Name: preparation of acute subventricular zone slices for calcium imaging
Uploaded: 2012-09-19T11:00:00
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이 작품은 NIH (DC007681, AB), CT 줄기 세포 기금 (AB), Pardee 재단 (AB), Predoctoral 루스 L. Kirschstein 국가 연구 서비스 상 (NRSA) (SZY) 및 NSF 대학원 연구에서 보조금에 의해 지원되었다 휄로 십 (BL). 우리는 원고에 대한 유용한 의견을 Bordey 실험실 구성원을 감사드립니다. 현재 자료는 부분적으로 코네티컷의 줄기 세포 연구 보조금 프로그램의 코네티컷 주에서 지원 작업에 기반을두고 있습니다. 의 내용이 전적으로 저자의 책임이며 반드시 코네티컷 주의 공식 전망을 대변하지 않습니다, 코네티컷 또는 중부 표준시 혁신의 주 공중 보건학과가 통합되었습니다.

1. 솔루션, 해부, 그리고 Vibratome의 작성 <ol><li> 솔루션은 올바른 osmolarity와 산도 (표 1)에서 준비해야합니다. 인공 뇌척수 (ACSF)에 비해 분해 솔루션은 나트륨과 칼슘의 낮은 농도와 마그네슘의 높은 농도로 준비가되어 있습니다. 이 썰기 동안 excitotoxicity 효과를 최소화하는 것입니다. </li><li> 모두 해부 및 ACSF 솔루션은 95% O 5분의 2 % 7.3 원하는 pH를까지 적어도 10 분 동안 버블 ?...

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	<li>Peretto, P., Giachino, C., Aimar, P., Fasolo, A., Bonfanti, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chain+formation+and+glial+tube+assembly+in+the+shift+from+neonatal+to+adult+subventricular+zone+of+the+rodent+forebrain.">Chain formation and glial tube assembly in the shift from neonatal to adult subventricular zone of the rodent forebrain.</a> J. Comp Neurol. 487, 407-427 (2005).</li><li>Lacar, B., Young, S. Z., Platel, J. C., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+and+recording+subventricular+zone+progenitor+cells+in+live+tissue+of+postnatal+mice.">Imaging and recording subventricular zone progenitor cells in live tissue of postnatal mice.</a> Front. Neurosci. 4, 10-3389 (2010).</li><li>Lacar, B., Young, S. Z., Platel, J. C., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gap+junction-mediated+calcium+waves+define+communication+networks+among+murine+postnatal+neural+progenitor+cells.">Gap junction-mediated calcium waves define communication networks among murine postnatal neural progenitor cells.</a> Eur. J. Neurosci. , (2011).</li><li>Platel, J. C., Dave, K. A., Gordon, V., Lacar, B., Rubio, M. E., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NMDA+receptors+activated+by+subventricular+zone+astrocytic+glutamate+are+critical+for+neuroblast+survival+prior+to+entering+a+synaptic+network.">NMDA receptors activated by subventricular zone astrocytic glutamate are critical for neuroblast survival prior to entering a synaptic network.</a> Neuron. 65, 859-872 (2010).</li><li>Platel, J. C., Dupuis, A., Boisseau, S., Villaz, M., Albrieux, M., Brocard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synchrony+of+spontaneous+calcium+activity+in+mouse+neocortex+before+synaptogenesis.">Synchrony of spontaneous calcium activity in mouse neocortex before synaptogenesis.</a> Eur. J. Neurosci. 25, 920-928 (2007).</li><li>Young, S. Z., Platel, J. C., Nielsen, J. V., Jensen, N. A., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GABAA+increases+calcium+in+subventricular+zone+astrocyte-like+cells+through+L-+and+T-type+voltage-gated+calcium+channels.">GABAA increases calcium in subventricular zone astrocyte-like cells through L- and T-type voltage-gated calcium channels.</a> Front. Cell. Neurosci. 4, 8 (2010).</li><li>Bolteus, A. J., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GABA+Release+and+Uptake+Regulate+Neuronal+Precursor+Migration+in+the+Postnatal+Subventricular+Zone.">GABA Release and Uptake Regulate Neuronal Precursor Migration in the Postnatal Subventricular Zone.</a> J. Neurosci. 24, 7623-7631 (2004).</li><li>Platel, J., Heintz, T., Young, S., Gordon, V., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tonic+activation+of+GLUK5+kainate+receptors+decreases+neuroblast+migration+in+a+whole+mount+preparation+of+the+subventricular+zone.">Tonic activation of GLUK5 kainate receptors decreases neuroblast migration in a whole mount preparation of the subventricular zone.</a> J. Physiol. (Lond). 586, 3783-3793 (2008).</li><li>Nam, S. C., Kim, Y., Dryanovski, D., Walker, A., Goings, G., Woolfrey, K., Kang, S. S., Chu, C., Chenn, A., Erdelyi, F., Szabo, G., Hockberger, P., Szele, F. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+features+of+postnatal+subventricular+zone+cell+motility:+a+two-photon+time-lapse+study.">Dynamic features of postnatal subventricular zone cell motility: a two-photon time-lapse study.</a> J. Comp. Neurol. 505, 190-208 (2007).</li><li>Lacar, B. L., Platel, J. C., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GABA+controls+Ca2++activity-dependent+network+synchrony+in+the+adult+neurogenic+forebrain.">GABA controls Ca2+ activity-dependent network synchrony in the adult neurogenic forebrain.</a> , (2007).</li><li>Liu, X., Bolteus, A. J., Balkin, D. M., Henschel, O., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GFAP-expressing+cells+in+the+postnatal+subventricular+zone+display+a+unique+glial+phenotype+intermediate+between+radial+glia+and+astrocytes.">GFAP-expressing cells in the postnatal subventricular zone display a unique glial phenotype intermediate between radial glia and astrocytes.</a> Glia. 54, 394-410 (2006).</li><li>Wang, D. D., Krueger, D. D., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biophysical+properties+and+ionic+signature+of+neuronal+progenitors+of+the+postnatal+subventricular+zone+in+situ.">Biophysical properties and ionic signature of neuronal progenitors of the postnatal subventricular zone in situ.</a> J. Neurophysiol. 90, 2291-2302 (2003).</li><li>Tian, L., Hires, S. A., Mao, T., Huber, D., Chiappe, M. E., Chalasani, S. H., Petreanu, L., Akerboom, J., McKinney, S. A., Schreiter, E. R., Bargmann, C. I., Jayaraman, V., Svoboda, K., Looger, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+neural+activity+in+worms,+flies+and+mice+with+improved+GCaMP+calcium+indicators.">Imaging neural activity in worms, flies and mice with improved GCaMP calcium indicators.</a> Nat. Methods. 6, 875-881 (2009).</li><li>Zhao, Y., Araki, S., Wu, J., Teramoto, T., Chang, Y. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+expanded+palette+of+genetically+encoded+Ca(2)+indicators.">An expanded palette of genetically encoded Ca(2) indicators.</a> Science. 333, 1888-1891 (2011).</li><li>Shigetomi, E., Kracun, S., Sofroniew, M. V., Khakh, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+genetically+targeted+optical+sensor+to+monitor+calcium+signals+in+astrocyte+processes.">A genetically targeted optical sensor to monitor calcium signals in astrocyte processes.</a> Nat. Neurosci. 13, 759-766 (2010).</li></ol>

