Name: analysis of single-cell gene transcription by rna fluorescent in situ hybridization (fish)
Uploaded: 2012-10-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Single-cell Gene Transcription by RNA Fluorescent In Situ Hybridization FISH at JoVE.com

De auteurs willen graag Michael Alifrangis en Ulla Abildtrup bedanken voor genotypering van parasieten en Christina Holm voor een uitstekende technische bijstand. Dit werk werd gefinancierd door Howard Hughes Medical Institute (subsidie ​​55005511), De Lundbeck Foundation (subsidie ​​R9-A840) en door het Niels Bohr Foundation.

1. Generatie van Vers Geselecteerde geïnfecteerde erythrocyten Voor deze test worden de beste resultaten verkregen met vers geselecteerde cultures voor oppervlakte-expressie van PfEMP1 eiwit. In dit experiment de 3D7 P. falciparum lineage is geselecteerd met specifieke antilichamen zoals eerder beschreven 1. Dag 1 <ol><li> Oogst 200 ul gepakte bloedcellen van een P. falciparum cultuur met 2-5% late stadium IE door centrifugeren bij 80...

<ol>
	<li>Joergensen, L., Bengtsson, D. C., Bengtsson, A., Ronander, E., Berger, S. S., Turner, L., Dalgaard, M. B., Cham, G. K., Victor, M. E., Lavstsen, T., Theander, T. G., Arnot, D. E., Jensen, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surface+co-expression+of+two+different+PfEMP1+antigens+on+single+Plasmodium+falciparum-infected+erythrocytes+facilitates+binding+to+ICAM1+and+PECAM1.">Surface co-expression of two different PfEMP1 antigens on single Plasmodium falciparum-infected erythrocytes facilitates binding to ICAM1 and PECAM1.</a> PLoS Pathog. 2, 1001083 (2010).</li><li>Pinaud, R., Mello, C. V., Velho, T. A., Wynne, R. D., Tremere, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+two+mRNA+species+at+single-cell+resolution+by+double-fluorescence+in+situ+hybridization.">Detection of two mRNA species at single-cell resolution by double-fluorescence in situ hybridization.</a> Nat. Protoc. 3, 1370-1379 (2008).</li><li>Cheeseborough, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> District Laboratory Practice in Tropical Countries. , (2006).</li><li>Brolin, K. J., Ribacke, U., Nilsson, S., Ankarklev, J., Moll, K., Wahlgren, M., Chen, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+transcription+of+duplicated+var2csa+gene+copies+in+individual+Plasmodium+falciparum+parasites.">Simultaneous transcription of duplicated var2csa gene copies in individual Plasmodium falciparum parasites.</a> Genome Biol. 10, R117 (2009).</li><li>Epp, C., Li, F., Howitt, C. A., Chookajorn, T., Deitsch, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromatin+associated+sense+and+antisense+noncoding+RNAs+are+transcribed+from+the+var+gene+family+of+virulence+genes+of+the+malaria+parasite+Plasmodium+falciparum.">Chromatin associated sense and antisense noncoding RNAs are transcribed from the var gene family of virulence genes of the malaria parasite Plasmodium falciparum.</a> RNA. 15, 116-127 (2009).</li><li>Freitas-Junior, L. H., Hernandez-Rivas, R., Ralph, S. A., Montiel-Condado, D., Ruvalcaba-Salazar, O. K., Rojas-Meza, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Telomeric+heterochromatin+propagation+and+histone+acetylation+control+mutually+exclusive+expression+of+antigenic+variation+genes+in+malaria+parasites.">Telomeric heterochromatin propagation and histone acetylation control mutually exclusive expression of antigenic variation genes in malaria parasites.</a> Cell. 121, 25-36 (2005).</li><li>Obernosterer, G., Martinez, J., Alenius, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Locked+nucleic+acid-based+in+situ+detection+of+microRNAs+in+mouse+tissue+sections.">Locked nucleic acid-based in situ detection of microRNAs in mouse tissue sections.</a> Nature Protoc. 2, 1508-1514 (2007).</li><li>Li, F., Sonbuchner, L., Kyes, S. A., Epp, C., Deitsch, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nuclear+non-coding+RNA+are+transcribed+from+the+centromeres+of+Plasmodium+falciparum+and+are+associated+with+centromeric+chromatin.">Nuclear non-coding RNA are transcribed from the centromeres of Plasmodium falciparum and are associated with centromeric chromatin.</a> J. Biol. Chem. 283, 5692-5698 (2008).</li><li>Thompson, J., Sinden, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+detection+of+Pbs21+mRNA+during+sexual+development+of+Plasmodium+berghei.">In situ detection of Pbs21 mRNA during sexual development of Plasmodium berghei.</a> Mol. Biochem. Parasitol. 68, 189-196 (1994).</li><li>Thompson, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+detection+of+RNA+in+blood-+and+mosquito-stage+malaria+parasites.">In situ detection of RNA in blood- and mosquito-stage malaria parasites.</a> Methods Mole Med. 72, 225-235 (2002).</li><li>Arnot, D. E., Ronander, E., Bengtsson, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+progression+of+the+intra-erythrocytic+cell+cycle+of+Plasmodium+falciparum+and+the+role+of+the+centriolar+plaques+in+asynchronous+mitotic+division+during+schizogony.">The progression of the intra-erythrocytic cell cycle of Plasmodium falciparum and the role of the centriolar plaques in asynchronous mitotic division during schizogony.</a> Int. J. Parasitol. 41, 71-80 (2011).</li><li>Osborne, C. S., Chakalova, L., Brown, K. E., Carter, D., Horton, A., Debrand, E., Goyenechea, B., Mitchell, J. A., Lopes, S., Reik, W., Fraser, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Active+genes+dynamically+colocalize+to+shared+sites+of+ongoing+transcription.">Active genes dynamically colocalize to shared sites of ongoing transcription.</a> Nat. Genet. 36, 1065-1071 (2004).</li></ol>

