009-11-01. 1. Морфолино и личинок посуды инъекций Экспериментальные продолжительность: * (10-15 минут) <p class="jove_co...

Данио методом микроинъекции, представленные здесь отличается от Gutzman и др. 34. В том, что здесь мы демонстрируем инъекции через слуховым пузырьком в задний мозг желудочка 36 до 48 личинок HPF. Метод описан позволяет последовательное введение 10-15 дрожжи в задний мозг желудочка с ум?...

<table border="1"><tbody><tr><td> Название реагента </td><td> Компания </td><td> Номер в каталоге </td><td> Комментарии (опционально) </td></tr><tr><td> Нерест танков </td><td> Водной среды обитания </td><td> 2L </td><td></td></tr><tr><td> 1,7 мл труб </td><td> Axygen </td><td> MCT-175-C </td><td></td></tr><tr><td> Мгновенный океана </td><td> Fisher Scientific </td><td> S17957C </td><td></td></tr><tr><td> Дополнительные глубокие чашки Петри </td><td> Fisher Scientific </td><td> 08-757-11Z </td><td></td></tr><tr><td> Стандартные чашки Петри </td><td> VWR Научные </td><td> 25384-302 </td><td></td></tr><tr><td> Передача пипетки </td><td> Fisher Scientific </td><td> 13-711-7М </td><td></td></tr><tr><td> Дрожжевой экстракт </td><td> VWR ScientiFIC </td><td> 90000-726 </td><td></td></tr><tr><td> Пептон </td><td> VWR Научные </td><td> 90000-264 </td><td></td></tr><tr><td> Декстроза </td><td> Fisher Scientific </td><td> D16-1 </td><td></td></tr><tr><td> Агар </td><td> VWR Научные </td><td> 90000-760 </td><td></td></tr><tr><td> Одноразовые гемоцитометра </td><td> VWR Научные </td><td> 82030-468 </td><td></td></tr><tr><td> Фосфатного буфера </td><td> VWR Научные </td><td> 12001-986 </td><td></td></tr><tr><td> Дюмон Dumoxel пинцет </td><td> VWR Научные </td><td> 100501-806 </td><td></td></tr><tr><td> Деревянные дюбели </td><td> VWR Научные </td><td> 10805-018 </td><td></td></tr><tr><td> KimWipes </td><td> VWR Научные </td><td> 300053-964 </td><td></td></tr><tr><td> Низкой температурой плавленияАгароза </td><td> VWR Научные </td><td> 12001-722 </td><td></td></tr><tr><td> Агарозы для инъекций блюда </td><td> VWR Научные </td><td> 12002-102 </td><td></td></tr><tr><td> Горячие Браун микропипетки Puller </td><td> Саттер инструменты </td><td> P-97 </td><td></td></tr><tr><td> Полые стержни стекло </td><td> Саттер инструменты </td><td> BF120-69-10 </td><td> Для стеклянных стержней гладкого стекла при нагревании свыше Горелка Бунзена </td></tr><tr><td> Внесите Коробка для хранения </td><td> Саттер инструменты </td><td> BX10 </td><td></td></tr><tr><td> ИПМТ-3 Система впрыска </td><td> Прикладные научного приборостроения </td><td> ИПМТ-3 </td><td></td></tr><tr><td> Вернуться удельное давление </td><td> Прикладные научного приборостроения </td><td> ГПП </td><td></td></tr><tr><td> Микропипетки держатель комплект </td><td> Appliиздание научного приборостроения </td><td> MPIP </td><td></td></tr><tr><td> Foot Switch </td><td> Прикладные научного приборостроения </td><td> FSW </td><td></td></tr><tr><td> Микроманипулятор </td><td> Прикладные научного приборостроения </td><td> MM33 </td><td></td></tr><tr><td> Магнитная база </td><td> Прикладные научного приборостроения </td><td> Магнитная база </td><td></td></tr><tr><td> Tricaine метан сульфонат </td><td> Западные химических Инк </td><td> MS-222 </td><td></td></tr><tr><td> Анатомический Область </td><td> Олимп </td><td> SZ61 верхней SZX-ILLB2-100 база </td><td></td></tr><tr><td> Конфокальной микроскопии </td><td> Олимп </td><td> IX-81 с FV-1000 конфокальной лазерной сканирующей системы </td><td></td></tr><tr><td> ТС-7 тканевой культуры каток с 14-дюймовыми колесными пробирки </td><td> New Brunswick Scientific </td><td> ТС-7 </td><td></td></tr><tr><td> Изображениями посуды </td><td> Маттек корпорации </td><td> P24G-1.0-10-F </td><td></td></tr><tr><td> Наконечники для загрузки иглы </td><td> Эппендорф </td><td> 930001007 </td><td></td></tr><tr><td> Пластина заливки сетки </td><td> Адаптивная науки Инструменты </td><td> Ту-1 </td><td></td></tr><tr><td> Подогрев этап </td><td> Bioptechs Инк </td><td> Delta T-5 </td><td></td></tr><tr><td> Плоский шпатель </td><td> VWR Научные </td><td> 82027-486 </td><td></td></tr><tr><td> Пластиковые Сита </td><td> Изделия Knutsford Интернет </td><td> 12 см </td><td></td></tr><tr><td> Парафильмом </td><td> VWR Научные </td><td> 52858-000 </td><td></td></tr><tr><td> Vortex Genie </td><td> VWR Научные </td><td> 14216-184 </td><td></td></tr><tr><td> 16 х 150 мм трубы культуры </td><td> VWR Научные </td><td> 60825-435 </td><td></td></tr><tr><td> Nanodrop </td><td> Thermo Scientific </td><td> ND 2000 </td><td></td></tr><tr><td> Фенол красный </td><td> VWR Научные </td><td> 97062-478 </td><td></td></tr><tr><td> HCl </td><td> VWR Научные </td><td> 87003-216 </td><td></td></tr><tr><td> NaCl </td><td> VWR Научные </td><td> BDH4534-500gP </td><td></td></tr><tr><td> KCl </td><td> VWR Научные </td><td> BDH4532-500gP </td><td></td></tr><tr><td> MgSO 4 </td><td> VWR Научные </td><td> BDH0246-500gP </td><td></td></tr><tr><td> Ca (NO 3) 2 </td><td> VWR Научные </td><td> BDH0226-500gP </td><td></td></tr><tr><td> HEPES </td><td> VWR Научные </td><td> BDH4520-500gP </td><td></td></tг&gt; <tr><td> Morpholinos </td><td> GeneTools, ООО </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