SVZ 세포의 칼슘 이미징은 neuroblasts 10 모두 neuroblasts 및 astrocytes 4,6,8 및 astrocytic 칼슘 웨이브 3 수용체 채널 표현의 자발적인 활동에 패턴을 공부하는 데 사용되었습니다. SVZ의 세포 중 유치 또는 glial 속성을 가지고 있기 때문에, 그들은 성숙 네트워크 활동을 나타내는 전압 잠재적으로 밀리 변경이 지역에서 적용되지 않습니다 즉, 행동 할 가능성 11,12를 해고하지 ?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 용질 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 해부 (㎜) </td></tr><tr><td> 자당 </td><td> 시그마 </td><td> S0389 </td><td> 해부 : 147 MM ACSF : 0 MM </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> 시그마 </td><td> S9888 </td><td> 해부 : 42 MM ACSF : 126 MM </td></tr><tr><td> KCl </td><td> 시그마 </td><td> P3911 </td><td> 해부 : 2.5 MM ACSF : 2.5 MM </td></tr><tr><td> MgCl 2 0.6 H 2 O </td><td> 시그마 </td><td> M9272 </td><td> 해부 : 4.33 MM ACSF : 1 MM </td></tr><tr><td> 2 PO 4 아뇨. H 2 O </td><td> 시그마 </td><td> S8282 </td><td> 해부 : 1.25 MM ACSF : 1.25 MM </td></tr><tr><td> 포도당 </td><td> 시그마 </td><td> G8270 </td><td> 아까 그 바 말인데,ction : 10 MM ACSF : 10 MM </td></tr><tr><td> NaHCO 3 </td><td> 시그마 </td><td> S6014 </td><td> 해부 : 26 MM ACSF : 26 MM </td></tr><tr><td> CaCl 2 0.2 H 2 O </td><td> 시그마 </td><td> C3306 </td><td> 해부 : 1.33 MM ACSF : 2 MM </td></tr></tbody></table> 표 1. 화학 목록 및 해부 솔루션과 ACSF의 요리. <table border="1"><tbody><tr><td></td><td></td><td></td><td> [헤더] </td></tr><tr><td> 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 코멘트 </td></tr><tr><td> Vibratome </td><td> Leica </td><td> VT 1000S </td><td></td></tr><tr><td> 슈퍼 접착제 </td><td> Surehold 또는 3M </td><td> Surehold 3G 슈퍼 접착제 또는 3M 다한 본드 </td><td></td></tr><tr><td> 해부 도구 </td><td> Roboz 또는 테드 펠라 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Fluo-4는 칼슘에 민감한 염료 AM </td><td> Invitrogen </td><td> F14201 </td><td></td></tr><tr><td> 오레곤 그린 BAPTA-1은 칼슘에 민감한 염료 AM </td><td> Invitrogen </td><td> O6807 </td><td></td></tr><tr><td> DMSO의 Pluronic F-127 20 % 솔루션 </td><td> Invitrogen </td><td> P3000MP </td><td></td></tr><tr><td> 입식 공 촛점 현미경 </td><td> 하늘 </td><td> FV300 또는 FV1000 </td><td></td></tr><tr><td> 물 침지 목표 </td><td> 하늘 </td><td> LUMPlanFl 40 X W / IR (NA 0.80), LUMPlanFl 60 X W / I (NA 0.90) </td><td></td></tr><tr><td> 마이크로 </td><td> 셔터 </td><td> MPC-200/MPC-325/MPC-385 </td><td></td></tr><tr><td> 압력 컨트롤러 &lt;/ TD&gt; <td> 파커 Hannifin </td><td> Picospritzer </td><td> 신청시 &lt;3 PSI </td></tr><tr><td> 피펫 풀러 </td><td> 셔터 또는 Narshige </td><td> 셔터 P-97 또는 Narshige PP-830 </td><td></td></tr><tr><td> 유리 피펫 </td><td> 셔터 </td><td> BF150 - 110-10 </td><td> ID : 1.10, OD : 1.50 </td></tr><tr><td> 연동 운동의 펌프 </td><td> 하버드 장치 </td><td> 모델 720 </td><td> 유량 : 1 ML / 분 </td></tr><tr><td> 상공 회의소 목욕 </td><td> 워너 악기 </td><td> RC-26 GLP </td><td> 낮은 프로파일 목적 통관을 허용 </td></tr><tr><td> 관의 설치 </td><td> Tygon </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 온도 컨트롤러 </td><td> 워너 악기 </td><td> TC-324B/344B </td><td></td></tr></tbody></table> 표 2. 재료 / 장비 목록입니다.

