Name: preparation of acute subventricular zone slices for calcium imaging
Uploaded: 2012-09-19T11:00:00
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この作品は、NIH（DC007681、AB）、CTの幹細胞助成（AB）、パーディー財団（AB）、博士号を取得する前のルース·L·キルシュシュタイン国立研究サービス賞（NRSA）（SZY）、およびNSFの大学院研究からの補助金によって支えられてフェローシップ（BL）。我々は、原稿上の有益なコ​​メントをBordey室のメンバーに感謝します。本材料は、部分的にコネチカット幹細胞研究助成金プログラムの下コネチカット州によってサポートされた仕事に基づいています。その内容はもっぱら著者の責任であり、必ずしもコネチカット州の公式見解を示すものではない、コネチカットやCTイノベーションの州の公衆衛生省は、株式会社。

1。溶液の調製、解剖、およびビブラトーム<ol><li>ソリューションは、正しい容量オスモル濃度とpH（ 表1）で準備しなければなりません。人工脳脊髄液（ACSF）に比べて、解剖溶液はナトリウムとカルシウムの濃度が低いと、マグネシウムの高い濃度で調製される。これは、スライス時の興奮毒性の影響を最小限にすることです。 </li><li>両方の解剖とACSFソリューションは、7.3の?...

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	<li>Peretto, P., Giachino, C., Aimar, P., Fasolo, A., Bonfanti, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chain+formation+and+glial+tube+assembly+in+the+shift+from+neonatal+to+adult+subventricular+zone+of+the+rodent+forebrain.">Chain formation and glial tube assembly in the shift from neonatal to adult subventricular zone of the rodent forebrain.</a> J. Comp Neurol. 487, 407-427 (2005).</li><li>Lacar, B., Young, S. Z., Platel, J. C., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+and+recording+subventricular+zone+progenitor+cells+in+live+tissue+of+postnatal+mice.">Imaging and recording subventricular zone progenitor cells in live tissue of postnatal mice.</a> Front. Neurosci. 4, 10-3389 (2010).</li><li>Lacar, B., Young, S. Z., Platel, J. C., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gap+junction-mediated+calcium+waves+define+communication+networks+among+murine+postnatal+neural+progenitor+cells.">Gap junction-mediated calcium waves define communication networks among murine postnatal neural progenitor cells.</a> Eur. J. Neurosci. , (2011).</li><li>Platel, J. C., Dave, K. A., Gordon, V., Lacar, B., Rubio, M. E., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NMDA+receptors+activated+by+subventricular+zone+astrocytic+glutamate+are+critical+for+neuroblast+survival+prior+to+entering+a+synaptic+network.">NMDA receptors activated by subventricular zone astrocytic glutamate are critical for neuroblast survival prior to entering a synaptic network.</a> Neuron. 65, 859-872 (2010).</li><li>Platel, J. C., Dupuis, A., Boisseau, S., Villaz, M., Albrieux, M., Brocard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synchrony+of+spontaneous+calcium+activity+in+mouse+neocortex+before+synaptogenesis.">Synchrony of spontaneous calcium activity in mouse neocortex before synaptogenesis.</a> Eur. J. Neurosci. 25, 920-928 (2007).</li><li>Young, S. Z., Platel, J. C., Nielsen, J. V., Jensen, N. A., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GABAA+increases+calcium+in+subventricular+zone+astrocyte-like+cells+through+L-+and+T-type+voltage-gated+calcium+channels.">GABAA increases calcium in subventricular zone astrocyte-like cells through L- and T-type voltage-gated calcium channels.</a> Front. Cell. Neurosci. 4, 8 (2010).</li><li>Bolteus, A. J., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GABA+Release+and+Uptake+Regulate+Neuronal+Precursor+Migration+in+the+Postnatal+Subventricular+Zone.">GABA Release and Uptake Regulate Neuronal Precursor Migration in the Postnatal Subventricular Zone.