Name: preparation of acute subventricular zone slices for calcium imaging
Uploaded: 2012-09-19T11:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Acute Subventricular Zone Slices for Calcium Imaging at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי מענקים מהמכון הלאומי לבריאות (DC007681, א.ב.), CT תאי גזע המענק (א.ב.), פארדי היסוד (א.ב.), Predoctoral רות ל Kirschstein שירות מחקר של הפרסים הלאומיים (NRSA) (SZY), ובוגר NSF מחקר מלגה (BL). אנו מודים לחברי מעבדת Bordey על הערות מועילות על כתב היד. החומר זה מבוסס על העבודה הנתמכת בחלקו על ידי מדינת קונטיקט במסגרת התכנית לקונטיקט לתאי הגזע למחקר המענקים. התוכן שלה הוא באחריות בלעדית של הכותבים ואינם מייצג בהכרח את עמדתה הרשמית של מדינת קונטיקט, המחלקה לבריאות ציבור של מדינת קונטיקט או CT חידושים, Incorporated.

1. הכנה של פתרונות, נתיחה, וvibratome <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתרונות צריכים להיות מוכנים באוסמולריות והחומציות הנכונות (טבלה 1). בהשוואה לנוזל השדרתי מלאכותי (ACSF), פתרון נתיחה הוא מוכן עם ריכוזים נמוכים של נתרן וסידן, וריכוזים גבוהים של מ?...

<ol>
	<li>Peretto, P., Giachino, C., Aimar, P., Fasolo, A., Bonfanti, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chain+formation+and+glial+tube+assembly+in+the+shift+from+neonatal+to+adult+subventricular+zone+of+the+rodent+forebrain.">Chain formation and glial tube assembly in the shift from neonatal to adult subventricular zone of the rodent forebrain.</a> J. Comp Neurol. 487, 407-427 (2005).</li><li>Lacar, B., Young, S. Z., Platel, J. C., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+and+recording+subventricular+zone+progenitor+cells+in+live+tissue+of+postnatal+mice.">Imaging and recording subventricular zone progenitor cells in live tissue of postnatal mice.</a> Front. Neurosci. 4, 10-3389 (2010).</li><li>Lacar, B., Young, S. Z., Platel, J. C., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gap+junction-mediated+calcium+waves+define+communication+networks+among+murine+postnatal+neural+progenitor+cells.">Gap junction-mediated calcium waves define communication networks among murine postnatal neural progenitor cells.</a> Eur. J. Neurosci. , (2011).</li><li>Platel, J. C., Dave, K. A., Gordon, V., Lacar, B., Rubio, M. E., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NMDA+receptors+activated+by+subventricular+zone+astrocytic+glutamate+are+critical+for+neuroblast+survival+prior+to+entering+a+synaptic+network.">NMDA receptors activated by subventricular zone astrocytic glutamate are critical for neuroblast survival prior to entering a synaptic network.</a> Neuron. 65, 859-872 (2010).</li><li>Platel, J. C., Dupuis, A., Boisseau, S., Villaz, M., Albrieux, M., Brocard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synchrony+of+spontaneous+calcium+activity+in+mouse+neocortex+before+synaptogenesis.">Synchrony of spontaneous calcium activity in mouse neocortex before synaptogenesis.</a> Eur. J. Neurosci. 25, 920-928 (2007).</li><li>Young, S. Z., Platel, J. C., Nielsen, J. V., Jensen, N. A., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GABAA+increases+calcium+in+subventricular+zone+astrocyte-like+cells+through+L-+and+T-type+voltage-gated+calcium+channels.">GABAA increases calcium in subventricular zone astrocyte-like cells through L- and T-type voltage-gated calcium channels.</a> Front. Cell. Neurosci. 4, 8 (2010).</li><li>Bolteus, A. J., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GABA+Release+and+Uptake+Regulate+Neuronal+Precursor+Migration+in+the+Postnatal+Subventricular+Zone.">GABA Release and Uptake Regulate Neuronal Precursor Migration in the Postnatal Subventricular Zone.</a> J. Neurosci. 24, 7623-7631 (2004).</li><li>Platel, J., Heintz, T., Young, S., Gordon, V., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tonic+activation+of+GLUK5+kainate+receptors+decreases+neuroblast+migration+in+a+whole+mount+preparation+of+the+subventricular+zone.">Tonic activation of GLUK5 kainate receptors decreases neuroblast migration in a whole mount preparation of the subventricular zone.</a> J. Physiol. (Lond). 586, 3783-3793 (2008).</li><li>Nam, S. C., Kim, Y., Dryanovski, D., Walker, A., Goings, G., Woolfrey, K., Kang, S. S., Chu, C., Chenn, A., Erdelyi, F., Szabo, G., Hockberger, P., Szele, F. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+features+of+postnatal+subventricular+zone+cell+motility:+a+two-photon+time-lapse+study.">Dynamic features of postnatal subventricular zone cell motility: a two-photon time-lapse study.</a> J. Comp. Neurol. 505, 190-208 (2007).</li><li>Lacar, B. L., Platel, J. C., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GABA+controls+Ca2++activity-dependent+network+synchrony+in+the+adult+neurogenic+forebrain.">GABA controls Ca2+ activity-dependent network synchrony in the adult neurogenic forebrain.</a> , (2007).</li><li>Liu, X., Bolteus, A. J., Balkin, D. M., Henschel, O., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GFAP-expressing+cells+in+the+postnatal+subventricular+zone+display+a+unique+glial+phenotype+intermediate+between+radial+glia+and+astrocytes.">GFAP-expressing cells in the postnatal subventricular zone display a unique glial phenotype intermediate between radial glia and astrocytes.</a> Glia. 54, 394-410 (2006).</li><li>Wang, D. D., Krueger, D. D., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biophysical+properties+and+ionic+signature+of+neuronal+progenitors+of+the+postnatal+subventricular+zone+in+situ.">Biophysical properties and ionic signature of neuronal progenitors of the postnatal subventricular zone in situ.</a> J. Neurophysiol. 90, 2291-2302 (2003).</li><li>Tian, L., Hires, S. A., Mao, T., Huber, D., Chiappe, M. E., Chalasani, S. H., Petreanu, L., Akerboom, J., McKinney, S. A., Schreiter, E. R., Bargmann, C. I., Jayaraman, V., Svoboda, K., Looger, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+neural+activity+in+worms,+flies+and+mice+with+improved+GCaMP+calcium+indicators.">Imaging neural activity in worms, flies and mice with improved GCaMP calcium indicators.</a> Nat. Methods. 6, 875-881 (2009).</li><li>Zhao, Y., Araki, S., Wu, J., Teramoto, T., Chang, Y. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+expanded+palette+of+genetically+encoded+Ca(2)+indicators.">An expanded palette of genetically encoded Ca(2) indicators.</a> Science. 333, 1888-1891 (2011).</li><li>Shigetomi, E., Kracun, S., Sofroniew, M. V., Khakh, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+genetically+targeted+optical+sensor+to+monitor+calcium+signals+in+astrocyte+processes.">A genetically targeted optical sensor to monitor calcium signals in astrocyte processes.</a> Nat. Neurosci. 13, 759-766 (2010).</li></ol>

