Name: preparation of acute subventricular zone slices for calcium imaging
Uploaded: 2012-09-19T11:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Acute Subventricular Zone Slices for Calcium Imaging at JoVE.com

وأيد هذا العمل من المنح المقدمة من المعاهد الوطنية للصحة (DC007681، AB)، CT الخلايا الجذعية منحة (AB)، باردي الأساس (AB)، Predoctoral روث L. كيرشتاين القومي للبحوث الخدمة الجوائز (NRSA) (SZY)، ودراسات عليا أبحاث NSF الزمالة (BL). نشكر أعضاء مختبر Bordey للتعليقات مفيدة على المخطوطة. ويستند المواد الحالية على العمل المدعوم جزئيا من ولاية كونيتيكت تحت الخلايا الجذعية كونيتيكت برنامج المنح البحثية. محتوياته هي الجهة الوحيدة المسؤولة عن أصحابها ولا تعبر بالضرورة عن وجهات النظر الرسمية للدولة من ولاية كونيتيكت، وزارة الصحة العامة في دولة الابتكارات كونيتيكت أو CT، إعلام.

1. إعداد حلول، تشريح، وVibratome <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يجب أن يكون مستعدا الحلول في الأسمولية الصحيح ودرجة الحموضة (الجدول 1). مقارنة السائل النخاعي الاصطناعي (ACSF)، على استعداد حل تشريح مع انخفاض تركيزات الصوديوم والكالسيوم، وتركيزات أ...

<ol>
	<li>Peretto, P., Giachino, C., Aimar, P., Fasolo, A., Bonfanti, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chain+formation+and+glial+tube+assembly+in+the+shift+from+neonatal+to+adult+subventricular+zone+of+the+rodent+forebrain.">Chain formation and glial tube assembly in the shift from neonatal to adult subventricular zone of the rodent forebrain.</a> J. Comp Neurol. 487, 407-427 (2005).</li><li>Lacar, B., Young, S. Z., Platel, J. C., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+and+recording+subventricular+zone+progenitor+cells+in+live+tissue+of+postnatal+mice.">Imaging and recording subventricular zone progenitor cells in live tissue of postnatal mice.</a> Front. Neurosci. 4, 10-3389 (2010).</li><li>Lacar, B., Young, S. Z., Platel, J. C., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gap+junction-mediated+calcium+waves+define+communication+networks+among+murine+postnatal+neural+progenitor+cells.">Gap junction-mediated calcium waves define communication networks among murine postnatal neural progenitor cells.</a> Eur. J. Neurosci. , (2011).</li><li>Platel, J. C., Dave, K. A., Gordon, V., Lacar, B., Rubio, M. E., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NMDA+receptors+activated+by+subventricular+zone+astrocytic+glutamate+are+critical+for+neuroblast+survival+prior+to+entering+a+synaptic+network.">NMDA receptors activated by subventricular zone astrocytic glutamate are critical for neuroblast survival prior to entering a synaptic network.</a> Neuron. 65, 859-872 (2010).</li><li>Platel, J. C., Dupuis, A., Boisseau, S., Villaz, M., Albrieux, M., Brocard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synchrony+of+spontaneous+calcium+activity+in+mouse+neocortex+before+synaptogenesis.">Synchrony of spontaneous calcium activity in mouse neocortex before synaptogenesis.</a> Eur. J. Neurosci. 25, 920-928 (2007).</li><li>Young, S. Z., Platel, J. C., Nielsen, J. V., Jensen, N. A., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GABAA+increases+calcium+in+subventricular+zone+astrocyte-like+cells+through+L-+and+T-type+voltage-gated+calcium+channels.">GABAA increases calcium in subventricular zone astrocyte-like cells through L- and T-type voltage-gated calcium channels.</a> Front. Cell. Neurosci. 4, 8 (2010).</li><li>Bolteus, A. J., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GABA+Release+and+Uptake+Regulate+Neuronal+Precursor+Migration+in+the+Postnatal+Subventricular+Zone.">GABA Release and Uptake Regulate Neuronal Precursor Migration in the Postnatal Subventricular Zone.</a> J. Neurosci. 24, 7623-7631 (2004).</li><li>Platel, J., Heintz, T., Young, S., Gordon, V., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tonic+activation+of+GLUK5+kainate+receptors+decreases+neuroblast+migration+in+a+whole+mount+preparation+of+the+subventricular+zone.">Tonic activation of GLUK5 kainate receptors decreases neuroblast migration in a whole mount preparation of the subventricular zone.</a> J. Physiol. (Lond). 586, 3783-3793 (2008).</li><li>Nam, S. C., Kim, Y., Dryanovski, D., Walker, A., Goings, G., Woolfrey, K., Kang, S. S., Chu, C., Chenn, A., Erdelyi, F., Szabo, G., Hockberger, P., Szele, F. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+features+of+postnatal+subventricular+zone+cell+motility:+a+two-photon+time-lapse+study.">Dynamic features of postnatal subventricular zone cell motility: a two-photon time-lapse study.</a> J. Comp. Neurol. 505, 190-208 (2007).</li><li>Lacar, B. L., Platel, J. C., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GABA+controls+Ca2++activity-dependent+network+synchrony+in+the+adult+neurogenic+forebrain.">GABA controls Ca2+ activity-dependent network synchrony in the adult neurogenic forebrain.</a> , (2007).</li><li>Liu, X., Bolteus, A. J., Balkin, D. M., Henschel, O., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GFAP-expressing+cells+in+the+postnatal+subventricular+zone+display+a+unique+glial+phenotype+intermediate+between+radial+glia+and+astrocytes.">GFAP-expressing cells in the postnatal subventricular zone display a unique glial phenotype intermediate between radial glia and astrocytes.</a> Glia. 54, 394-410 (2006).</li><li>Wang, D. D., Krueger, D. D., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biophysical+properties+and+ionic+signature+of+neuronal+progenitors+of+the+postnatal+subventricular+zone+in+situ.">Biophysical properties and ionic signature of neuronal progenitors of the postnatal subventricular zone in situ.</a> J. Neurophysiol. 90, 2291-2302 (2003).</li><li>Tian, L., Hires, S. A., Mao, T., Huber, D., Chiappe, M. E., Chalasani, S. H., Petreanu, L., Akerboom, J., McKinney, S. A., Schreiter, E. R., Bargmann, C. I., Jayaraman, V., Svoboda, K., Looger, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+neural+activity+in+worms,+flies+and+mice+with+improved+GCaMP+calcium+indicators.">Imaging neural activity in worms, flies and mice with improved GCaMP calcium indicators.</a> Nat. Methods. 6, 875-881 (2009).</li><li>Zhao, Y., Araki, S., Wu, J., Teramoto, T., Chang, Y. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+expanded+palette+of+genetically+encoded+Ca(2)+indicators.">An expanded palette of genetically encoded Ca(2) indicators.</a> Science. 333, 1888-1891 (2011).</li><li>Shigetomi, E., Kracun, S., Sofroniew, M. V., Khakh, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+genetically+targeted+optical+sensor+to+monitor+calcium+signals+in+astrocyte+processes.">A genetically targeted optical sensor to monitor calcium signals in astrocyte processes.</a> Nat. Neurosci. 13, 759-766 (2010).</li></ol>