RNA FISH analyse, in tegenstelling tot werkwijzen zoals Northern blotting en RT-PCR, maakt onderscheid specifieke mRNA transcripten in de enkele cel. Dit maakt het mogelijk onderscheid te maken tussen transcriptioneel actieve en inactieve cellen, in dit voorbeeld, P. falciparum parasitaire protozoa in menselijke rode bloedcellen. Dergelijke whole-cell waarnemingen zijn vaak nodig en kunnen ontrafelen belangrijke en nieuwe transcriptionele patronen 1. Hoewel andere RNA FIS...

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van het reagens </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td><td> Reacties </td></tr><tr><td> Azijnzuur </td><td> Sigma / Aldrich </td><td> 338826-100ml </td><td></td></tr><tr><td> Albumax media: RPMI 1640 Glutamine oplossing </td><td> Lonza </td><td> BE12-115F </td><td> 500 ml RPMI 1640 5 ml oplossing glutamine </td></tr><tr><td> Albumax media: gentamicinesulfaat Albumax-oplossing </td><td> Lonza </td><td> BE02-012E </td><td> 2,5 ml gentamicinesulfaat 50 ml Albumax-oplossing </td></tr><tr><td> Albumax-oplossing: Hypoxanthine </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> H9377 </td><td> 0,8 g Hypoxanthine </td></tr><tr><td> Albumax-oplossing: AlbuMAX II </td><td> Iknvitrogen </td><td> 11021-037 </td><td> 200 g Albumax </td></tr><tr><td> Albumax-oplossing: RPMI 1640 </td><td> Lonza </td><td> BE12-115F </td><td> 4 liter RPMI 1640 Los met magneet bij max. 50 ° C. Filter steriliseer en bewaar bij -20 ° C in porties. </td></tr><tr><td> Amberlite </td><td> Sigma </td><td> A5710-110G </td><td> Hars formamide deioniseren. </td></tr><tr><td> Anti-biotine geit pAb peroxidaseconjugaat </td><td> Calbiochem </td><td> 203206 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-DIG antistof </td><td> Novus Biologicals </td><td> NB100-41330 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-fade reagens met DAPI </td><td> Invitrogen </td><td> P36931 </td><td> De fixeermiddelen moet gedurende 24 uur uitharden voordat de dia volledig afdichten. </td></tr><tr><td> Biotine RNA Labeling Mix </td><td&gt; Roche </td><td> 11685597910 </td><td></td></tr><tr><td> Camera digitale </td><td> Nikon digitale zicht DC-F11 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Dekglaasjes </td><td> Menzel-Glaser </td><td> 631-1570 </td><td></td></tr><tr><td> cultuur fles 25 cm 2 Nunclon oppervlak </td><td> Nunc </td><td> 156340 </td><td></td></tr><tr><td> DEPC </td><td> Fluka / Sigma </td><td> 32490-100ml </td><td> 1 ml DEPC in 1000 ml deinonized water. Voeg een roerstaaf en roer gedurende 12 uur. Autoclaaf gedurende 30 minuten. </td></tr><tr><td> Digitale camera </td><td> Nikon digitale zicht DC-F11 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Proteïne A Dynabeads </td><td> Invitrogen </td><td> 10002D </td><td></td></tr><tr><td> DynaMaq-15 Magneet </td><td> Invitrogen </td><td> 