הדמית סיד של תאי SVZ נעשתה שימוש כדי ללמוד את הדפוסים בפעילות ספונטנית בneuroblasts 10, ערוץ ביטוי הקולטן בשני neuroblasts והאסטרוציטים 4,6,8 וגלי סיד astrocytic 3. מאחר ותאים בSVZ הם או לא בוגרים או בעלי תכונות גליה, הם לא יירו פוטנציאלי פעולה 11,12, כלומר שינויים באלפ?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> מומס </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגים </td><td> דיסקציה (מ&quot;מ) </td></tr><tr><td> סוכרוז </td><td> סיגמא </td><td> S0389 </td><td> נתיחה: 147 מ&quot;מ ACSF: 0 מ&quot;מ </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> סיגמא </td><td> S9888 </td><td> נתיחה: 42 מ&quot;מ ACSF: 126 מ&quot;מ </td></tr><tr><td> KCl </td><td> סיגמא </td><td> P3911 </td><td> נתיחה: 2.5 מ&quot;מ ACSF: 2.5 מ&quot;מ </td></tr><tr><td> MgCl 2 0.6 H 2 O </td><td> סיגמא </td><td> M9272 </td><td> נתיחה: 4.33 מ&quot;מ ACSF: 1 mM </td></tr><tr><td> Nah 2 PO 4. H 2 O </td><td> סיגמא </td><td> S8282 </td><td> נתיחה: 1.25 מ&quot;מ ACSF: 1.25 מ&quot;מ </td></tr><tr><td> גלוקוז </td><td> סיגמא </td><td> G8270 </td><td> Dissection: 10 מ&quot;מימ ACSF: 10 מ&quot;מימ </td></tr><tr><td> 3 NaHCO </td><td> סיגמא </td><td> S6014 </td><td> נתיחה: 26 מ&quot;מ ACSF: 26 מ&quot;מ </td></tr><tr><td> CaCl 2 0.2 H 2 O </td><td> סיגמא </td><td> C3306 </td><td> נתיחה: 1.33 מ&quot;מ ACSF: 2 מ&quot;מ </td></tr></tbody></table> טבלה 1. רשימה כימית ומתכונים של פתרון נתיחה וACSF. <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td></td><td></td><td></td><td> [כותרת] </td></tr><tr><td> שם </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגים </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> Vibratome </td><td> ליקה </td><td> VT 1000s </td><td></td></tr><tr><td> Super Glue </td><td> Surehold או 3M </td><td> Surehold 3G Super Glue או 3M וטרינר בונד </td><td></td></tr><tr><td> כלי נתיחה </td><td> Roboz או טד פלה </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Fluo-04:00 לצבוע בסידן רגיש </td><td> Invitrogen </td><td> F14201 </td><td></td></tr><tr><td> אורגון גרין BAPTA-01:00 לצבוע בסידן רגיש </td><td> Invitrogen </td><td> O6807 </td><td></td></tr><tr><td> ה-F-127 20% פתרון Pluronic בDMSO </td><td> Invitrogen </td><td> P3000MP </td><td></td></tr><tr><td> confocal מיקרוסקופ הזקוף </td><td> אולימפוס </td><td> FV300 או FV1000 </td><td></td></tr><tr><td> מטרות מי טבילה </td><td> אולימפוס </td><td> LUMPlanFl 40 x W / IR (NA 0.80); LUMPlanFl 60 x W / אני (NA 0.90) </td><td></td></tr><tr><td> Micromanipulators </td><td> סאטר </td><td> MPC-200/MPC-325/MPC-385 </td><td></td></tr><tr><td> &lt;בקר לחץ/ Td&gt; <td> פארקר Hannifin </td><td> Picospritzer </td><td> &lt;3 PSI במהלך יישום </td></tr><tr><td> פיפטה חולץ </td><td> סאטר או Narshige </td><td> סאטר P-97 או Narshige PP-830 </td><td></td></tr><tr><td> pipettes זכוכית </td><td> סאטר </td><td> BF150-110-10 </td><td> ID: 1.10, OD: 1.50 </td></tr><tr><td> משאבת peristaltic </td><td> הרווארד Apparatus </td><td> דגם 720 </td><td> קצב זרימה: 1 מ&quot;ל / דקה </td></tr><tr><td> אמבטיה קאמרית </td><td> וורנר מכשירים </td><td> RC-26 GLP </td><td> פרופיל נמוך מאפשר לאישור אובייקטיבי </td></tr><tr><td> צנור </td><td> Tygon </td><td></td><td></td></tr><tr><td> בקר טמפרטורה </td><td> וורנר מכשירים </td><td> TC-324B/344B </td><td></td></tr></tbody></table> טבלה 2. חומרים / רשימת ציוד.

