Name: time-lapse imaging of neuroblast migration in acute slices of the adult mouse forebrain
Uploaded: 2012-09-12T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Acute Slices of the Adult Mouse Forebrain at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי מכון קנדי ​​לבריאות מחקר (CIHR) המענק לASJK מומן בהחלק על ידי מלגת אוול אוניברסיטה. AS הוא הנמען של קנדה מחקר קתדרת neurogenesis לאחר הלידה.

<html> 1. תיוג מבשרי נוירונים Neuroblasts ניתן דמיין באמצעות עכברים מהונדסים כי סלקטיבי מבטאים חלבוני ניאון בneuroblasts (כלומר, DCX-GFP, Gad67-GFP), על ידי הזרקת חלקיקים נגיפיים מקודדים חלבוני ניאון לSVZ או RMS stereotaxically, או על ידי השתלת מבשרי נוירונים ?...

<ol>
	<li>Kriegstein, A., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+glial+nature+of+embryonic+and+adult+neural+stem+cells.">The glial nature of embryonic and adult neural stem cells.</a> Annu. Rev. Neurosci. 32, 149-184 (2009).</li><li>Kaneko, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+neurons+clear+the+path+of+astrocytic+processes+for+their+rapid+migration+in+the+adult+brain.">New neurons clear the path of astrocytic processes for their rapid migration in the adult brain.</a> Neuron. 67, 213-223 (2010).</li><li>Lois, C., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-distance+neuronal+migration+in+the+adult+mammalian+brain.">Long-distance neuronal migration in the adult mammalian brain.</a> Science. 264, 1145-1148 (1994).</li><li>Snapyan, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vasculature+guides+migrating+neuronal+precursors+in+the+adult+mammalian+forebrain+via+brain-derived+neurotrophic+factor+signaling.">Vasculature guides migrating neuronal precursors in the adult mammalian forebrain via brain-derived neurotrophic factor signaling.</a> J. Neurosci. 29, 4172-4188 (2009).</li><li>Whitman, M. C., Fan, W., Rela, L., Rodriguez-Gil, D. J., Greer, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+vessels+form+a+migratory+scaffold+in+the+rostral+migratory+stream.">Blood vessels form a migratory scaffold in the rostral migratory stream.</a> J. Comp. Neurol. 516, 94-104 (2009).</li><li>Lledo, P. M., Saghatelyan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrating+new+neurons+into+the+adult+olfactory+bulb:+joining+the+network,+life-death+decisions,+and+the+effects+of+sensory+experience.">Integrating new neurons into the adult olfactory bulb: joining the network, life-death decisions, and the effects of sensory experience.</a> Trends Neurosci. 28, 248-254 (2005).</li><li>Bolteus, A. J., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GABA+release+and+uptake+regulate+neuronal+precursor+migration+in+the+postnatal+subventricular+zone.">GABA release and uptake regulate neuronal precursor migration in the postnatal subventricular zone.</a> J. Neurosci. 24, 7623-7631 (2004).</li><li>Martini, F. J., Valdeolmillos, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Actomyosin+contraction+at+the+cell+rear+drives+nuclear+translocation+in+migrating+cortical+interneurons.">Actomyosin contraction at the cell rear drives nuclear translocation in migrating cortical interneurons.</a> J. Neurosci. 30, 8660-8670 (2010).</li><li>Murase, S., Horwitz, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deleted+in+colorectal+carcinoma+and+differentially+expressed+integrins+mediate+the+directional+migration+of+neural+precursors+in+the+rostral+migratory+stream.">Deleted in colorectal carcinoma and differentially expressed integrins mediate the directional migration of neural precursors in the rostral migratory stream.