Name: staining protocols for human pancreatic islets
Uploaded: 2012-05-23T13:00:00
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作者感谢捐助者的家庭和组织的专家协助参与这项研究和刘慧卿蒙哥马利罗伯特Pietras，安富，Mitali阿加瓦尔，罗山阿加瓦尔器官采购。这项工作是由青少年糖尿病研究基金会（MC-T.）对糖尿病患者的胰腺器官捐赠者的网络支持。

1。为不染节的切片<ol><li>成立水浴和标准的石蜡切片切片。正电的幻灯片和前标签使用数量的情况下，胰腺区域（样品）和幻灯片编号。广场左侧的磁带标签的切片机夹头的石蜡块。 </li><li>按照正常切片程序，节成块，直到组织均匀遇到。产生一个连续切片（4μm厚3-6（见案例提交表格， 附录1）根据初期所需的污渍）剪彩。色带单独的章节，以便拿起，和幻灯片的地方用铅笔编号?...

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	<li>In't Veld, P., Marichal, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microscopic+anatomy+of+the+human+islet+of+Langerhans.">Microscopic anatomy of the human islet of Langerhans.</a> Adv. Exp. Med. Biol. 654, 1-19 (2010).</li><li>Matveyenko, A. V., Butler, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+between+beta-cell+mass+and+diabetes+onset.">Relationship between beta-cell mass and diabetes onset.</a> Diabetes Obes. Metab. 10, 23-31 (2008).</li><li>Saisho, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pancreas+volumes+in+humans+from+birth+to+age+one+hundred+taking+into+account+sex,+obesity,+and+presence+of+type-2+diabetes.">Pancreas volumes in humans from birth to age one hundred taking into account sex, obesity, and presence of type-2 diabetes.</a> Clin. Anat. 20, 933-942 (2007).</li><li>Hruban, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pancreatic+intraepithelial+neoplasia:+a+new+nomenclature+and+classification+system+for+pancreatic+duct+lesions.">Pancreatic intraepithelial neoplasia: a new nomenclature and classification system for pancreatic duct lesions.</a> Am. J. Surg. Pathol. 25, 579-586 (2001).</li><li>Campbell-Thompson, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pancreatic+adenocarcinoma+patients+with+localised+chronic+severe+pancreatitis+show+an+increased+number+of+single+beta+cells,+without+alterations+in+fractional+insulin+area.">Pancreatic adenocarcinoma patients with localised chronic severe pancreatitis show an increased number of single beta cells, without alterations in fractional insulin area.</a> Diabetologia. 52, 262-270 (2009).</li><li>Meier, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beta-cell+replication+is+the+primary+mechanism+subserving+the+postnatal+expansion+of+beta-cell+mass+in+humans.">Beta-cell replication is the primary mechanism subserving the postnatal expansion of beta-cell mass in humans.</a> Diabetes. 57, 1584-1594 (2008).</li><li>Rowe, P. A., Campbell-Thompson, M. L., Schatz, D. A., Atkinson, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pancreas+in+human+type+1+diabetes.">The pancreas in human type 1 diabetes.</a> Semin. Immunopathol. 33, 29-43 (2011).</li><li>Veld, I. n. '. t., P, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulitis+in+human+type+1+diabetes:+The+quest+for+an+elusive+lesion.">Insulitis in human type 1 diabetes: The quest for an elusive lesion.</a> Islets. 3, 131-138 (2011).</li><li>van Belle, T. L., Coppieters, K. T., von Herrath, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Type+1+diabetes:+etiology,+immunology,+and+therapeutic+strategies.">Type 1 diabetes: etiology, immunology, and therapeutic strategies.</a> Physiol Rev. 91, 79-118 (2011).</li></ol>