</a> J. Neurosci. 24, 7623-7631 (2004).</li><li>Platel, J., Heintz, T., Young, S., Gordon, V., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tonic+activation+of+GLUK5+kainate+receptors+decreases+neuroblast+migration+in+a+whole+mount+preparation+of+the+subventricular+zone.">Tonic activation of GLUK5 kainate receptors decreases neuroblast migration in a whole mount preparation of the subventricular zone.</a> J. Physiol. (Lond). 586, 3783-3793 (2008).</li><li>Nam, S. C., Kim, Y., Dryanovski, D., Walker, A., Goings, G., Woolfrey, K., Kang, S. S., Chu, C., Chenn, A., Erdelyi, F., Szabo, G., Hockberger, P., Szele, F. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+features+of+postnatal+subventricular+zone+cell+motility:+a+two-photon+time-lapse+study.">Dynamic features of postnatal subventricular zone cell motility: a two-photon time-lapse study.</a> J. Comp. Neurol. 505, 190-208 (2007).</li><li>Lacar, B. L., Platel, J. C., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GABA+controls+Ca2++activity-dependent+network+synchrony+in+the+adult+neurogenic+forebrain.">GABA controls Ca2+ activity-dependent network synchrony in the adult neurogenic forebrain.</a> , (2007).</li><li>Liu, X., Bolteus, A. J., Balkin, D. M., Henschel, O., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GFAP-expressing+cells+in+the+postnatal+subventricular+zone+display+a+unique+glial+phenotype+intermediate+between+radial+glia+and+astrocytes.">GFAP-expressing cells in the postnatal subventricular zone display a unique glial phenotype intermediate between radial glia and astrocytes.</a> Glia. 54, 394-410 (2006).</li><li>Wang, D. D., Krueger, D. D., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biophysical+properties+and+ionic+signature+of+neuronal+progenitors+of+the+postnatal+subventricular+zone+in+situ.">Biophysical properties and ionic signature of neuronal progenitors of the postnatal subventricular zone in situ.</a> J. Neurophysiol. 90, 2291-2302 (2003).</li><li>Tian, L., Hires, S. A., Mao, T., Huber, D., Chiappe, M. E., Chalasani, S. H., Petreanu, L., Akerboom, J., McKinney, S. A., Schreiter, E. R., Bargmann, C. I., Jayaraman, V., Svoboda, K., Looger, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+neural+activity+in+worms,+flies+and+mice+with+improved+GCaMP+calcium+indicators.">Imaging neural activity in worms, flies and mice with improved GCaMP calcium indicators.</a> Nat. Methods. 6, 875-881 (2009).</li><li>Zhao, Y., Araki, S., Wu, J., Teramoto, T., Chang, Y. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+expanded+palette+of+genetically+encoded+Ca(2)+indicators.">An expanded palette of genetically encoded Ca(2) indicators.</a> Science. 333, 1888-1891 (2011).</li><li>Shigetomi, E., Kracun, S., Sofroniew, M. V., Khakh, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+genetically+targeted+optical+sensor+to+monitor+calcium+signals+in+astrocyte+processes.">A genetically targeted optical sensor to monitor calcium signals in astrocyte processes.</a> Nat. Neurosci. 13, 759-766 (2010).</li></ol>

