Name: preparation of acute subventricular zone slices for calcium imaging
Uploaded: 2012-09-19T11:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Acute Subventricular Zone Slices for Calcium Imaging at JoVE.com

Эта работа была поддержана грантами NIH (DC007681, AB), CT стволовых клеток гранта (AB), Парди основания (AB), Predoctoral Рут Л. Kirschstein Национальный исследовательский службы Awards (НРСА) (SZY) и NSF аспирантуре Стипендия (BL). Мы благодарим членов Bordey лаборатории за полезные замечания по рукописи. Настоящий материал основан на работе частично поддержана штата Коннектикут под сотовый Коннектикут стволовых Программа исследовательских грантов. Его содержание несут исключительно авторы и не обязательно отражают официальную точку зрения штата Коннектикут, Департамент здравоохранения штата Коннектикут или КТ инноваций, Incorporated.

1. Подготовка Solutions, Dissection, и Vibratome <ol><li> Решения должны быть готовы в нужный осмолярности и рН (табл. 1). По сравнению с искусственной цереброспинальной жидкости (ACSF), рассечение раствор готовят с более низкой концентрации натрия и кальция, а более высокие концентрации магния. Это...

<ol>
	<li>Peretto, P., Giachino, C., Aimar, P., Fasolo, A., Bonfanti, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chain+formation+and+glial+tube+assembly+in+the+shift+from+neonatal+to+adult+subventricular+zone+of+the+rodent+forebrain.">Chain formation and glial tube assembly in the shift from neonatal to adult subventricular zone of the rodent forebrain.</a> J. Comp Neurol. 487, 407-427 (2005).</li><li>Lacar, B., Young, S. Z., Platel, J. C., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+and+recording+subventricular+zone+progenitor+cells+in+live+tissue+of+postnatal+mice.">Imaging and recording subventricular zone progenitor cells in live tissue of postnatal mice.</a> Front. Neurosci. 4, 10-3389 (2010).</li><li>Lacar, B., Young, S. Z., Platel, J. C., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gap+junction-mediated+calcium+waves+define+communication+networks+among+murine+postnatal+neural+progenitor+cells.">Gap junction-mediated calcium waves define communication networks among murine postnatal neural progenitor cells.</a> Eur. J. Neurosci. , (2011).</li><li>Platel, J. C., Dave, K. A., Gordon, V., Lacar, B., Rubio, M. E., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NMDA+receptors+activated+by+subventricular+zone+astrocytic+glutamate+are+critical+for+neuroblast+survival+prior+to+entering+a+synaptic+network.">NMDA receptors activated by subventricular zone astrocytic glutamate are critical for neuroblast survival prior to entering a synaptic network.</a> Neuron. 65, 859-872 (2010).</li><li>Platel, J. C., Dupuis, A., Boisseau, S., Villaz, M., Albrieux, M., Brocard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synchrony+of+spontaneous+calcium+activity+in+mouse+neocortex+before+synaptogenesis.">Synchrony of spontaneous calcium activity in mouse neocortex before synaptogenesis.</a> Eur. J. Neurosci. 25, 920-928 (2007).</li><li>Young, S. Z., Platel, J. C., Nielsen, J. V., Jensen, N. A., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GABAA+increases+calcium+in+subventricular+zone+astrocyte-like+cells+through+L-+and+T-type+voltage-gated+calcium+channels.">GABAA increases calcium in subventricular zone astrocyte-like cells through L- and T-type voltage-gated calcium channels.