123-01D </td><td></td></tr><tr><td> Formamide bioultra 99% </td><td> Fluka/ Sigma </td><td> 47671-1l-F </td><td> Gedeïoniseerd formamide: 5 g ionenwisselaar per 100 ml formamide. Roer 30 min. Filtreer over Whatman papier. </td></tr><tr><td> . Gelatine 0 75% oplossing: Gelatine </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> G2500 </td><td> 3,75 g gelatine in 500 ml RPMI 1640. Verwarm tot 56 ° C op te lossen. Filter steriliseren wanneer 56 ° C. Bewaren bij -20 ° C in porties. </td></tr><tr><td> . Gelatine 0 75% oplossing: RPMI 1640 </td><td> Lonza </td><td> BE12-115F </td><td> 3,75 g gelatine in 500 ml RPMI 1640. Verwarm tot 56 ° C op te lossen. Filter steriliseren wanneer 56 ° C. Bewaren bij -20 ° C in porties. </td></tr><tr><td> Glutamine oplossing: L-glutamine </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> G3126 </td><td> 14,6 g L glutamine in 500 ml 0,9% NaCl. Los, filter sterilize en bewaar bij -20 ° C in porties. </td></tr><tr><td> Glutamine oplossing: HCl </td><td> Sigma </td><td> H1758 </td><td> 14,6 g L glutamine in 500 ml 0,9% NaCl. Los, filteren steriliseer en bewaar bij -20 ° C in porties. </td></tr><tr><td> Hybridisatie-oplossing: Formamide Bio ultra 99% SSC 20x </td><td> Fluka / Sigma </td><td> 47671-1l-F </td><td> Totaal 20 ml, blijven bevroren bij -20 ° C in porties 10 ml gedeïoniseerd formamide </td></tr><tr><td> Hybridisatieoplossing: 50x Denhardt&#39;s concentraat </td><td> Sigma </td><td> D2532 </td><td> 5ml 20xSSC </td></tr><tr><td> Hybridisatieoplossing: Gist tRNARoche blokkerend reagens </td><td> Sigma </td><td> R-6750 </td><td> 2 ml 50x Denhardt&#39;s 250 pl 20 mg per ml gist tRNA </td></tr><tr><td><sTrong&gt; hybridisatie-oplossing: zalmsperma DNA </td><td> Fluka / Sigma </td><td> 31149-106GF </td><td> 0.4g Roche blokkerend reagens 1 ml van 10 mg per ml zalmsperma DNA (Critical: denatureren zalm spermDNA bij 96 ° C gedurende 5 min voor het toevoegen aan de hybridisatieoplossing) </td></tr><tr><td> Veredelaar ThermoStar 100 HC4 </td><td> Quantifoil Instruments GmbH </td><td> 1004-0011 </td><td> Kan vervangen worden door hybridisatie oven en RNase vrij hybridisatie kamers opgevuld met DEPC water. </td></tr><tr><td> Immersie-olie UV transparant fluorescentie gratis </td><td> Sigma </td><td> 10976-1EA </td><td></td></tr><tr><td> Immunofluorescentie of confocale microscoop </td><td> Nikon D-Eclipse TE2000C </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Nagellak </td><td> Verkrijgbaar in elke drogist </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x PBS: NaCl KCl Na 2 HPO 4 x 2H 2 O KH 2PO 4 DEPC gedeïoniseerd H 2 O </td><td></td><td></td><td> Ajust pH tot 7,4 160 g 4 g 23 g 4 g 1 l </td></tr><tr><td> Paraformaldehyde 4% </td><td> Fluka / Chemika </td><td> 76240 </td><td> 4 g PFA in 80 ml PBS / DEPC. Verwarm tot 65 ° C totdat de PFA oplost. Voeg 20 