免疫组化标准化程序是图像分析的关键，特别是当使用大量的幻灯片之间随着时间的推移以计算机为基础的算法。在本报告所述的免疫组化染色过程将使一批在8小时工作制Autostainer自动给定的捐赠者的样品的分析和修改是从以 ​​前的报告5。每个彩色幻灯片的全数字化的幻灯片图像可通过基于web的在线病理系统nPOD附属调查。研究人员可以审查与幻灯片一起捐助者的人口统计资料，实验?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 试剂名称 </td><td> 公司 </td><td> 目录编号 </td><td> 评论 </td></tr><tr><td> 30％的过氧化氢 ​​（H 2 O 2） </td><td> FisherScientific </td><td> H325-500 </td><td>内源性过氧化物酶阻止</td></tr><tr><td> ABC - 碱性磷酸酶（AP） </td><td>向量</td><td> AK-5000 </td><td> AP的共轭</td></tr><tr><td>抗体稀释液</td><td> Invitrogen公司</td><td> 003218 </td><td>初级抗体</td></tr><tr><td>抗生物素蛋白受体阻滞剂</td><td>向量</td><td> SP-2001 </td><td>阻止内源性生物素</td></tr><tr><td>生物素标记的羊抗豚鼠</td><td>向量</td><td> BA-7000 </td><td>二级抗体</td></tr><tr><td>烧蓝试剂</td><td> FisherScientific </td><td> 7301 </td><td>徕卡autostaineŕ </td></tr><tr><td>柠檬酸缓冲液，pH值6.0 </td><td> BioGenex </td><td> HK086-9K </td><td>抗原检索</td></tr><tr><td>澄清1 </td><td> FisherScientific </td><td> 7401 </td><td>徕卡Autostainer自动</td></tr><tr><td> cytoseal XYL </td><td> FisherScientific </td><td> 8312-4 </td><td>盖玻片mountant </td></tr><tr><td>民建联</td><td>向量</td><td> SK-4100 </td><td> HRP的发色</td></tr><tr><td> Deeb医师</td><td> DAKO公司</td><td> S2003 </td><td>内源性的AP阻断试剂</td></tr><tr><td>曙红Y酒精</td><td> FisherScientific </td><td> 71204 </td><td>徕卡Autostainer自动</td></tr><tr><td>乙醇，100％，95％，90％，70％ </td><td> FisherScientific </td><td>各个</td><td> deparaffinization和盖片</td></tr><tr><td>苏木</td><td> DAKO公司</td><td> S3301 </td><td> Dako公司Autostainer自动</td></tr><tr><td>苏木7211 </td><td> FisherScientific </td><td> 7211 </td><td>徕卡Autostainer自动</td></tr><tr><td>抗体（初级抗体的所有主机的物种） </td><td>各个</td><td>各个</td><td>初选的阴性对照</td></tr><tr><td>液体永固红（LPR）， </td><td> DAKO公司</td><td> K0640 </td><td>美联社发色</td></tr><tr><td> MACH2美联社</td><td>保科医疗</td><td> MALP521L </td><td>山羊抗小鼠AP共轭</td></tr><tr><td> MACH2酶</td><td>保科医疗</td><td> MHRP520L </td><td>羊抗鼠HRP结合物</td></tr><tr><td> MACH2酶</td><td>保科医疗</td><td> RHRP520L </td><td>羊抗鼠HRP结合物</td></tr><tr><td>甲醇</td><td> FisherScientific </td><td>各个</td><td> H 2 O 2稀释剂</td></tr><tr><td>正常山羊血清</td><td>向量</td><td>的S-1000 </td><td>免疫组织化学阻断试剂</td></tr><tr><td>狙击手</td><td>保科医疗</td><td> BS966M </td><td>免疫组织化学阻断试剂</td></tr><tr><td> TBST 20X </td><td> ThermoScientific </td><td> TA-999 - TT </td><td>免疫组化缓冲区</td></tr><tr><td> triology 20X </td><td>细胞马凯</td><td> 920P-06 </td><td>抗原检索</td></tr><tr><td>二甲苯</td><td> FisherScientific </td><td>各个</td><td> deparaffinization和盖片</td></tr></tbody></table> 表1。特定的试剂。 <table border="1"><tbody><tr><td> 初级抗体 </td><td> 宿主物种 </td><td> 供应商 </td><td> 猫。 ＃ </td><td> 评论和抗原检索 </td></tr><tr><td> 石蜡 </td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>淀粉酶</td><td>鼠标</td><td>圣克鲁斯</td><td> SC-46657 </td><td>柠檬酸</td></tr><tr><td>淀</td><td>鼠标</td><td> Serotec公司</td><td> MCA11267 </td><td>柠檬酸</td></tr><tr><td>碳酸酐19.9 </td><td>鼠标</td><td> abcam </td><td> ab15146 </td><td></td></tr><tr><td> Caspase-3的，切割</td><td>兔</td><td>细胞信号</td><td> 9961 </td><td>柠檬酸或三部曲</td></tr><tr><td>抗CD20 </td><td>鼠标</td><td> DAKO公司</td><td> M0755 </td><td>柠檬酸或三部曲</td></tr><tr><td> CD3 </td><td>兔</td><td> DAKO公司</td><td> A0452 </td><td>柠檬酸</td></tr><tr><td> CD34的</td><td>鼠标</td><td>细胞信号</td><td> 3569 </td><td>柠檬酸</td></tr><tr><td>的CD4 </td><td>鼠标</td><td> DAKO公司</td><td> M7310 </td><td>柠檬酸</td> &lt;/ TR&gt; <tr><td> CD45的</td><td>鼠标</td><td> DAKO公司</td><td> M0754 </td><td>柠檬酸</td></tr><tr><td> CD68阳性</td><td>鼠标</td><td> DAKO公司</td><td> M0876 </td><td>柠檬酸</td></tr><tr><td> CD8 + </td><td>鼠标</td><td> DAKO公司</td><td> M7103 </td><td>柠檬酸</td></tr><tr><td>嗜铬素A </td><td>兔</td><td> DAKO公司</td><td> A0430 </td><td>柠檬酸</td></tr><tr><td> CK17 </td><td>鼠标</td><td> DAKO公司</td><td> M7046 </td><td>柠檬酸</td></tr><tr><td> CK19， </td><td>鼠标</td><td> DAKO公司</td><td> M0772 </td><td>柠檬酸</td></tr><tr><td> CK7 </td><td>鼠标</td><td> DAKO公司</td><td> M7018 </td><td>柠檬酸</td></tr><tr><td> C-肽</td><td>兔</td><td>细胞信号</td><td> 4593 </td><td>柠檬酸</td></tr><tr><td> FOXP3 </td><td>鼠</td><td> Ë生命科学</td><td> 14-4776-80 </td&gt; <td>柠檬酸</td></tr><tr><td> ghrelin的</td><td>山羊</td><td>圣克鲁斯</td><td> SC-10386 </td><td></td></tr><tr><td> ghrelin的</td><td>兔</td><td> abcam </td><td> ab85104 </td><td></td></tr><tr><td>胰高血糖素</td><td>兔</td><td> DAKO公司</td><td> A0565 </td><td></td></tr><tr><td>胰高血糖素</td><td>鼠标</td><td> abcam </td><td> ab10988 </td><td>柠檬酸</td></tr><tr><td>胰高血糖素</td><td>豚鼠</td><td>巴赫姆</td><td>的T-5037 </td><td>柠檬酸</td></tr><tr><td> GLUT-1 </td><td>鼠标</td><td> abcam </td><td> ab40084 </td><td>三部曲</td></tr><tr><td> GLUT-2 </td><td>兔</td><td>圣克鲁斯</td><td> SC-9117 </td><td>在人类胰岛细胞不表达</td></tr><tr><td>胰岛素</td><td>豚鼠</td><td> DAKO公司</td><td> A0564 </td><td></td></tr> &lt;TR&gt; <td> Ki-67的</td><td>鼠标</td><td> DAKO公司</td><td> M7240 </td><td>柠檬酸</td></tr><tr><td>玛法</td><td>兔</td><td> Novus公司生物</td><td> NB400-137A </td><td>三部曲</td></tr><tr><td>胰多肽</td><td>兔</td><td> Invitrogen公司</td><td> 18-0043 </td><td>柠檬酸</td></tr><tr><td> PDX-1 </td><td>豚鼠</td><td> abcam </td><td> ab47308 </td><td>柠檬酸或三部曲</td></tr><tr><td>胰岛素原</td><td>鼠标</td><td> novocastra </td><td> NCL-proin-1G4 </td><td></td></tr><tr><td>胰岛素原</td><td>鼠标</td><td>发展研究杂交瘤细胞银行</td><td> GS-9A8 </td><td>柠檬酸</td></tr><tr><td> secretagogin </td><td>兔</td><td>西格玛</td><td>自置居所津贴006641 </td><td>柠檬酸</td></tr><tr><td>平滑肌肌动蛋白</td><td>兔</td><td> abcam </td><td> ab5694 &lt;/ TD&gt; <td></td></tr><tr><td>生长抑素</td><td>兔</td><td> DAKO公司</td><td> A0566 </td><td></td></tr><tr><td>突触素</td><td>鼠标</td><td> DAKO公司</td><td> M0776 </td><td>柠檬酸</td></tr><tr><td> 新鲜冰冻 </td><td> 宿主物种 </td><td> 供应商 </td><td> 猫。 ＃ </td><td> 评论 </td></tr><tr><td> CD11b的</td><td>鼠</td><td> abcam </td><td> ab6332 </td><td>修正4％PF </td></tr><tr><td> CD11c的</td><td>兔</td><td> Serotec公司</td><td> AHP1226 </td><td></td></tr><tr><td> CD25表达</td><td>鼠标</td><td> Novus公司生物</td><td>注：600-564 </td><td>用石蜡切片过夜培养</td></tr><tr><td> CD94的</td><td>鼠标</td><td> abcam </td><td> ab61874 </td><td>修正用丙酮</td></tr><tr><td>谷氨酸脱羧酶</td><td>鼠标</td><td>圣克鲁斯</td><td> SC-130569 </td><td>修正4％PF </td></tr><tr><td> HLA - ABC </td><td>鼠标</td><td> DAKO公司</td><td> M0736 </td><td>修正用丙酮或4％PF </td></tr></tbody></table> 表2。小学抗体。 <table border="1"><tbody><tr><td> 试剂名称 </td><td> 公司 </td><td> 目录编号 </td><td> 评论 </td></tr><tr><td> aperio Scanscope CS </td><td> aperio </td><td></td><td>数字幻灯片扫描仪</td></tr><tr><td> DAKO公司Autostainer自动增强</td><td> DAKO公司</td><td></td><td>免疫组化的污渍</td></tr><tr><td>标签矩阵打印软件</td><td> BioCarta </td><td> LM7UP57 </td><td>幻灯片标签软件</td></tr><tr><td>徕卡加大Autostainer自动</td><td>徕卡</td><td></td><td> ，H＆é污渍</td></tr><tr><td>溢价盖玻片</td><td> FisherScientific </td><td> 12-548-5J </td><td>盖玻片</td></tr><tr><td>频谱信息管理</td><td> aperio </td><td></td><td>扫描仪软件</td></tr><tr><td> superfrost加滑</td><td> FisherScientific </td><td> 12-550-15 </td><td>正电的幻灯片</td></tr><tr><td>蔬菜蒸笼</td><td>布莱克和德克尔</td><td>各个</td><td>抗原检索</td></tr><tr><td>斑马的TLP 3742 </td><td> CDWG </td><td> TLP3742 </td><td>幻灯片标签打印机</td></tr></tbody></table> 表3。特殊用品和设备。