</a> Front. Cell. Neurosci. 4, 8 (2010).</li><li>Bolteus, A. J., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GABA+Release+and+Uptake+Regulate+Neuronal+Precursor+Migration+in+the+Postnatal+Subventricular+Zone.">GABA Release and Uptake Regulate Neuronal Precursor Migration in the Postnatal Subventricular Zone.</a> J. Neurosci. 24, 7623-7631 (2004).</li><li>Platel, J., Heintz, T., Young, S., Gordon, V., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tonic+activation+of+GLUK5+kainate+receptors+decreases+neuroblast+migration+in+a+whole+mount+preparation+of+the+subventricular+zone.">Tonic activation of GLUK5 kainate receptors decreases neuroblast migration in a whole mount preparation of the subventricular zone.</a> J. Physiol. (Lond). 586, 3783-3793 (2008).</li><li>Nam, S. C., Kim, Y., Dryanovski, D., Walker, A., Goings, G., Woolfrey, K., Kang, S. S., Chu, C., Chenn, A., Erdelyi, F., Szabo, G., Hockberger, P., Szele, F. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+features+of+postnatal+subventricular+zone+cell+motility:+a+two-photon+time-lapse+study.">Dynamic features of postnatal subventricular zone cell motility: a two-photon time-lapse study.</a> J. Comp. Neurol. 505, 190-208 (2007).</li><li>Lacar, B. L., Platel, J. C., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GABA+controls+Ca2++activity-dependent+network+synchrony+in+the+adult+neurogenic+forebrain.">GABA controls Ca2+ activity-dependent network synchrony in the adult neurogenic forebrain.</a> , (2007).</li><li>Liu, X., Bolteus, A. J., Balkin, D. M., Henschel, O., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GFAP-expressing+cells+in+the+postnatal+subventricular+zone+display+a+unique+glial+phenotype+intermediate+between+radial+glia+and+astrocytes.">GFAP-expressing cells in the postnatal subventricular zone display a unique glial phenotype intermediate between radial glia and astrocytes.</a> Glia. 54, 394-410 (2006).</li><li>Wang, D. D., Krueger, D. D., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biophysical+properties+and+ionic+signature+of+neuronal+progenitors+of+the+postnatal+subventricular+zone+in+situ.">Biophysical properties and ionic signature of neuronal progenitors of the postnatal subventricular zone in situ.</a> J. Neurophysiol. 90, 2291-2302 (2003).</li><li>Tian, L., Hires, S. A., Mao, T., Huber, D., Chiappe, M. E., Chalasani, S. H., Petreanu, L., Akerboom, J., McKinney, S. A., Schreiter, E. R., Bargmann, C. I., Jayaraman, V., Svoboda, K., Looger, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+neural+activity+in+worms,+flies+and+mice+with+improved+GCaMP+calcium+indicators.">Imaging neural activity in worms, flies and mice with improved GCaMP calcium indicators.</a> Nat. Methods. 6, 875-881 (2009).</li><li>Zhao, Y., Araki, S., Wu, J., Teramoto, T., Chang, Y. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+expanded+palette+of+genetically+encoded+Ca(2)+indicators.">An expanded palette of genetically encoded Ca(2) indicators.</a> Science. 333, 1888-1891 (2011).</li><li>Shigetomi, E., Kracun, S., Sofroniew, M. V., Khakh, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+genetically+targeted+optical+sensor+to+monitor+calcium+signals+in+astrocyte+processes.">A genetically targeted optical sensor to monitor calcium signals in astrocyte processes.</a> Nat. Neurosci. 13, 759-766 (2010).</li></ol>

