Name: non-invasive imaging of disseminated candidiasis in zebrafish larvae
Uploaded: 2012-07-30T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Non-invasive Imaging of Disseminated Candidiasis in Zebrafish Larvae at JoVE.com

Författarna vill tacka laboratoriet av Dr Carol Kim för mikroinjektion utbildning, Clarissa Henry för att få råd om påskyndande embryo utveckling och användning av utrustning, och Nathan Lawson för att bidra fli1: EGFP fisk. Vi tackar medlemmar i Wheeler labbet och Shawn väggar för kritisk läsning av manuskriptet. Vi vill också tacka Mark Nilan för fisk vård och rådgivning, och Ryan Phennicie och Kristin Gabor för teknisk rådgivning om detta projekt. Detta arbete har finansierats av ett MAFES forskning assistent till K. Brothers, en MAFES Hatch bidrag E08913-08, och en NIH NCRR utmärkelse P20RR016463 till R. Wheeler.

Alla zebrafisk vårdrutiner och experiment genomfördes under Institutional Animal Care and Use Committee (lACUC) Protokoll A2009-11-01. 1. Morfolino och larver rätter Injection Experimentell Längd: * (10-15 minuter) Svårighetsgrad: * <ol><li> För ägg injektioner, förbereda en 2% agaros lösning i sterilt vatten och mikrovågsugn. När lösningen har svalnat häller en del av det till en extra...

Zebrafisk mikroinjektion metod som presenteras här skiljer sig från Gutzman et al. 34 i att vi här visar injektion genom örat vesikeln i bakhjäman ventrikeln av 36 till 48 HPF larver. Metoden beskriver vi gör för konsekvent injektion av 10-15 jäst i bakhjäman kammaren med minskad vävnadsskada. Detta protokoll ger en initialt lokal infektion som sprider sig i hela kroppen med 24 HPI (figur 1) och resulterar i betydande dödlighet / sjuklighet 5. Den bakhjäman kam...