وقد استخدم التصوير الكالسيوم من الخلايا لدراسة أنماط SVZ في النشاط العفوي في neuroblasts 10، مستقبلات التعبير في كل من قناة neuroblasts والخلايا النجمية وموجات 4،6،8 الكالسيوم نجمي 3. منذ الخلايا في SVZ هي غير ناضجة أو لها خصائص الدبقية، فإنها لا تطلق الإمكانيات ...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> المذاب </td><td> شركة </td><td> كتالوج رقم </td><td> تشريح (مم) </td></tr><tr><td> سكر القصب </td><td> سيجما </td><td> S0389 </td><td> تشريح: 147 مم ACSF: 0 ملم </td></tr><tr><td> كلوريد الصوديوم </td><td> سيجما </td><td> S9888 </td><td> تشريح: 42 مم ACSF: 126 ملم </td></tr><tr><td> بوكل </td><td> سيجما </td><td> P3911 </td><td> تشريح: 2.5 ملم ACSF: 2.5 ملم </td></tr><tr><td> MgCl 2 0.6 H 2 O </td><td> سيجما </td><td> M9272 </td><td> تشريح: 4.33 ملم ACSF: 1 ملم </td></tr><tr><td> ناه 2 PO 4. H 2 O </td><td> سيجما </td><td> S8282 </td><td> تشريح: 1.25 مم ACSF: 1.25 مم </td></tr><tr><td> جلوكوز </td><td> سيجما </td><td> G8270 </td><td> Dissection: 10 مم ACSF: 10 مم </td></tr><tr><td> NaHCO 3 </td><td> سيجما </td><td> S6014 </td><td> تشريح: 26 مم ACSF: 26 مم </td></tr><tr><td> CaCl 2 0.2 H 2 O </td><td> سيجما </td><td> C3306 </td><td> تشريح: 1.33 ملم ACSF: 2 مم </td></tr></tbody></table> قائمة الجدول الكيميائية 1. وصفات من حل ACSF وتشريح. <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td></td><td></td><td></td><td> [رأس] </td></tr><tr><td> اسم </td><td> شركة </td><td> كتالوج رقم </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> Vibratome </td><td> لايكا </td><td> VT من 1000s </td><td></td></tr><tr><td> سوبر الغراء </td><td> Surehold أو 3M </td><td> Surehold 3G سوبر الغراء أو 3M البيطرية بوند </td><td></td></tr><tr><td> تشريح الأدوات </td><td> Roboz أو بيلا تيد </td><td></td><td></td></tr><tr><td> فلوو-04:00 الكالسيوم صبغة حساسة لل </td><td> إينفيتروجن </td><td> F14201 </td><td></td></tr><tr><td> ولاية أوريغون الخضراء BAPTA-01:00 الكالسيوم صبغة حساسة لل </td><td> إينفيتروجن </td><td> O6807 </td><td></td></tr><tr><td> الحل بلورونيك F-127 20٪ في DMSO </td><td> إينفيتروجن </td><td> P3000MP </td><td></td></tr><tr><td> مبائر المجهر تستقيم </td><td> OLYMPUS </td><td> FV300 أو FV1000 </td><td></td></tr><tr><td> الغمر بالمياه الأهداف </td><td> OLYMPUS </td><td> LUMPlanFl 40 × W / IR (NA 0.80)؛ LUMPlanFl 60 × W / I (NA 0.90) </td><td></td></tr><tr><td> Micromanipulators </td><td> سوتر </td><td> MPC-200/MPC-325/MPC-385 </td><td></td></tr><tr><td> ضغط تحكم &lt;/ TD&gt; <td> باركر Hannifin </td><td> Picospritzer </td><td> &lt;3 PSI خلال تطبيق </td></tr><tr><td> ماصة مجتذب </td><td> سوتر أو Narshige </td><td> سوتر P-97 أو Narshige PP-830 </td><td></td></tr><tr><td> ماصات زجاجية </td><td> سوتر </td><td> BF150-110-10 </td><td> ID: 1.10، OD: 1.50 </td></tr><tr><td> تحوي مضخة </td><td> جهاز هارفارد </td><td> نموذج 720 </td><td> معدل التدفق: 1 مل / دقيقة </td></tr><tr><td> غرفة حمام </td><td> وارنر الصكوك </td><td> RC-26 GLP </td><td> الانظار يسمح لإزالة الهدف </td></tr><tr><td> أنبوب </td><td> Tygon </td><td></td><td></td></tr><tr><td> درجة الحرارة المراقب المالي </td><td> وارنر الصكوك </td><td> TC-324B/344B </td><td></td></tr></tbody></table> الجدول 2. المواد / قائمة المعدات.