staining protocols for human pancreatic islets

胰岛面积和数字，在成人胰腺内分泌细胞组成的估计各不相同，从几十万到几百万和β的质量范围从500至1500毫克1-3。这个著名的异质性，开发一个标准的加工和染色过程，使胰腺地区进行了明确规定和胰岛细胞的特点，用严格的组织病理学和免疫组化检查。 本系列第1部分中描述的标准化程序处理人体器官捐赠者的胰腺恢复。胰腺被加工成横截面的3个主要地区（头，身，尾）。横截面从胰头进一步划分，如根据大小，按字母顺序和编号表示小节。这种标准化允许的头部区域的一个完整的交叉截面分析包括钩突的区域，其中包含小岛组成主要的胰多肽细胞的尾部区域。 目前的报告，包括本系列的第2部分，介绍了用于强调胰岛内分泌细胞，复制，和T细胞的浸润胰腺石蜡切片连续切片和病理特征的程序。病理学胰腺节的目的是表征两个外分泌腺，胆管，内分泌组件。在的外分泌腺车厢被评为存在胰腺炎（主动或慢性），萎缩，纤维化，脂肪，以及管道系统，特别是在关系到存在的胰腺导管内肿瘤4。评估胰岛形态，大小，密度，内分泌细胞，炎症，纤维化，淀粉样蛋白，并使用H＆E和免疫组化污渍复制或凋亡细胞的存在。 第2部分中描述的最后一个组件是提供彩色幻灯片作为数字化整体幻灯片图像。数字化幻灯片的情况下，在网上创建一个虚拟的生物资料库的病理数据库胰腺地区举办。访问这个网上收集目前提供超过200名医生和1型糖尿病的研究中科学家参与。联机数据库提供了一个快速和完整的数据共享和调查选择石蜡或冰冻连续切片块的手段。

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Staining Protocols for Human Pancreatic Islets

本视频演示了人体胰腺胰岛细胞用苏木精伊红（H＆E）和免疫​​组化法（IHC）的鉴定程序。从头部，身体，和尾区域胰腺部分是染色都Ĥ＆é和免疫组化确定胰岛内分​​泌（胰岛素，胰高血糖素，和胰多肽）组成，细胞复制（Ki67的）和（H＆E，CD3）炎性浸润。钩突地区的本地化使用胰多肽免疫组化。

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Estimates of islet area and numbers and endocrine cell composition in the adult human pancreas vary from several hundred thousand to several million and ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Isolation of Human Islets from Partially Pancreatectomized Patients

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Investigations into the pathogenesis of type 2 diabetes and islets of Langerhans malfunction 1 have been hampered by the limited availability of type 2 ...

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