SVZ細胞のカルシウムイメージングは、神経芽細胞10、両方の神経芽細胞およびアストロサイト4,6,8とアストロサイトのカルシウム波3受容体チャネル発現における自発活動のパターンを研究するために使用されています。 SVZにおける細胞はどちら未熟であるか、またはグリア特性を持っているので、彼らは成熟したネットワークでの活動を示す電位におけるミリ秒の変...

<table border="1"><tbody><tr><td> 溶質 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> 郭（MM） </td></tr><tr><td>スクロース</td><td>シグマ</td><td> S0389 </td><td>解剖：147 mMの ACSF：0 mMの</td></tr><tr><td> NaClを</td><td>シグマ</td><td> S9888 </td><td>解剖：42ミリメートル ACSF：126 mMの</td></tr><tr><td> KClを</td><td>シグマ</td><td> P3911 </td><td>解剖：2.5mMの ACSF：2.5mMの</td></tr><tr><td>のMgCl 2·6H 2 O </td><td>シグマ</td><td> M9272 </td><td>解剖：4.33 mMの ACSF：1mMの</td></tr><tr><td>のNaH 2 PO 4·H 2 O </td><td>シグマ</td><td> S8282 </td><td>解剖：1.25 mMの ACSF：1.25 mMの</td></tr><tr><td>グルコース</td><td>シグマ</td><td> G8270 </td><td> Dissection：10mMの ACSF：10mMの</td></tr><tr><td> NaHCO 3を </td><td>シグマ</td><td> S6014 </td><td>解剖：26 mMの ACSF：26 mMの</td></tr><tr><td>のCaCl 2·2H 2 O </td><td>シグマ</td><td> C3306 </td><td>解剖：1.33 mMの ACSF：2 mMの</td></tr></tbody></table> 表1化学物質リストおよび解剖ソリューションとACSFのレシピ。 <table border="1"><tbody><tr><td></td><td></td><td></td><td> [ヘッダ] </td></tr><tr><td> 名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> 注釈 </td></tr><tr><td>ビブラトーム</td><td>ライカ</td><td>バーモント1000S </td><td></td></tr><tr><td>スーパー接着剤</td><td> Sureholdまたは3M </td><td> Surehold 3Gスーパー接着剤または3M獣医ボンド</td><td></td></tr><tr><td>解剖ツール</td><td> Robozまたはテッドペラ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>のFluo-4 AMのカルシウム感受性色素</td><td>インビトロジェン</td><td> F14201 </td><td></td></tr><tr><td>オレゴングリーンBAPTA-1、AMカルシウム感受性色素</td><td>インビトロジェン</td><td> O6807 </td><td></td></tr><tr><td> DMSO中プルロニックF-127の20％溶液</td><td>インビトロジェン</td><td> P3000MP </td><td></td></tr><tr><td>直立共焦点顕微鏡</td><td>オリンポス</td><td> FV300またはFV1000 </td><td></td></tr><tr><td>水浸目標</td><td>オリンポス</td><td> LUMPlanFl 40×幅/ IR（NA 0.80）; LUMPlanFl 60×W / I（NA 0.90） </td><td></td></tr><tr><td>マイクロマニピュレーター</td><td>サッター</td><td> MPC-200/MPC-325/MPC-385 </td><td></td></tr><tr><td>圧力コントローラ&lt;/ TD&gt; <td>パーカー·ハネフィン</td><td> Picospritzer </td><td>塗布時&lt;3 PSI </td></tr><tr><td>ピペットプラー</td><td>サッターまたはNarshige </td><td>サッターのP-97またはNarshige PP-830 </td><td></td></tr><tr><td>ガラスピペット</td><td>サッター</td><td> BF150-110から10 </td><td> ID：1.10、外径：1.50 </td></tr><tr><td>蠕動ポンプ</td><td>ハーバード装置</td><td>モデル720 </td><td>流速：1ml /分</td></tr><tr><td>商工会議所のお風呂</td><td>ワーナー·インスツルメンツ</td><td> RC-26のGLP </td><td>ロープロファイルには、客観的なクリアランスが可能</td></tr><tr><td>管類</td><td>タイゴン</td><td></td><td></td></tr><tr><td>温度調節器</td><td>ワーナー·インスツルメンツ</td><td> TC-324B/344B </td><td></td></tr></tbody></table> 表2。材料/機器リスト。

preparation of acute subventricular zone slices for calcium imaging

脳室下帯（SVZ）は、出生後の脳内の2つの神経原性のゾーンの一つである。 SVZは、アストロサイトの機能（SVZアストロサイトと呼ばれます）、神経芽細胞、中間前駆細胞と神経前駆細胞を含む密集した細胞などを持っている。 SVZで生まれた神経芽細胞は接線方向に、彼らは介在ニューロンに分化する嗅球への偉大な距離を移行します。接着分子と拡散信号を介して細胞間のシグナル伝達はニューロン新生の制御において重要な役割を果たしている。これらの信号の多くは、細胞の内側との間で情報を伝達する細胞内カルシウム活性を誘発する。カルシウム活性は、細胞外シグナルの活性こうして反射性であり、SVZ細胞間の機能的な細胞間シグナル伝達を理解するための最適な方法です。 カルシウム活性は成熟したアストロサイトとニューロンを含む他の多くの地域との細胞型で研究されている。しかし、LOAに伝統的な方法カルシウムインジケーター色素（ すなわち浴ローディング）とdの細胞はすべてSVZ細胞型をロードするには効率的ではありませんでした。実際、SVZにおける細胞密度は、組織内部で染料拡散を妨げる。また、矢状スライスを準備した方が特にSVZ細胞、吻側 - 尾軸の神経芽細胞の移行の流れの3次元配列を保持します。 ここでは、SVZ、カルシウムインジケーター色素とSVZ細胞の読み込みや、タイムラプスムービーカルシウム活性の買収を含む矢状切片を作製するための方法を説明します。私達はのFluo-4を使用した組織内部の圧力アプリケーションを使用して、SVZアストロサイトをロードするための染料AM。カルシウム活性には、識別のための個々の細胞のための正確な分解能を可能走査型共焦点顕微鏡を用いて記録した。我々のアプローチは、成人の海馬下帯や胚神経性ゾーンを含む他の神経性のゾーンに適用されます。また、染料の他の種類のことができます記載された方法を使用して適用する。