preparation of acute subventricular zone slices for calcium imaging

منطقة subventricular (SVZ) هي واحدة من المنطقتين العصبية في الدماغ بعد الولادة. ويحتوي على خلايا SVZ المزدحمة بالسكان، بما في ذلك الخلايا العصبية السلف مع ميزات نجمي (وتسمى الخلايا النجمية SVZ)، neuroblasts، والخلايا الاولية وسيطة. Neuroblasts ولد في SVZ ترحيل عرضية مسافة كبيرة على البصلة الشمية، حيث أنها تفرق في interneurons. إشارات بين الخلايا من خلال جزيئات الالتصاق وإشارات إنتشاري تلعب أدوارا هامة في تكوين الخلايا العصبية مسيطرة. كثير من هذه الإشارات بين الخلايا يؤدي النشاط الكالسيوم التي تنقل المعلومات داخل وبين الخلايا. النشاط الكالسيوم وبالتالي هو انعكاس لنشاط خارج الخلية إشارات وهي الطريقة المثلى لفهم الإشارات بين الخلايا الوظيفية بين خلايا SVZ. وقد تمت دراسة نشاط الكالسيوم في العديد من المناطق الأخرى وأنواع الخلايا، بما في ذلك الخلايا النجمية والخلايا العصبية الناضجة. ومع ذلك، فإن الطريقة التقليدية لمبناهاكان د مع الكالسيوم خلايا الصبغة مؤشر (أي تحميل حمام) ليست فعالة في تحميل جميع أنواع الخلايا SVZ. والواقع أن الكثافة الخلوية في SVZ يمنع نشر الصبغة داخل الأنسجة. وبالإضافة إلى ذلك، سوف إعداد شرائح سهمي الحفاظ على أفضل ترتيب ثلاثي الأبعاد من الخلايا SVZ، ولا سيما تيار الهجرة أرومة عصبية على المحور منقاري-الذيلية. هنا، نحن تصف طرق لإعداد أقسام السهمي الذي يحتوي على SVZ، التحميل من خلايا الصبغة SVZ مع مؤشر الكالسيوم، واكتساب النشاط الكالسيوم مع مرور الزمن الأفلام. كنا فلوو-04:00 صبغ الخلايا النجمية لتحميل التطبيق الخاص SVZ الضغط داخل الأنسجة. تم تسجيل النشاط الكالسيوم باستخدام مجهر المسح مبائر يسمح قرار دقيقة لتمييز الخلايا الفردية. نهجنا ينطبق على مناطق أخرى العصبية بما في ذلك منطقة قرن آمون والكبار جزئي التحبب المناطق العصبية الجنينية. وبالإضافة إلى ذلك، يمكن لأنواع أخرى من الأصباغأن يطبق باستخدام الطريقة الموصوفة.