Кальций визуализации клеток SVZ была использована для изучения закономерностей в спонтанной активности в нейробластах 10, рецептор канала выражения в обоих нейробластов и астроциты 4,6,8 и астроцитов волны кальция 3. Так как клетки в SVZ либо незрелый или иметь глиальных с?...

<table border="1"><tbody><tr><td> Растворенное вещество </td><td> Компания </td><td> Номер в каталоге </td><td> Dissection (мМ) </td></tr><tr><td> Сахароза </td><td> Сигма </td><td> S0389 </td><td> Dissection: 147 мм ACSF: 0 мм </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> Сигма </td><td> S9888 </td><td> Dissection: 42 мм ACSF: 126 мм </td></tr><tr><td> KCl </td><td> Сигма </td><td> P3911 </td><td> Dissection: 2,5 мм ACSF: 2,5 мм </td></tr><tr><td> MgCl 2 .6 H 2 O </td><td> Сигма </td><td> M9272 </td><td> Dissection: 4,33 мМ ACSF: 1 мМ </td></tr><tr><td> NaH 2 PO 4. H 2 O </td><td> Сигма </td><td> S8282 </td><td> Dissection: 1,25 мм ACSF: 1,25 мм </td></tr><tr><td> Глюкоза </td><td> Сигма </td><td> G8270 </td><td> Диссеие: 10 мМ ACSF: 10 мМ </td></tr><tr><td> NaHCO 3 </td><td> Сигма </td><td> S6014 </td><td> Dissection: 26 мм ACSF: 26 мм </td></tr><tr><td> CaCl 2 · 2H 2 O </td><td> Сигма </td><td> C3306 </td><td> Dissection: 1,33 мм ACSF: 2 мм </td></tr></tbody></table> Таблица 1. Список химических и рецепты решения вскрытие и ACSF. <table border="1"><tbody><tr><td></td><td></td><td></td><td> [Заголовок] </td></tr><tr><td> Имя </td><td> Компания </td><td> Номер по каталогу </td><td> Комментарии </td></tr><tr><td> Vibratome </td><td> Leica </td><td> VT 1000S </td><td></td></tr><tr><td> Super Glue </td><td> Surehold или 3M </td><td> Surehold 3G супер клей или 3M Vet-Бонд </td><td></td></tr><tr><td> Dissection инструменты </td><td> Roboz или Ted Pella </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Fluo-4 утра кальций-чувствительных красителей </td><td> Invitrogen </td><td> F14201 </td><td></td></tr><tr><td> Орегон Зеленый ВАРТА-1 утра кальций-чувствительных красителей </td><td> Invitrogen </td><td> O6807 </td><td></td></tr><tr><td> Pluronic F-127 20% раствора в ДМСО </td><td> Invitrogen </td><td> P3000MP </td><td></td></tr><tr><td> Вертикальный конфокальной микроскопии </td><td> Олимп </td><td> FV300 или FV1000 </td><td></td></tr><tr><td> Вода погружения цели </td><td> Олимп </td><td> LUMPlanFl 40 х W / IR (NA 0,80); LUMPlanFl 60 х W / I (NA 0,90) </td><td></td></tr><tr><td> Микроманипуляторы </td><td> Sutter </td><td> MPC-200/MPC-325/MPC-385 </td><td></td></tr><tr><td> &lt;Регулятор давления/ TD&gt; <td> Parker Hannifin </td><td> Picospritzer </td><td> &lt;3 PSI во время нанесения </td></tr><tr><td> Внесите съемника </td><td> Саттер или Narshige </td><td> Саттер Р-97 или Narshige PP-830 </td><td></td></tr><tr><td> Стеклянные пипетки </td><td> Sutter </td><td> BF150-110-10 </td><td> ID: 1,10, диаметр: 1,50 </td></tr><tr><td> Перистальтический </td><td> Harvard Apparatus </td><td> Модель 720 </td><td> Скорость потока: 1 мл / мин </td></tr><tr><td> Палата ванной </td><td> Warner Instruments </td><td> RC-26 GLP </td><td> Низкий профиль позволяет объективно оформление </td></tr><tr><td> Трубы </td><td> Tygon </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Регулятор температуры </td><td> Warner Instruments </td><td> TC-324B/344B </td><td></td></tr></tbody></table> Таблица 2. Материалов / оборудования списка.

preparation of acute subventricular zone slices for calcium imaging

Субвентрикулярной зону (СВЗ) является одним из двух нейрогенных зон в постнатальном мозге. SVZ содержит плотно упакованных клеток, включая нервные клетки предшественники с астроцитов особенностей (так называемые SVZ астроциты), нейробластов и промежуточных клеток-предшественников. Нейробластов родился в SVZ касательной мигрировать на большие расстояния в обонятельную луковицу, где они дифференцируются в интернейронов. Межклеточной передачи сигналов через молекул адгезии и диффузии сигналы играют важную роль в борьбе с нейрогенеза. Многие из этих сигналов вызывают межклеточное деятельности кальция, который передает информацию внутри и между клетками. Кальций деятельности, таким образом, отражает активность внеклеточных сигналов и является оптимальным способом понять функциональное межклеточной сигнализации между клетками SVZ. Кальций деятельность изучалась во многих других регионах и типах клеток, в том числе зрелые астроциты и нейроны. Тем не менее, традиционный метод, чтобы лоаг клеток кальцием индикатор красителя (например, ванны нагрузки) не был эффективным при загрузке всех типов SVZ клетки. Действительно, сотовая плотность в SVZ препятствует диффузии красителя в ткань. Кроме того, готовится сагиттальных будет лучше сохранить трехмерное расположение клеток СВЗ, в частности, поток миграции нейробластов на ростральной-каудальной оси. Здесь мы опишем методы для подготовки сагиттальной разделов, содержащих SVZ, загрузка клетки SVZ с кальцием краситель индикатор, и приобретение кальция деятельность с покадровой фильмов. Мы использовали Fluo-4 утра краситель для загрузки SVZ астроциты с помощью давления приложения внутри ткани. Кальций деятельности был записан при помощи сканирующей конфокальной микроскопии позволяет точное разрешение для различения отдельных клеток. Наш подход применим и к другим нейрогенных зон, включая взрослого гиппокампа субгранулярной зоны и эмбриональных нейрогенных зон. Кроме того, другие виды красителей можетнаноситься с помощью описанного метода.