</a> J. Neurosci. 22, 3568-3579 (2002).</li><li>Wilcock, A. C., Swedlow, J. R., Storey, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitotic+spindle+orientation+distinguishes+stem+cell+and+terminal+modes+of+neuron+production+in+the+early+spinal+cord.">Mitotic spindle orientation distinguishes stem cell and terminal modes of neuron production in the early spinal cord.</a> Development. 134, 1943-1954 (2007).</li><li>Ono, M., Yanagawa, Y., Koyano, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GABAergic+neurons+in+inferior+colliculus+of+the+GAD67-GFP+knock-in+mouse:+electrophysiological+and+morphological+properties.">GABAergic neurons in inferior colliculus of the GAD67-GFP knock-in mouse: electrophysiological and morphological properties.</a> Neurosci. Res. 51, 475-492 (2005).</li><li>Bozoyan, L., Khlghatyan, J., Saghatelyan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocytes+Control+the+Development+of+the+Migration-Promoting+Vasculature+Scaffold+in+the+Postnatal+Brain+via+VEGF+Signaling.">Astrocytes Control the Development of the Migration-Promoting Vasculature Scaffold in the Postnatal Brain via VEGF Signaling.</a> J. Neurosci. 32, 1687-1704 (2012).</li><li>Bovetti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+vessels+form+a+scaffold+for+neuroblast+migration+in+the+adult+olfactory+bulb.">Blood vessels form a scaffold for neuroblast migration in the adult olfactory bulb.</a> J. Neurosci. 27, 5976-5980 (2007).</li><li>Platel, J. C., Heintz, T., Young, S., Gordon, V., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tonic+activation+of+GLUK5+kainate+receptors+decreases+neuroblast+migration+in+whole-mounts+of+the+subventricular+zone.">Tonic activation of GLUK5 kainate receptors decreases neuroblast migration in whole-mounts of the subventricular zone.</a> J. Physiol. 586, 3783-3793 (2008).</li><li>Nam, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+features+of+postnatal+subventricular+zone+cell+motility:+a+two-photon+time-lapse+study.">Dynamic features of postnatal subventricular zone cell motility: a two-photon time-lapse study.</a> J. Comp. Neurol. 505, 190-208 (2007).</li><li>Kim, Y., Comte, I., Szabo, G., Hockberger, P., Szele, F. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+mouse+subventricular+zone+stem+and+progenitor+cells+are+sessile+and+epidermal+growth+factor+receptor+negatively+regulates+neuroblast+migration.">Adult mouse subventricular zone stem and progenitor cells are sessile and epidermal growth factor receptor negatively regulates neuroblast migration.</a> PLoS One. 4, e8122 (2009).</li><li>Bortone, D., Polleux, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=KCC2+expression+promotes+the+termination+of+cortical+interneuron+migration+in+a+voltage-sensitive+calcium-dependent+manner.">KCC2 expression promotes the termination of cortical interneuron migration in a voltage-sensitive calcium-dependent manner.</a> Neuron. 62, 53-71 (2009).</li><li>Comte, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Galectin-3+maintains+cell+motility+from+the+subventricular+zone+to+the+olfactory+bulb.">Galectin-3 maintains cell motility from the subventricular zone to the olfactory bulb.</a> J. Cell Sci. 124, 2438-2447 (2011).</li></ol>