ml PBS, laat de oplossing afkoelen. Breng de pH op 7,4. Filter. Store in aliquots bij -20 ° C. </td></tr><tr><td> Paraformaldehyde 4% / Acid azijnzuur 5% </td><td></td><td></td><td> 950 ul paraformaldhyde + 50 pl Azijnzuur </td></tr><tr><td> Pepsine </td><td> Sigma / Aldrich </td><td> P7000 </td><td></td></tr><tr><td> Peroxidase-geconjugeerd anti-biotine </td><td> Calbiochem </td><td> 203206 </td><td></td></tr><tr><td> RBC-wash media: RPMI 1640 Glutamine oplossing </td><td> Lonza </td><td> BE12-115F </td><td> 500 ml RPMI 1640 5 ml oplossing glutamine </td></tr><tr><td> RBC-wash media: gentamycinesulfaat </td><td> Lonza </td><td> BE02-012E </td><td> 2,5 ml gentamicinesulfaat </td></tr><tr><td> RNase </td><td> Sigma / Aldrich </td><td></td><td> Een 10 mg / ml voorraadoplossing. </td></tr><tr><td> RNase vrij 1,5 ml tube </td><td> Ambion </td><td> AM12450 </td><td></td></tr><tr><td> RNase Zap </td><td> Ambion </td><td> AM9780 </td><td></td></tr><tr><td> Slides 4 putten 11mm </td><td> Thermo Scientific </td><td> MENZXER306W </td><td></td></tr><tr><td> SSC 20x: NaCl </td><td> Sigma / Aldrich </td><td> S9625 </td><td> 3 M NaCl (175 g / l) 0,3 Na3 citraat x H 2 O (88 g / l) pH 7,0 met 1 M HCl </td></tr><tr><td> SSC 20x: Natriumcitraat uitdrogen </td><td> Sigma / Aldrich </td><td> W302600 </td><td> 3 M NaCl (175 g / l) 0,3 Na3 citraat x H 2 O (88 g / l) pH 7,0 met 1 M HCl </td></tr><tr><td> SSPE 20x: NaCl </td><td> Sigma / Aldrich </td><td> S9625 </td><td> 175,3 g NaCl </td></tr><tr><td> SSPE 20x: NaH 2 PO 4 </td><td> Sigma / Aldrich </td><td> S0751 </td><td> 27,6 g NaH 2PO 4. </td></tr><tr><td> SSPE 20x: 4 EDTA poeder </td><td></td><td></td><td> 9,4 g EDTA poeder Voeg DEPC water toe, breng de pH 7,4. Autokliefde gedurende 20 min </td></tr><tr><td> TNB buffer: TNT buffer </td><td></td><td></td><td> 10 ml TNT buffer </td></tr><tr><td> TNB buffer: Het blokkeren van reagens </td><td></td><td></td><td> 0,05 g blokkerend reagens Om het blokkerend reagens ontbinden Verwarm de oplossing tot 60 ° C gedurende een uur onder roeren. Bewaren bij -20 ° C. (Afgeleid van de Perkin Elmer TSA-protocol.) </td></tr><tr><td> TNT buffer: Tris / HCl </td><td> Sigma </td><td> T1503 </td><td> 1M Tris / HCl, pH 8,0 </td></tr><tr><td> TNT buffer: NaCl </td><td> Sigma Aldrich </td><td> S9625 </td><td> 100 ml </td></tr><tr><td> TNT buffer: Tween20 </td><td> Sigma </td><td> 93773 </td><td> 5 M NaCl 30 ml 1 ml DEPC dH 2 O869 Ml Breng de pH op 7,5 bij kamertemperatuur. (Afgeleid van de Perkin Elmer TSA-protocol.) </td></tr><tr><td> TSA plus Cyanine3 / fluoresceïne-systeem </td><td> Perkin Elmer </td><td> NEL753000IKT </td><td> Lees aandachtig het protocol van de TSA Plus Fluorescentie Palet systeem voordat het experiment. </td></tr><tr><td> Buizen 14 ml steriel </td><td> Almeco - CM LAB Aps </td><td> 91016 </td><td></td></tr></tbody></table>