non-invasive imaging of disseminated candidiasis in zebrafish larvae

Disseminated candidiasis caused by the pathogen Candida albicans is a clinically important problem in hospitalized individuals and is associated with a 30 to 40% attributable mortality6. Systemic candidiasis is normally controlled by innate immunity, and individuals with genetic defects in innate immune cell components such as phagocyte NADPH oxidase are more susceptible to candidemia7-9. Very little is known about the dynamics of C. albicans interaction with innate immune cells in vivo. Extensive in vitro studies have established that outside of the host C. albicans germinates inside of macrophages, and is quickly destroyed by neutrophils10-14. In vitro studies, though useful, cannot recapitulate the complex in vivo environment, which includes time-dependent dynamics of cytokine levels, extracellular matrix attachments, and intercellular contacts10, 15-18. To probe the contribution of these factors in host-pathogen interaction, it is critical to find a model organism to visualize these aspects of infection non-invasively in a live intact host. 
The zebrafish larva offers a unique and versatile vertebrate host for the study of infection. For the first 30 days of development zebrafish larvae have only innate immune defenses2, 19-21, simplifying the study of diseases such as disseminated candidiasis that are highly dependent on innate immunity. The small size and transparency of zebrafish larvae enable imaging of infection dynamics at the cellular level for both host and pathogen. Transgenic larvae with fluorescing innate immune cells can be used to identify specific cells types involved in infection22-24. Modified anti-sense oligonucleotides (Morpholinos) can be used to knock down various immune components such as phagocyte NADPH oxidase and study the changes in response to fungal infection5. In addition to the ethical and practical advantages of using a small lower vertebrate, the zebrafish larvae offers the unique possibility to image the pitched battle between pathogen and host both intravitally and in color. 
The zebrafish has been used to model infection for a number of human pathogenic bacteria, and has been instrumental in major advances in our understanding of mycobacterial infection3, 25. However, only recently have much larger pathogens such as fungi been used to infect larva5, 23, 26, and to date there has not been a detailed visual description of the infection methodology. Here we present our techniques for hindbrain ventricle microinjection of prim25 zebrafish, including our modifications to previous protocols. Our findings using the larval zebrafish model for fungal infection diverge from in vitro studies and reinforce the need to examine the host-pathogen interaction in the complex environment of the host rather than the simplified system of the Petri dish5.