המיקוד הנכון של מבשרי נוירונים לאזורי המוח המתאימים הוא תהליך יסוד של ההרכבה והתפקוד התקין של מעגלים עצביים. הרוב המכריע של תאים נודדים במהלך התפתחות עוברית ובמוח לאחר הלידה רק בכמה אזורים, כגון gyrus OB, המשונן ומוח הקטן, התזוזה עצבית עדיין מתרחשת. המנגנונים מנצחים נדי?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם המגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגים </td></tr><tr><td> סוכרוז </td><td> סיגמא </td><td> S9378 </td></tr><tr><td> גלוקוז (ACSF) </td><td> EMD </td><td> DX0145-3 </td></tr><tr><td> NaCI </td><td> סיגמא </td><td> S9625 </td></tr><tr><td> KCI </td><td> סיגמא </td><td> P9541 </td></tr><tr><td> MgCI 2 x6H 2 O </td><td> סיגמה אולדריץ </td><td> M2670 </td></tr><tr><td> 3 NaHCO </td><td> סיגמא </td><td> S5761 </td></tr><tr><td> Nah 2 PO 4 xh 2 O </td><td> EMD </td><td> SX0710-1 </td></tr><tr><td> CaCI 2 x2H 2 O </td><td> סיגמה אולדריץ </td><td> C3881 </td></tr><tr><td> Dextran TexasRed </td><td> Invitrogen </td><td> D1864 </td></tr><tr><td> Dextran CascadeBlue </td><td> Invitrogen </td><td> D1976 </td></tr><tr><td> גלוקוז (פתרון 40X) </td><td> סיגמא </td><td> G8769 </td></tr><tr><td> pyruvat נתרן </td><td> Gibco </td><td> 11360-070 </td></tr><tr><td> HEPES </td><td> סיגמא </td><td> H3375 </td></tr><tr><td> HBSS </td><td> Gibco </td><td> 14170-112 </td></tr><tr><td> אני DNase </td><td> סיגמא </td><td> D-5025 </td></tr><tr><td> טריפסין-EDTA </td><td> Gibco </td><td> 25300-054 </td></tr><tr><td> בינוני Neurobasal </td><td> Gibco </td><td> 21103-049 </td></tr><tr><td> BSA </td><td> EMD </td><td> 2930 </td></tr><tr><td> עט / דלקת </td><td> חי טכנולוגיות </td><td> 15140-122 </td></tr><tr><td> קטמין / Xylazine </td><td> CDMV </td><td> 5230 </td></tr><tr><td> פסטר פיפטה </td><td> VWR </td><td> 14672-380 </td></tr><tr><td> צינור 15 מ&quot;ל חרוטים </td><tד&gt; Sarstedt </td><td> 62.553.205 </td></tr><tr><td> צינור 50 מ&quot;ל חרוטים </td><td> Sarstedt </td><td> 62.547.205 </td></tr><tr><td> זכוכית נימים (הזרקת stereotaxic) </td><td> WPI </td><td> 4878 </td></tr><tr><td> שמן פרפין </td><td> EMD </td><td> PX0045-3 </td></tr><tr><td> Proviodine </td><td> Rougier </td><td> 65655-1370 </td></tr><tr><td> תפר </td><td> Stoelting </td><td> 50487 </td></tr><tr><td> Anafen </td><td> CDMV </td><td> 11508 </td></tr><tr><td> מזרק 20 סמ&quot;ק </td><td> VWR </td><td> SS-20L2 </td></tr><tr><td> צלחת פטרי </td><td> VWR </td><td> 25384-094 </td></tr><tr><td> אגר </td><td> Laboratoire Mat </td><td> AP-0108 </td></tr><tr><td> דבק </td><td> Permabond </td><td> 910 </td></tr><tr><td> 95% O 2/5% CO 2 </td><td> לינדה </td><td> 24068835 </td></tr><tr><td> להב &lt;/ Td&gt; <td> WPI </td><td> 501901 </td></tr><tr><td> רשת ניילון </td><td> וורנר מכשירים </td><td> 64-0198 </td></tr><tr><td> סרכזת </td><td> אפנדורף </td><td> 5702 000.019 </td></tr><tr><td> פיפטה חולץ </td><td> מכשיר סאטר </td><td> P-97 </td></tr><tr><td> Nanoliter מזרק </td><td> WPI </td><td> B203MC4 </td></tr><tr><td> מנגנון ההזרקה Stereotaxic </td><td> WPI </td><td> 502900 </td></tr><tr><td> מערכת מייקרו תרגיל </td><td> WPI </td><td> 501819 </td></tr><tr><td> Vibratome </td><td> Thermo Scientific </td><td> 920110 </td></tr><tr><td> מיקרוסקופ פלואורסצנטי שדה רחב </td><td> אולימפוס </td><td> BX61WIF </td></tr><tr><td> מצלמת CCD </td><td> Photometrics </td><td> CS-HQ2-D </td></tr><tr><td> קאמרי הדמית אולטרה שקטה </td><td> הרווארד Apparatus </td><td> 64-1487 </td></tr><tr><td> PH-1פלטפורמת תנור סדרה 20 </td><td> הרווארד Apparatus </td><td> 64-0284 </td></tr><tr><td> מערכת חימום </td><td> וורנר מכשירים </td><td> TC-344B </td></tr><tr><td> מטרת טבילה במי 40X </td><td> אולימפוס </td><td> 1-UM587 </td></tr><tr><td> מטרת טבילה במי 10X </td><td> אולימפוס </td><td> 1-UM583 </td></tr><tr><td> מבדה DG-4 </td><td> סאטר מכשירים </td><td> DG-4/OF </td></tr><tr><td> MetaMorph תוכנה </td><td> התקנים מולקולריים </td><td> 40000 </td></tr><tr><td> Imaris תוכנה </td><td> Bitplane </td><td> BPI-IM70-F1 </td></tr></tbody></table>