analysis of single-cell gene transcription by rna fluorescent in situ hybridization (fish)

Hechting van Plasmodium falciparum geïnfecteerde erythrocyten (IE) om humane endotheliale receptoren tijdens malariabesmettingen wordt gemedieerd door expressie van PfEMP1 eiwitvarianten gecodeerd door de genen var. De haploïde P. falciparum genoom herbergt ongeveer 60 verschillende var genen waarvan slechts een is verondersteld te transcriberen per cel tegelijk in het bloed stadium van de infectie. Hoe dergelijke elkaar uitsluitende regulatie van var gentranscriptie wordt bereikt is onduidelijk, evenals de identificatie van de individuele var genen of subgroepen van var genen geassocieerd met verschillende receptoren en het gevolg van differentiële bindend zijn voor de klinische uitkomst van P. falciparum infecties. Onlangs heeft de transcriptie elkaar uitsluitende paradigma is in twijfel getrokken door transcriptie assays gebaseerd op individuele P. falciparum transcript identificatie in enkele infected erytrocytaire cellen met behulp van RNA fluorescente in situ hybridisatie (FISH) analyse van var gentranscriptie door de parasiet in individuele kernen van P. falciparum IE 1. Hier geven we een gedetailleerd protocol voor het uitvoeren van de RNA-FISH methode voor de analyse van var gentranscriptie in enkele kernen van P. falciparum geïnfecteerde humane erythrocyten. De methode is gebaseerd op het gebruik van digoxigenine en biotine-gelabelde antisense RNA probes met de TSA Plus Fluorescence Palette System 2 (Perkin Elmer), microscopische analyse en vers geselecteerd P. falciparum IE. De in situ hybridisatie methode kan worden gebruikt om transcriptie en regulering van een aantal genen die tijdens de verschillende fasen van het P. toezicht falciparum levenscyclus en is aanpasbaar aan andere malariaparasiet soorten en andere organismen en celtypes.

Figuur 1 toont een stroomschema van de belangrijkste stappen en de tijdsduur van de RNA FISH methode. Een reeks van representatieve beelden van goed en slecht bewaard gebleven gebrandschilderde mRNA FISH experimenten met behulp van enkele P. falciparum IE worden getoond in Figuur 2. Deze intracellulaire protozoaire heeft een klein (1-1,5 micrometer diameter) kern, die is blauw gekleurd met DAPI. Vierentwintig uur na erytrocyten invasie in P. fal...

Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Single-cell Gene Transcription by RNA Fluorescent In Situ Hybridization FISH at JoVE.com

Analysis of Single-cell Gene Transcription by RNA Fluorescent In Situ Hybridization FISH

Fluorescerende<em&gt; In situ</em&gt; Hybridisatie (FISH) om mRNA transcripten in individuele cellen te identificeren maakt analyse van polygene activiteit zoals de gelijktijdige transcriptie van meer dan een lid van de<em&gt; Var</em&gt; Multigenfamilie in<em&gt; Plasmodium falciparum</em&gt; Geïnfecteerde erythrocyten<sup&gt; 1</sup&gt;. De techniek is aanpasbaar en kan gebruikt worden op verschillende genen, cellen en organismen.

Analyse van de Single-cell gentranscriptie door RNA TL<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisatie (FISH)

Adhesion of Plasmodium falciparum infected erythrocytes (IE) to human endothelial receptors during malaria infections is mediated by expression of PfEMP1 ...