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Acute Subventricular Zone Slices for Calcium Imaging at JoVE.com

Preparation of Acute Subventricular Zone Slices for Calcium Imaging

Метод для загрузки субвентрикулярной зону (СВЗ) клеток кальцием индикатор красители для записи активности кальция описано. Послеродовой SVZ содержит плотно упакованных клеток, включая нервные клетки предшественники и нейробластов. Вместо того чтобы использовать ванну загрузки мы вводили красителя давление внутри тканей позволяет лучше красителя диффузии.

Подготовка Острый субвентрикулярной фрагменты зона для кальция изображений

The subventricular zone (SVZ) is one of the two neurogenic zones in the postnatal brain. The SVZ contains densely packed cells, including neural ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

The Subventricular Zone En-face: Wholemount Staining and Ependymal Flow

Субвентрикулярной зоне En-лицо: Wholemount Окрашивание и эпендимальных потока

The walls of the lateral ventricles contain the largest germinal region in the adult mammalian brain. The subventricular zone (SVZ) in these walls is an ...

Preparation of Acute Hippocampal Slices from Rats and Transgenic Mice for the Study of Synaptic Alterations during Aging and Amyloid Pathology

Подготовка острого срезах гиппокампа крыс и трансгенных мышей для изучения Synaptic Изменения в процессе старения и амилоида патологии

The rodent hippocampal slice preparation is perhaps the most broadly used tool for investigating mammalian synaptic function and plasticity. The ...

Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Acute Slices of the Adult Mouse Forebrain

Покадровый Визуализация нейробластов миграции в остром ломтики мозга взрослых мышей

There is a substantial body of evidence indicating that new functional neurons are constitutively generated from an endogenous pool of neural stem cells ...

Imaging Calcium Responses in GFP-tagged Neurons of Hypothalamic Mouse Brain Slices

Изображениями кальция Ответы на GFP с метками нейроны гипоталамуса фрагменты мозга мыши

Despite an enormous increase in our knowledge about the mechanisms underlying the encoding of information in the brain, a central question concerning the ...

Neonatal Subventricular Zone Electroporation

Новорожденных субвентрикулярной Electroporation зоны

Neural stem cells (NSCs) line the postnatal lateral ventricles and give rise to multiple cell types which include neurons, astrocytes, and ependymal ...

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

В естественных послеродовой электропорации и Покадровый Визуализация из нейробласта миграции в Mouse острой мозга Ломтики

The subventricular zone (SVZ) is one of the main neurogenic niches in the postnatal brain. Here, neural progenitors proliferate and give rise to ...

Cell Sorting of Neural Stem and Progenitor Cells from the Adult Mouse Subventricular Zone and Live-imaging of their Cell Cycle Dynamics

Сотовый Сортировка нейронных стволовых и прогениторных клеток из взрослых мышей субвентрикулярной зоны и Live-визуализация клеточного цикла динамика

Neural stem cells (NSCs) in the subventricular zone of the lateral ventricles (SVZ) sustain olfactory neurogenesis throughout life in the mammalian brain. ...

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

Подготовка фрагментов острого мозга, с помощью оптимизированного N-метил-D-glucamine защитные восстановления метод

This protocol is a practical guide to the N-methyl-D-glucamine (NMDG) protective recovery method of brain slice preparation. Numerous recent studies have ...

Prolonged Incubation of Acute Neuronal Tissue for Electrophysiology and Calcium-imaging

Длительная инкубация Острый нейронную ткань для электрофизиологии и кальций-изображений

Acute neuronal tissue preparations, brain slices and retinal wholemount, can usually only be maintained for 6 - 8 h following dissection. This limits the ...

Two-photon Calcium Imaging in Neuronal Dendrites in Brain Slices

Двух Фотон кальция изображений в нейрональных дендритов в срезах головного мозга

Calcium (Ca2+) imaging is a powerful tool to investigate the spatiotemporal dynamics of intracellular Ca2+ signals in neuronal dendrites. Ca2+ ...