time-lapse imaging of neuroblast migration in acute slices of the adult mouse forebrain

יש גוף משמעותי של ראיות מצביעות על כך שתאי עצב חדשים נוצרים באופן פונקציונלי constitutively מברכת אנדוגני בתאי גזע עצביים באזורים מוגבלים של המוח של יונקי הבוגרים. neuroblasts יילוד מאזור subventricular (SVZ) נודד לאורך הנחל הנודד המקורי (RMS) ליעד הסופי שלהם בנורת חוש הריח (OB) 1. בRMS, neuroblasts להעביר באופן כלשהו ברשתות ensheathed ידי תהליכי astrocytic 2,3 באמצעות כלי דם כתמיכה מבנית ומקור לגורמים מולקולריים הנדרשים להגירת 4,5. בOB, neuroblasts להתנתק מהכבלים ולהעביר רדיאלית לשכבות השונות המוח המאורך שבו הם להתמיין לinterneurons ולהשתלב ברשת הקיימת 1, 6. בכתב יד זה יתאר את ההליך לנדידת תאי ניטור בפרוסות חריפות של המוח המכרסם. השימוש בפרוסות חריפות מאפשר assessmאף אוזן גרון של נדידת תאים בmicroenvironment שדומה מאוד לתנאי vivo ובאזורים במוח שקשה לגשת לדימות vivo. בנוסף, זה ימנע מצב culturing ארוך כמו במקרה של תרבויות organotypic ותא שסופו של דבר עשוי לשנות את מאפייני הנדידה של התאים. מבשרי נוירונים בפרוסות חריפות ניתן דמיינו באמצעות אופטיקה DIC או חלבוני ניאון. תיוג הנגיפי של מבשרי נוירונים בSVZ, השתלת neuroblasts מעכברי כתב לתוך SVZ של עכברי סוג פראי, ושימוש בעכברים מהונדסים המבטאים חלבון פלואורסצנטי בneuroblasts כל השיטות המתאימות להמחשת neuroblasts ולאחר הגירתם. שיטה האחרת, לעומת זאת, אינה מאפשרת לתאים בודדים להיות במעקב במשך תקופות זמן ארוכים, בגלל הצפיפות הגבוהה של תאים שכותרתו. אנחנו השתמשנו במיקרוסקופ זקוף ניאון שדה רחב מצויד במצלמת CCD להשיג מרווח רכישה מהירה יחסית (1 image כל 15 או 30 שניות) באופן מהימן לזהות הנייח ושלבים נודדים. זיהוי מדויק של משך השלבים הנייחים ונדידה הוא חיוני לפרשנות חד המשמעית של תוצאות. גם בצענו רכישות מרובות z שלב כדי לפקח הגירת neuroblasts ב-3D. הדמית ניאון שדה רחב כבר בשימוש נרחב כדי להמחיש נדידה עצבית 7-10. כאן, אנו מתארים פרוטוקול מפורט לתיוג neuroblasts, ביצוע וידאו בזמן אמת הדמיה של הגירת neuroblast בפרוסות חריפות של המוח הקדמי העכבר המבוגר, וניתוח נדידת תאים. בעוד הפרוטוקול המתואר הודגם ההגירה של neuroblasts במבוגר RMS, זה יכול לשמש גם כדי לעקוב אחר נדידת תאים במוח לאחר לידה עוברי ומוקדם.

Watch this Scientific Journal Video about Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Acute Slices of the Adult Mouse Forebrain at JoVE.com

Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Acute Slices of the Adult Mouse Forebrain

אנו מתארים פרוטוקול עבור videoimaging בזמן האמת של הנדידה עצבית במוח הקדמי בעכבר. ההגירה של מבשרי נוירונים שכותרת-ויראלי או מושתלים נרשמה בפרוסות חיות חריפות באמצעות הדמית ניאון שדה רחב עם מרווח רכישה מהירה יחסית כדי ללמוד את השלבים השונים של נדידת תאים, כולל את משכי הזמן של שלבי הגירה והנייחת והמהירות הגירה.