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Acute Subventricular Zone Slices for Calcium Imaging at JoVE.com

Preparation of Acute Subventricular Zone Slices for Calcium Imaging

ووصف طريقة لتحميل subventricular منطقة (SVZ) الخلايا مع الأصباغ الكالسيوم مؤشر لنشاط الكالسيوم التسجيل. وSVZ بعد الولادة يحتوي على خلايا معبأة بإحكام بما في ذلك الخلايا العصبية والسلف neuroblasts. بدلا من استخدام حمام التحميل حقن الصبغة عن طريق فإننا الضغط داخل الأنسجة مما يسمح نشر أفضل صباغة.

إعداد شرائح الحاد المنطقة Subventricular للتصوير الكالسيوم

The subventricular zone (SVZ) is one of the two neurogenic zones in the postnatal brain. The SVZ contains densely packed cells, including neural ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

The Subventricular Zone En-face: Wholemount Staining and Ependymal Flow

المنطقة Subventricular اون الوجه : يلطخ Wholemount والتدفق البطانة العصبية

The walls of the lateral ventricles contain the largest germinal region in the adult mammalian brain. The subventricular zone (SVZ) in these walls is an ...

Preparation of Acute Hippocampal Slices from Rats and Transgenic Mice for the Study of Synaptic Alterations during Aging and Amyloid Pathology

إعداد شرائح الحصين الحادة من الجرذان والفئران المعدلة وراثيا لدراسة التعديلات متشابك وامراض الشيخوخة خلال اميلويد

The rodent hippocampal slice preparation is perhaps the most broadly used tool for investigating mammalian synaptic function and plasticity. The ...

Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Acute Slices of the Adult Mouse Forebrain

الوقت الفاصل بين التصوير للهجرة أرومة عصبية في شرائح الدماغ الأمامي الحاد للماوس الكبار

There is a substantial body of evidence indicating that new functional neurons are constitutively generated from an endogenous pool of neural stem cells ...

Imaging Calcium Responses in GFP-tagged Neurons of Hypothalamic Mouse Brain Slices

الردود الكالسيوم في الخلايا العصبية التصوير GFP الموسومة تحت المهاد البصري من شرائح مخ الفأر

Despite an enormous increase in our knowledge about the mechanisms underlying the encoding of information in the brain, a central question concerning the ...

Neonatal Subventricular Zone Electroporation

الوليد الصعق الكهربائي المنطقة Subventricular

Neural stem cells (NSCs) line the postnatal lateral ventricles and give rise to multiple cell types which include neurons, astrocytes, and ependymal ...

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

في الجسم الحي بعد الولادة التثقيب الكهربائي والوقت الفاصل بين التصوير من أرومة عصبية الهجرة في الدماغ الحادة ماوس شرائح

The subventricular zone (SVZ) is one of the main neurogenic niches in the postnatal brain. Here, neural progenitors proliferate and give rise to ...

Cell Sorting of Neural Stem and Progenitor Cells from the Adult Mouse Subventricular Zone and Live-imaging of their Cell Cycle Dynamics

فرز خلية العصبية الجذعية وخلايا السلف من الفأر Subventricular المنطقة الكبار وحية على التصوير من حيوية دورة الخلية الخاصة

Neural stem cells (NSCs) in the subventricular zone of the lateral ventricles (SVZ) sustain olfactory neurogenesis throughout life in the mammalian brain. ...

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

إعداد شرائح الدماغ الحادة باستخدام محسن N-الميثيل-د-أسلوب استرداد واقية جلوكاميني

This protocol is a practical guide to the N-methyl-D-glucamine (NMDG) protective recovery method of brain slice preparation. Numerous recent studies have ...

Prolonged Incubation of Acute Neuronal Tissue for Electrophysiology and Calcium-imaging

الحضانة لفترات طويلة الحادة العصبية الأنسجة للالكهربية والكالسيوم التصوير

Acute neuronal tissue preparations, brain slices and retinal wholemount, can usually only be maintained for 6 - 8 h following dissection. This limits the ...

Two-photon Calcium Imaging in Neuronal Dendrites in Brain Slices

تصوير الكالسيوم اثنين-فوتون في Dendrites العصبية في الدماغ شرائح

Calcium (Ca2+) imaging is a powerful tool to investigate the spatiotemporal dynamics of intracellular Ca2+ signals in neuronal dendrites. Ca2+ ...