Research

JoVE Journal

Biology

Analysis of Single-cell Gene Transcription by RNA Fluorescent In Situ Hybridization (FISH)

Zebrafish Whole Mount High-Resolution Double Fluorescent In Situ Hybridization

Zebrafish Whole Mount High-Resolution Double Fluorescent In Situ Hybridization

Zebravis hele Mount High-Resolution Double Fluorescent In Situ Hybridisatie

Whole mount in situ hybridization is one of the most widely used techniques in developmental biology.  Here, we present a high-resolution double ...

Fluorescence in situ hybridization (FISH) Protocol in Human Sperm

Fluorescence in situ hybridization FISH Protocol in Human Sperm

Fluorescentie In situ Hybridisatie (FISH) Protocol in menselijk sperma

Aneuploidies are the most frequent chromosomal abnormalities in humans. Most of these abnormalities result from meiotic errors during the gametogenic ...

In vitro Transcription and Capping of Gaussia Luciferase mRNA Followed by HeLa Cell Transfection

In vitro Transcription and Capping of Gaussia Luciferase mRNA Followed by HeLa Cell Transfection

In vitro transcriptie en aftopping van Gaussia Luciferase mRNA Gevolgd door HeLa celtransfectie

In vitro transcription is the synthesis of RNA transcripts by RNA polymerase from a linear DNA template containing the corresponding promoter sequence ...

Radioactive in situ Hybridization for Detecting Diverse Gene Expression Patterns in Tissue

Radioactive in situ Hybridization for Detecting Diverse Gene Expression Patterns in Tissue

Radioactieve In situ Hybridisatie voor het detecteren van Divers genexpressiepatronen in Tissue

Knowing the timing, level, cellular localization, and cell type that a gene is expressed in contributes to our understanding of the function of the gene. ...

Detection of Viral RNA by Fluorescence in situ Hybridization (FISH)

Detection of Viral RNA by Fluorescence in situ Hybridization FISH

Detectie van virale RNA door fluorescentie<em&gt; In situ</em&gt; Hybridisatie (FISH)

Viruses  that infect cells elicit specific changes to normal cell functions which serve  to divert energy and resources for viral replication. Many ...

Chromosome Replicating Timing Combined with Fluorescent In situ Hybridization

Chromosome Replicating Timing Combined with Fluorescent In situ Hybridization

Chromosoom repliceren Timing In combinatie met TL-<em&gt; In situ</em&gt; Hybridisatie

Mammalian DNA replication initiates at multiple sites along chromosomes at different times during S phase, following a temporal replication program. The ...

Whole Mount RNA Fluorescent in situ Hybridization of Drosophila Embryos

Whole Mount RNA Fluorescent in situ Hybridization of Drosophila Embryos

Hele Mount RNA TL<em&gt; In situ</em&gt; Hybridisatie van<em&gt; Drosophila</em&gt; Embryo&#39;s

Assessing  the expression pattern of a gene, as well as the subcellular localization  properties of its transcribed RNA, are key features for ...

RNA In situ Hybridization in Whole Mount Embryos and Cell Histology Adapted for Marine Elasmobranchs

RNA In situ Hybridization in Whole Mount Embryos and Cell Histology Adapted for Marine Elasmobranchs

RNA<em&gt; In situ</em&gt; Hybridisatie in Hele Mount Embryo&#39;s en histologie Aangepast voor Marine kraakbeenvissen

Marine  elasmobranchs are valued animal models for biomedical and genomic studies as  they are the most primitive vertebrates to have adaptive immunity ...

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Visualisatie en analyse van mRNA moleculen met behulp van fluorescentie<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisatie in<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em

The Fluorescence in situ Hybridization (FISH) method allows one to detect nucleic acids in the native cellular environment. Here we provide a protocol for ...

Analysis of Global RNA Synthesis at the Single Cell Level following Hypoxia

Analyse van Global RNA synthese in de Single Cell Level volgende Hypoxie

Hypoxia or lowering of the oxygen availability is involved in many physiological and pathological processes. At the molecular level, cells initiate a ...