<table border="1"><tbody><tr><td> Namnet på reagens </td><td> Företaget </td><td> Katalognummer </td><td> Kommentarer (valfri) </td></tr><tr><td> Romläggningsbehållare </td><td> Akvatiska livsmiljöer </td><td> 2L </td><td></td></tr><tr><td> 1,7 ml rör </td><td> Axygen </td><td> MCT-175-C </td><td></td></tr><tr><td> Instant Ocean </td><td> Fisher Scientific </td><td> S17957C </td><td></td></tr><tr><td> Extra djupa petriskålar </td><td> Fisher Scientific </td><td> 08-757-11Z </td><td></td></tr><tr><td> Standardmetoder Petriskålar </td><td> VWR Scientific </td><td> 25384-302 </td><td></td></tr><tr><td> Överföringspipetter </td><td> Fisher Scientific </td><td> 13-711-7M </td><td></td></tr><tr><td> Jästextrakt </td><td> VWR vetenFIC </td><td> 90000-726 </td><td></td></tr><tr><td> Pepton </td><td> VWR Scientific </td><td> 90000-264 </td><td></td></tr><tr><td> Dextros </td><td> Fisher Scientific </td><td> D16-1 </td><td></td></tr><tr><td> Agar </td><td> VWR Scientific </td><td> 90000-760 </td><td></td></tr><tr><td> Engångstyp hemocytometer </td><td> VWR Scientific </td><td> 82030-468 </td><td></td></tr><tr><td> Fosfatbuffrad saltlösning </td><td> VWR Scientific </td><td> 12001-986 </td><td></td></tr><tr><td> Dumont Dumoxel pincett </td><td> VWR Scientific </td><td> 100501-806 </td><td></td></tr><tr><td> Träpinnar </td><td> VWR Scientific </td><td> 10805-018 </td><td></td></tr><tr><td> Kimwipes </td><td> VWR Scientific </td><td> 300053-964 </td><td></td></tr><tr><td> Låg smältpunktAgaros </td><td> VWR Scientific </td><td> 12001-722 </td><td></td></tr><tr><td> Agaros för injektion rätter </td><td> VWR Scientific </td><td> 12002-102 </td><td></td></tr><tr><td> Flammande Brown Mikropipett Puller </td><td> Sutter Instrument </td><td> P-97 </td><td></td></tr><tr><td> Ihåliga glasstavar </td><td> Sutter Instrument </td><td> BF120-69-10 </td><td> För glasstavar slät glas genom upphettning över bunsenbrännare </td></tr><tr><td> Pipettera Förvaringsbox </td><td> Sutter Instrument </td><td> BX10 </td><td></td></tr><tr><td> MPPI-3 Insprutningssystem </td><td> Tillämpad vetenskapliga instrument </td><td> MPPI-3 </td><td></td></tr><tr><td> Mottryck Unit </td><td> Tillämpad vetenskapliga instrument </td><td> BPU </td><td></td></tr><tr><td> Mikropipett Hållare kit </td><td> Ansökan omed vetenskapliga instrument </td><td> MPIP </td><td></td></tr><tr><td> Foot Switch </td><td> Tillämpad vetenskapliga instrument </td><td> FSW </td><td></td></tr><tr><td> Mikromanipulator </td><td> Tillämpad vetenskapliga instrument </td><td> MM33 </td><td></td></tr><tr><td> Magnetisk bas </td><td> Tillämpad vetenskapliga instrument </td><td> Magnetisk bas </td><td></td></tr><tr><td> Trikain metansulfonat </td><td> Västra Chemical Inc. </td><td> MS-222 </td><td></td></tr><tr><td> Dissekera Omfattning </td><td> Olympus </td><td> SZ61 övre SZX-ILLB2-100 bas </td><td></td></tr><tr><td> Konfokalmikroskop </td><td> Olympus </td><td> IX-81 med FV-1000 laserskanning konfokalt system </td><td></td></tr><tr><td> TC-7 Tissue Culture Roller trumma med 14 tums provrör hjulet </td><td> New Brunswick Scientific </td><td> TC-7 </td><td></td></tr><tr><td> Imaging rätter </td><td> MatTek Corporation </td><td> P24G-1.0-10-F </td><td></td></tr><tr><td> Pipettspetsar för lastning nålar </td><td> Eppendorf </td><td> 930001007 </td><td></td></tr><tr><td> Plate strömmar galler </td><td> Adaptiva Science Tools </td><td> TU-1 </td><td></td></tr><tr><td> Uppvärmd Stage </td><td> Bioptechs Inc. </td><td> Delta T-5 </td><td></td></tr><tr><td> Flat Spatel </td><td> VWR Scientific </td><td> 82027-486 </td><td></td></tr><tr><td> Plast Sieves </td><td> Bakverk av Knutsford nätet </td><td> 12 cm </td><td></td></tr><tr><td> Parafilm </td><td> VWR Scientific </td><td> 52858-000 </td><td></td></tr><tr><td> Vortex Genie </td><td> VWR Scientific </td><td> 14216-184 </td><td></td></tr><tr><td> 16 x 150 mm odlingsrör </td><td> VWR Scientific </td><td> 60825-435 </td><td></td></tr><tr><td> NanoDrop </td><td> Thermo Scientific </td><td> ND 2000 </td><td></td></tr><tr><td> Fenolrött </td><td> VWR Scientific </td><td> 97062-478 </td><td></td></tr><tr><td> HCI </td><td> VWR Scientific </td><td> 87003-216 </td><td></td></tr><tr><td> NaCl </td><td> VWR Scientific </td><td> BDH4534-500gP </td><td></td></tr><tr><td> KCl </td><td> VWR Scientific </td><td> BDH4532-500gP </td><td></td></tr><tr><td> MgSO 4 </td><td> VWR Scientific </td><td> BDH0246-500gP </td><td></td></tr><tr><td> Ca (NO3) 2 </td><td> VWR Scientific </td><td> BDH0226-500gP </td><td></td></tr><tr><td> HEPES </td><td> VWR Scientific </td><td> BDH4520-500gP </td><td></td></tr&gt; <tr><td> Morpholinos </td><td> GeneTools, LLC </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