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Preparation of Acute Subventricular Zone Slices for Calcium Imaging

記録カルシウム活性のためのカルシウムインジケーター色素と脳室下帯（SVZ）細胞をロードする方法について説明する。生後SVZは、神経前駆細胞および神経芽細胞を含む、密に詰まった細胞が含まれています。むしろ風呂ローディングを使用するよりも、我々はより良​​い染料拡散を可能にする組織内部の圧力によって色素を注入した。

カルシウムイメージングの急性脳室下帯スライスの調製

The subventricular zone (SVZ) is one of the two neurogenic zones in the postnatal brain. The SVZ contains densely packed cells, including neural ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

The Subventricular Zone En-face: Wholemount Staining and Ependymal Flow

脳室下帯恩顔：Wholemount染色と上衣の流れ

The walls of the lateral ventricles contain the largest germinal region in the adult mammalian brain. The subventricular zone (SVZ) in these walls is an ...

Preparation of Acute Hippocampal Slices from Rats and Transgenic Mice for the Study of Synaptic Alterations during Aging and Amyloid Pathology

老化とアミロイド病理の間にシナプス変化の研究のためのラットおよびトランスジェニックマウスからの急性海馬スライスの準備

The rodent hippocampal slice preparation is perhaps the most broadly used tool for investigating mammalian synaptic function and plasticity. The ...

Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Acute Slices of the Adult Mouse Forebrain

成体マウスの前脳の急性スライスにおける神経芽細胞の移行のタイムラプスイメージング

There is a substantial body of evidence indicating that new functional neurons are constitutively generated from an endogenous pool of neural stem cells ...

Imaging Calcium Responses in GFP-tagged Neurons of Hypothalamic Mouse Brain Slices

視床下部マウス脳スライスのGFPタグニューロンにおけるイメージングカルシウム応答

Despite an enormous increase in our knowledge about the mechanisms underlying the encoding of information in the brain, a central question concerning the ...

Neonatal Subventricular Zone Electroporation

新生児の脳室下帯のエレクトロ

Neural stem cells (NSCs) line the postnatal lateral ventricles and give rise to multiple cell types which include neurons, astrocytes, and ependymal ...

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

生体産後エレクトロポレーションおよびマウスの急性脳スライスにおける神経芽細胞移動のタイムラプスイメージング中

The subventricular zone (SVZ) is one of the main neurogenic niches in the postnatal brain. Here, neural progenitors proliferate and give rise to ...

Cell Sorting of Neural Stem and Progenitor Cells from the Adult Mouse Subventricular Zone and Live-imaging of their Cell Cycle Dynamics

セル成体マウス脳室下帯から神経幹細胞および前駆細胞の選別とその細胞周期ダイナミクスのライブイメージング

Neural stem cells (NSCs) in the subventricular zone of the lateral ventricles (SVZ) sustain olfactory neurogenesis throughout life in the mammalian brain. ...

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

最適化されたNを使用して急性脳スライスの準備-メチル-D-glucamine 保護回復法

This protocol is a practical guide to the N-methyl-D-glucamine (NMDG) protective recovery method of brain slice preparation. Numerous recent studies have ...

Prolonged Incubation of Acute Neuronal Tissue for Electrophysiology and Calcium-imaging

電気生理学およびカルシウムイメージングのための急性神経組織の長期のインキュベーション

Acute neuronal tissue preparations, brain slices and retinal wholemount, can usually only be maintained for 6 - 8 h following dissection. This limits the ...

Two-photon Calcium Imaging in Neuronal Dendrites in Brain Slices

脳スライスにおける神経樹状突起における 2 光子カルシウム イメージング

Calcium (Ca2+) imaging is a powerful tool to investigate the spatiotemporal dynamics of intracellular Ca2+ signals in neuronal dendrites. Ca2+ ...