preparation of acute subventricular zone slices for calcium imaging

subventricular 영역 (SVZ)는 출생 후의 뇌의 두 neurogenic 지역 중 하나입니다. SVZ는 astrocytic 기능 (SVZ의 astrocytes라고도 함), neuroblasts, 그리고 중간 전구 세포와 신경 전구 세포 등의 밀도가 높은 포장 세포가 포함되어 있습니다. SVZ에서 태어난 Neuroblasts는 tangentially가 interneurons로 차별화 후각 망울에 큰 거리를 마이그레이션. 접착 분자와 diffusible 신호를 통해 세포 신호는 제어 neurogenesis에 중요한 역할을 재생합니다. 이러한 신호의 대부분은 세포 내부와 사이에 정보를 전송 세포 칼슘 활동을 실행. 칼슘 활동은 세포 신호의 활동 따라서 반사하고 SVZ 세포 간의 기능적 세포 신호를 이해 할 수있는 최적의 방법입니다. 칼슘 활동이 성숙 astrocytes 뉴런 등 많은 다른 지역과 셀 유형,에서 공부하고 있습니다. 그러나, 로아에 전통적인 방법칼슘 표시기 염료 (예 : 욕조로드)와 D 세포는 모든 SVZ 세포 유형을로드에 효율적 아니 었습니다. 사실, SVZ의 세포 밀도는 조직 내부에 염료 확산을 precludes. 또한, 시상 조각을 준비하는 것은 더 나은 특히 SVZ 세포, 뱃 부리 장식이있는 - 꼬리 축에 neuroblast 이주의 흐름의 3 차원 배열을 유지합니다. 여기, 우리는 SVZ, 칼슘 표시기 염료와 SVZ 세포의 로딩, 시간 경과 영화와 칼슘 활동의 인수를 포함하는 시상 부분을 준비하는 방법을 설명합니다. 우리는 사용 Fluo-4는 조직 내부 압력 응용 프로그램을 사용하여 SVZ의 astrocytes를로드하는 염료입니다. 칼슘 활동이 구별 개별 셀에 대한 정확한 해결책을 허용 스캔 공 촛점 현미경을 사용하여 기록되었다. 우리 접근 방식은 성인 hippocampal subgranular 영역과 배아 neurogenic 구역 등 다른 neurogenic 영역에 적용됩니다. 또한, 염료 다른 유형의 수설명 방법을 사용하여 적용 할 수.