non-invasive imaging of disseminated candidiasis in zebrafish larvae

Disseminerad candidiasis som orsakas av patogen Candida albicans är en kliniskt viktigt problem i sjukhus individer och är associerad med en 30 till 40% kan hänföras mortalitet 6. Systemisk candidiasis normalt styrs av medfödda immunitet, och individer med genetiska defekter i medfödda immunförsvaret cell komponenter såsom fagocytsystemet NADPH oxidas är mer mottagliga för candidemia 7-9. Mycket lite är känt om dynamiken av C. albicans interaktion med medfödda immunceller in vivo. Omfattande studier in vitro har visat att utanför den mottagande C. albicans gror inuti makrofager och snabbt förstörs av neutrofiler 10-14. In vitro-studier, men nyttig, inte kan rekapitulera den komplexa in vivo miljö, vilket inkluderar tidsberoende dynamiken i cytokinnivåer, extracellulära bilagor matris, och intercellulära kontakter 10, 15-18 </sup&gt;. Att söka bidrag för dessa faktorer i värd-patogen interaktion, är det viktigt att hitta en modell organism att visualisera dessa aspekter av infektionen icke-invasivt i en levande intakt värd. Zebrafisk larven erbjuder en unik och mångsidig vertebratvärden för studiet av infektionen. Under de första 30 dagarna av utvecklingen zebrafisk larver har bara medfödda immunförsvar 2, 19-21, vilket förenklar studier av sjukdomar som sprids candidiasis som är starkt beroende av medfödd immunitet. Den lilla storleken och insyn i zebrafisk larver möjliggör avbildning av infektion dynamik på cellulär nivå för både värd och patogen. Transgen larver med fluorescerande medfödda immunförsvaret celler kan användas för att identifiera specifika celltyper inblandade i infektioner 22-24. Modifierade anti-sense-oligonukleotider (Morpholinos) kan användas för att slå ner olika immun komponenter såsom fagocytsystemet NADPH oxidas och studera de förändringar som svar på fungal infektion 5. Förutom de etiska och praktiska fördelarna med att använda en liten mindre ryggradsdjur, erbjuder zebrafisk larverna den unika möjligheten att avbilda fältslag mellan patogen och värd både intravitally och i färg. Zebrafisk har använts för att modellera infektion för ett antal humanpatogena bakterier, och har varit avgörande i de stora framsteg i vår förståelse av mykobakterieinfektion 3, 25. Men först nyligen har mycket större patogener såsom svampar använts för att infektera larven 5, 23, 26, och hittills har det inte funnits en detaljerad visuell beskrivning av infektionen metoden. Här presenterar vi våra tekniker för bakhjäman kammare mikroinjektion av prim 25 zebrafisk, inklusive våra ändringar tidigare protokoll. Våra fynd med hjälp av larver zebrafisk modellen för svampinfektion avviker från in vitro-studier och stärka behovet av att undersöka värd-patogen InteraInsatser som den komplexa miljö hos värden snarare än den förenklade systemet av petriskålen 5.

Watch this Scientific Journal Video about Non-invasive Imaging of Disseminated Candidiasis in Zebrafish Larvae at JoVE.com

Non-invasive Imaging of Disseminated Candidiasis in Zebrafish Larvae

Den snabba utvecklingen, liten storlek och öppenhet zebrafisk är enorma fördelar för studier av medfödda immunförsvaret kontroll av infektion<sup&gt; 1-4</sup&gt;. Här visar vi tekniker för att infektera zebrafisk larver med hjälp av svamppatogen<em&gt; Candida albicans</em&gt; Genom mikroinjektion, metodik använts nyligen att blanda fagocytsystemet aktivitet NADPH oxidas kontroll över svamp dimorphism<sup&gt; 5</sup&gt;.