הדמית זמן לשגות הגירת Neuroblast בפרוסות חריפות של המוח הקדמי המאוס למבוגרים

There is a substantial body of evidence indicating that new functional neurons are constitutively generated from an endogenous pool of neural stem cells ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

An Organotypic Slice Assay for High-Resolution Time-Lapse Imaging of Neuronal Migration in the Postnatal Brain

Assay Slice Organotypic עבור זמן לשגות הדמיה ברזולוציה גבוהה נדידת הנוירונים במוח אחרי לידה

Neurogenesis in the postnatal brain depends on maintenance of three biological events: proliferation of progenitor cells, migration of neuroblasts, as ...

Time-lapse Live Imaging of Clonally Related Neural Progenitor Cells in the Developing Zebrafish Forebrain

זמן לשגות הדמיה חיה של Related Clonally ובתאים עצבית של פיתוח דג הזברה forebrain

Precise patterns of division, migration and differentiation of neural progenitor cells are crucial for proper brain development and function1,2. To ...

Preparation of Acute Subventricular Zone Slices for Calcium Imaging

הכנת Slices האזור Subventricular החריף להדמית סיד

The subventricular zone (SVZ) is one of the two neurogenic zones in the postnatal brain. The SVZ contains densely packed cells, including neural ...

Dual Electrophysiological Recordings of Synaptically-evoked Astroglial and Neuronal Responses in Acute Hippocampal Slices

קלטות אלקטרו כפולות של תגובות Astroglial ועצביות עוררו-synaptically בפרוסות ביפוקמפוס חריפות

Astrocytes form together with neurons tripartite synapses, where they integrate and modulate neuronal activity. Indeed, astrocytes sense neuronal inputs ...

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

In vivo electroporation ואחרי הלידה וזמן לשגות הדמיה של neuroblast הגירה בעכבר חריפה פרוסות המוח

The subventricular zone (SVZ) is one of the main neurogenic niches in the postnatal brain. Here, neural progenitors proliferate and give rise to ...

Nucleofection of Rodent Neuroblasts to Study Neuroblast Migration In vitro

Nucleofection of Rodent Neuroblasts to Study Neuroblast Migration In vitro

Nucleofection של neuroblasts מכרסמים לחקר הגירת neuroblast<em&gt; במבחנה</em

The subventricular zone (SVZ) located in the lateral wall of the lateral ventricles plays a fundamental role in adult neurogenesis. In this restricted ...

Long-term Time Lapse Imaging of Mouse Cochlear Explants

לטווח ארוך זמן פקיעת הדמיה של Explants שבלול העכבר

Here we present a method for long-term time-lapse imaging of live embryonic mouse cochlear explants. The developmental program responsible for building ...

In-depth Physiological Analysis of Defined Cell Populations in Acute Tissue Slices of the Mouse Vomeronasal Organ

מעמיק פיסיולוגי ניתוח של אוכלוסיות תאים מוגדרות ב אקוטי רקמות פרוסות של איברי עכבר vomeronasal

In most mammals, the vomeronasal organ (VNO) is a chemosensory structure that detects both hetero- and conspecific social cues. Vomeronasal sensory ...

Preparation of Horizontal Slices of Adult Mouse Retina for Electrophysiological Studies

הכנת פרוסות אופקיות של רשתית למבוגרים עכבר עבור אלקטרו מחקרים

Vertical slice preparations are well established to study circuitry and signal transmission in the adult mammalian retina. The plane of sectioning in ...

Time-lapse Confocal Imaging of Migrating Neurons in Organotypic Slice Culture of Embryonic Mouse Brain Using In Utero Electroporation

Time-lapse Confocal Imaging of Migrating Neurons in Organotypic Slice Culture of Embryonic Mouse Brain Using In Utero Electroporation

זמן לשגות Confocal הדמיה של נוירונים נודדים תרבות פרוסה Organotypic של המוח עכבר עובריים באמצעות<em&gt; באוטרו</em&gt; Electroporation

In utero electroporation is a rapid and powerful approach to study the process of radial migration in the cerebral cortex of developing mouse embryos. It ...