Watch this Scientific Journal Video about Non-invasive Imaging of Disseminated Candidiasis in Zebrafish Larvae at JoVE.com

Non-invasive Imaging of Disseminated Candidiasis in Zebrafish Larvae

Бурное развитие, малый размер и прозрачность данио огромные преимущества для изучения иммунной контроль инфекции<sup&gt; 1-4</sup&gt;. Здесь мы покажем методы заражения личинки данио использованием возбудителей грибковых<em&gt; Candida Albicans</em&gt; По микроинъекции, методология недавно использовали, чтобы обвинить фагоцитарную активность NADPH оксидазы в управлении грибковых диморфизм<sup&gt; 5</sup&gt;.

Неинвазивная визуализация диссеминированный кандидоз в Личинки данио рерио

Disseminated candidiasis caused by the pathogen Candida albicans is a clinically important problem in hospitalized individuals and is associated with a 30 ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Non-invasive Imaging of Leukocyte Homing and Migration in vivo

Non-invasive Imaging of Leukocyte Homing and Migration in vivo

Неинвазивная Визуализация лейкоцитов самонаведения и миграции В естественных условиях</em

Two-photon (2P) microscopy is a high resolution imaging technique that has been broadly adapted by biologists.  The value of 2P microscopy is that it ...

Non-invasive Optical Imaging of the Lymphatic Vasculature of a Mouse

Неинвазивная оптических изображений из лимфатических сосудов от мыши

The lymphatic  vascular system is an important component of the circulatory system that  maintains fluid homeostasis, provides immune surveillance, and ...

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Неинвазивного Модель Neuropathogenic<em&gt; Кишечная палочка</em&gt; Инфекция в новорожденной крысы

Investigation of the interactions between animal host and bacterial pathogen is only meaningful if the infection model employed replicates the principal ...

Complete Thymectomy in Adult Rats with Non-invasive Endotracheal Intubation

Полный Тимэктомия у крыс взрослых с неинвазивной интубации трахеи

Thymectomy in neonatal rodents is an established and reliable procedure for immunological studies. However, in adult rats, complications of hemorrhage and ...

Modeling Mucosal Candidiasis in Larval Zebrafish by Swimbladder Injection

Моделирование слизистой оболочки кандидоз мальков данио рерио по плавательного пузыря инъекций

Early defense against mucosal pathogens consists of both an epithelial barrier and innate immune cells. The immunocompetency of both, and their ...

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

Неинвазивная Визуализация врожденного иммунного ответа в данио рерио личинок модели<em&gt; Streptococcus iniae</em&gt; Инфекция

The aquatic pathogen, Streptococcus iniae, is responsible for over 100 million dollars in annual losses for the aquaculture industry and is capable of ...

A Non-invasive and Technically Non-intensive Method for Induction and Phenotyping of Experimental Bacterial Pneumonia in Mice

Неинвазивным и технически неинтенсивное метод индукции и Фенотипирование экспериментальной бактериальной пневмонии у мышей

Although community-acquired pneumonia remains a major public health problem, murine models of bacterial pneumonia have recently facilitated significant ...

Non-invasive In Vivo Fluorescence Optical Imaging of Inflammatory MMP Activity Using an Activatable Fluorescent Imaging Agent

Non-invasive In Vivo Fluorescence Optical Imaging of Inflammatory MMP Activity Using an Activatable Fluorescent Imaging Agent

Неинвазивная<em&gt; In Vivo</em&gt; Флуоресцентная оптическая визуализация воспалительной активности ММП с использованием активируемого флуоресцентного средства визуализации

This paper describes a non-invasive method for imaging matrix metalloproteinases (MMP)-activity by an activatable fluorescent probe, via in vivo ...

A Non-invasive Way to Isolate and Phenotype Cells from the Conjunctiva

Неинвазивный способ выделения и фенотипических клеток из конъюнктивы

Traditionally, ocular surface cytology is studied with techniques such as spatula technology and brush technology. The problem with these techniques is ...

Detection of Enterohemorrhagic Escherichia Coli Colonization in Murine Host by Non-invasive In Vivo Bioluminescence System

Detection of Enterohemorrhagic Escherichia Coli Colonization in Murine Host by Non-invasive In Vivo Bioluminescence System

Обнаружение энтерогеморрагические Escherichia Coli колонизации в мышиных принимающей системой неинвазивные в Vivo биолюминесценции

Enterohemorrhagic E. coli (EHEC) O157:H7, which is a foodborne pathogen that causesdiarrhea, hemorrhagic colitis (HS), and hemolytic uremic syndrome ...