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Preparation of Acute Subventricular Zone Slices for Calcium Imaging

기록 칼슘 활동을위한 칼슘 표시기 염료와 subventricular 영역 (SVZ) 세포를로드 할 방법이 설명되어 있습니다. 출생 후의 SVZ는 신경 전구 세포와 neuroblasts 포함 단단히 포장 세포가 포함되어 있습니다. 오히려 목욕로드를 사용하는 것보다 우리가 더 나은 염료 확산을 허용 조직 내부의 압력에 의해 염료를 주입했다.

칼슘 이미징에 대한 급성 Subventricular 지대 슬라이스의 작성

The subventricular zone (SVZ) is one of the two neurogenic zones in the postnatal brain. The SVZ contains densely packed cells, including neural ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

The Subventricular Zone En-face: Wholemount Staining and Ependymal Flow

Subventricular 존 엉 - 얼굴 : Wholemount 스테 이닝 및 Ependymal 흐름

The walls of the lateral ventricles contain the largest germinal region in the adult mammalian brain. The subventricular zone (SVZ) in these walls is an ...

연구

신경과학

Preparation of Acute Hippocampal Slices from Rats and Transgenic Mice for the Study of Synaptic Alterations during Aging and Amyloid Pathology

노화와 아밀로이드 병리 동안 시냅틱 얼터 레이션의 연구에 대한 고양이와 트렌스 제닉 마우스의 급성 Hippocampal 조각의 준비

The rodent hippocampal slice preparation is perhaps the most broadly used tool for investigating mammalian synaptic function and plasticity. The ...

Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Acute Slices of the Adult Mouse Forebrain

성인 마우스 Forebrain의 급성 슬라이스에 Neuroblast 마이그레이션의 시간 경과 영상

There is a substantial body of evidence indicating that new functional neurons are constitutively generated from an endogenous pool of neural stem cells ...

Imaging Calcium Responses in GFP-tagged Neurons of Hypothalamic Mouse Brain Slices

Hypothalamic 마우스 뇌 슬라이스의 GFP 태그 뉴런의 영상 칼슘 응답

Despite an enormous increase in our knowledge about the mechanisms underlying the encoding of information in the brain, a central question concerning the ...

Neonatal Subventricular Zone Electroporation

신생아 Subventricular 지대 Electroporation

Neural stem cells (NSCs) line the postnatal lateral ventricles and give rise to multiple cell types which include neurons, astrocytes, and ependymal ...

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

마우스 급성 뇌 조각의 Neuroblast 마이그레이션의 생체 내 출생 일렉트로 및 시간 경과 영상

The subventricular zone (SVZ) is one of the main neurogenic niches in the postnatal brain. Here, neural progenitors proliferate and give rise to ...

Cell Sorting of Neural Stem and Progenitor Cells from the Adult Mouse Subventricular Zone and Live-imaging of their Cell Cycle Dynamics

셀 성인 마우스 뇌실 영역에서 신경 줄기 및 전구 세포의 정렬과 세포주기 역학의 라이브 이미징

Neural stem cells (NSCs) in the subventricular zone of the lateral ventricles (SVZ) sustain olfactory neurogenesis throughout life in the mammalian brain. ...

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

최적화 된 N를 사용 하 여 급성 뇌 조각의 준비-메 틸-D-glucamine 보호 복구 방법

This protocol is a practical guide to the N-methyl-D-glucamine (NMDG) protective recovery method of brain slice preparation. Numerous recent studies have ...

Prolonged Incubation of Acute Neuronal Tissue for Electrophysiology and Calcium-imaging

전기 생리학 및 칼슘 이미징에 대한 급성 신경 조직의 장기간 배양

Acute neuronal tissue preparations, brain slices and retinal wholemount, can usually only be maintained for 6 - 8 h following dissection. This limits the ...

Two-photon Calcium Imaging in Neuronal Dendrites in Brain Slices

두뇌 조각에서 신경 모 수석에서 2 광자 칼슘 이미지

Calcium (Ca2+) imaging is a powerful tool to investigate the spatiotemporal dynamics of intracellular Ca2+ signals in neuronal dendrites. Ca2+ ...