preparation of acute subventricular zone slices for calcium imaging

אזור subventricular (SVZ) הוא אחד משני האזורים במוח neurogenic לאחר הלידה. SVZ מכיל תאים צפופים, כולל תאי אב עצביים עם תכונות astrocytic (הנקרא האסטרוציטים SVZ), neuroblasts, ותאי ביניים. Neuroblasts נולד בSVZ משיק לנדוד מרחק רב כדי נורת חוש הריח, שבו הם להתמיין interneurons. איתות אינטר באמצעות מולקולות דבקות ואותות diffusible ממלאת תפקידים חשובים בneurogenesis שליטה. רבים מאותות אלו לגרום לפעילות הסידן אינטר שמעבירה מידע בתוך ובין תאים. סידן היא פעילות ובכך משקף את הפעילות של אותות תאיים והיא דרך אופטימלית להבין איתות אינטר פונקציונלית בין תאי SVZ. פעילות סידן נחקרה באזורים רבים אחרים וסוגי תאים, כוללים תאי גליה ונוירונים בוגרים. עם זאת, השיטה המסורתית לואהתאי D עם סיד מחוון צבע (טעינת אמבטיה כלומר) לא היו יעילים בטעינה כל סוגי תאי SVZ. ואכן, בצפיפות הסלולרית SVZ מונעת התפשטות צבע בתוך הרקמה. בנוסף, הכנת פרוסות sagittal יהיה טוב יותר לשמור על ההסדר תלת הממדי של תאים, במיוחד SVZ זרם הגירת neuroblast על הציר מקורי-הזנב. כאן, אנו מתארים שיטות להכנת סעיפי sagittal המכילים SVZ, הטעינה של תאי SVZ עם צבע מחוון סידן, ורכישת פעילות סידן עם סרטי זמן לשגות. אנחנו השתמשנו Fluo-04:00 לצבוע לטעינת האסטרוציטים SVZ באמצעות יישום לחץ בתוך הרקמה. פעילות סידן נרשמה באמצעות מיקרוסקופ confocal סריקה המאפשר רזולוציה מדויקת לתאים בודדים מזהים. הגישה שלנו היא ישימה לאזורים אחרים, כולל neurogenic האזור המבוגר היפוקמפוס subgranular ואזורי neurogenic עובריים. בנוסף, סוגים אחרים של צבעים יכוליםלהיות מיושם בשיטה שתוארה.