Icke-invasiv avbildning av disseminerad candidiasis i zebrafisk Larver

Disseminated candidiasis caused by the pathogen Candida albicans is a clinically important problem in hospitalized individuals and is associated with a 30 ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Non-invasive Imaging of Leukocyte Homing and Migration in vivo

Non-invasive Imaging of Leukocyte Homing and Migration in vivo

Icke-invasiv avbildning av Leukocyt Homing och migration In vivo</em

Two-photon (2P) microscopy is a high resolution imaging technique that has been broadly adapted by biologists.  The value of 2P microscopy is that it ...

Non-invasive Optical Imaging of the Lymphatic Vasculature of a Mouse

Icke-invasiv optisk avbildning av det lymfatiska vaskulaturen hos en mus

The lymphatic  vascular system is an important component of the circulatory system that  maintains fluid homeostasis, provides immune surveillance, and ...

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Icke-invasiv Modell av Neuropathogenic<em&gt; Escherichia coli</em&gt; Infektion i neonatal Rat

Investigation of the interactions between animal host and bacterial pathogen is only meaningful if the infection model employed replicates the principal ...

Complete Thymectomy in Adult Rats with Non-invasive Endotracheal Intubation

Komplett tymektomi hos vuxna råttor med icke-invasiv endotrakeal intubation

Thymectomy in neonatal rodents is an established and reliable procedure for immunological studies. However, in adult rats, complications of hemorrhage and ...

Modeling Mucosal Candidiasis in Larval Zebrafish by Swimbladder Injection

Modellering Mucosal candidiasis i larvZebraFish genom Swimbladder Injektion

Early defense against mucosal pathogens consists of both an epithelial barrier and innate immune cells. The immunocompetency of both, and their ...

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

Icke-invasiv avbildning av det medfödda immun Response i en Zebrafish Larv Modell av<em&gt; Streptococcus iniae</em&gt; Infektion

The aquatic pathogen, Streptococcus iniae, is responsible for over 100 million dollars in annual losses for the aquaculture industry and is capable of ...

A Non-invasive and Technically Non-intensive Method for Induction and Phenotyping of Experimental Bacterial Pneumonia in Mice

En icke-invasiv och tekniskt icke intensiva metod för induktion och fenotypning av experimentell bakteriell lunginflammation hos möss

Although community-acquired pneumonia remains a major public health problem, murine models of bacterial pneumonia have recently facilitated significant ...

Non-invasive In Vivo Fluorescence Optical Imaging of Inflammatory MMP Activity Using an Activatable Fluorescent Imaging Agent

Non-invasive In Vivo Fluorescence Optical Imaging of Inflammatory MMP Activity Using an Activatable Fluorescent Imaging Agent

Icke-invasiv<em&gt; In vivo</em&gt; Fluorescence optisk avbildning av inflammatorisk MMP aktivitet Använda en aktiverbar Fluorescent Imaging Agent

This paper describes a non-invasive method for imaging matrix metalloproteinases (MMP)-activity by an activatable fluorescent probe, via in vivo ...

A Non-invasive Way to Isolate and Phenotype Cells from the Conjunctiva

Ett icke-invasivt sätt att isolera och fenotypceller från konjunktiva

Traditionally, ocular surface cytology is studied with techniques such as spatula technology and brush technology. The problem with these techniques is ...

Detection of Enterohemorrhagic Escherichia Coli Colonization in Murine Host by Non-invasive In Vivo Bioluminescence System

Detection of Enterohemorrhagic Escherichia Coli Colonization in Murine Host by Non-invasive In Vivo Bioluminescence System

Påvisande av entrohemoragiska Escherichia Coli koloniseringen i murina mottagande av icke-invasiva In Vivo Mareld System

Enterohemorrhagic E. coli (EHEC) O157:H7, which is a foodborne pathogen that causesdiarrhea, hemorrhagic colitis (HS), and hemolytic uremic syndrome ...