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Acute Subventricular Zone Slices for Calcium Imaging at JoVE.com

Preparation of Acute Subventricular Zone Slices for Calcium Imaging

שיטה לטעון אזור תאי subventricular (SVZ) עם צבעי סיד חיווי לפעילות הסידן הקלטה מתוארת. SVZ לאחר הלידה מכיל תאים צפופים, כולל תאי אב עצביים וneuroblasts. במקום להשתמש בטעינת אמבטיה אנו מזריקים צבע בלחץ בתוך הרקמה המאפשרת דיפוזיה צבע טובה יותר.

הכנת Slices האזור Subventricular החריף להדמית סיד

The subventricular zone (SVZ) is one of the two neurogenic zones in the postnatal brain. The SVZ contains densely packed cells, including neural ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

The Subventricular Zone En-face: Wholemount Staining and Ependymal Flow

אזור Subventricular En פנים: מכתים Wholemount ושפל Ependymal

The walls of the lateral ventricles contain the largest germinal region in the adult mammalian brain. The subventricular zone (SVZ) in these walls is an ...

Preparation of Acute Hippocampal Slices from Rats and Transgenic Mice for the Study of Synaptic Alterations during Aging and Amyloid Pathology

הכנת פרוסות בהיפוקמפוס של חולדות חריפה העכברים הטרנסגניים לחקר שינויים Synaptic במהלך ההזדקנות עמילואיד פתולוגיה

The rodent hippocampal slice preparation is perhaps the most broadly used tool for investigating mammalian synaptic function and plasticity. The ...

Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Acute Slices of the Adult Mouse Forebrain

הדמית זמן לשגות הגירת Neuroblast בפרוסות חריפות של המוח הקדמי המאוס למבוגרים

There is a substantial body of evidence indicating that new functional neurons are constitutively generated from an endogenous pool of neural stem cells ...

Imaging Calcium Responses in GFP-tagged Neurons of Hypothalamic Mouse Brain Slices

תגובות סידן הדמיה בנוירונים GFP-tagged של פרוסות מוח עכבר ההיפותלמוס

Despite an enormous increase in our knowledge about the mechanisms underlying the encoding of information in the brain, a central question concerning the ...

Neonatal Subventricular Zone Electroporation

Electroporation האזור Subventricular ילודים

Neural stem cells (NSCs) line the postnatal lateral ventricles and give rise to multiple cell types which include neurons, astrocytes, and ependymal ...

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

In vivo electroporation ואחרי הלידה וזמן לשגות הדמיה של neuroblast הגירה בעכבר חריפה פרוסות המוח

The subventricular zone (SVZ) is one of the main neurogenic niches in the postnatal brain. Here, neural progenitors proliferate and give rise to ...

Cell Sorting of Neural Stem and Progenitor Cells from the Adult Mouse Subventricular Zone and Live-imaging of their Cell Cycle Dynamics

מיון תא של תאי גזע ועצביים ממבוגרי עכבר Subventricular האזור וחי-הדמיה של Dynamics תא המחזור שלהם

Neural stem cells (NSCs) in the subventricular zone of the lateral ventricles (SVZ) sustain olfactory neurogenesis throughout life in the mammalian brain. ...

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

הכנת פרוסות המוח חריפה באמצעות אופטימיזציה N-מתיל-D-שיטת שחזור מגן glucamine

This protocol is a practical guide to the N-methyl-D-glucamine (NMDG) protective recovery method of brain slice preparation. Numerous recent studies have ...

Prolonged Incubation of Acute Neuronal Tissue for Electrophysiology and Calcium-imaging

דגירה ממושכת של רקמות חריפות עצביות עבור Electrophysiology ו-הדמית סידן

Acute neuronal tissue preparations, brain slices and retinal wholemount, can usually only be maintained for 6 - 8 h following dissection. This limits the ...

Two-photon Calcium Imaging in Neuronal Dendrites in Brain Slices

שני הפוטונים סידן הדמיה של דנדריטים עצביים במוח פרוסות

Calcium (Ca2+) imaging is a powerful tool to investigate the spatiotemporal dynamics of intracellular Ca2+ signals in neuronal dendrites. Ca2+ ...