Name: analysis of single-cell gene transcription by rna fluorescent in situ hybridization (fish)
Uploaded: 2012-10-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Single-cell Gene Transcription by RNA Fluorescent In Situ Hybridization FISH at JoVE.com

המחברים מבקשים להודות למיכאל Alifrangis ואולה Abildtrup לgenotyping של טפילים וכריסטינה הולמת לסיוע טכני מעולה. עבודה זו מומנה על ידי הווארד יוז רפואי במכון (מענק 55005511), הקרן לונדבק (מענק R9-A840) ועל ידי נילס בוהר הקרן.

1. דור של אריתרוציטים הנגועים הנבחרים טרי עבור assay זה, את התוצאות הטובות ביותר מתקבלות בעת שימוש בתרבויות שנבחרו זה עתה לביטוי פני PfEMP1 חלבון. בניסוי המסוים הזה 3D7 פ שושלת falciparum נבחרה באמצעות נוגדנים ספציפיים כמתואר 1 ...

<ol>
	<li>Joergensen, L., Bengtsson, D. C., Bengtsson, A., Ronander, E., Berger, S. S., Turner, L., Dalgaard, M. B., Cham, G. K., Victor, M. E., Lavstsen, T., Theander, T. G., Arnot, D. E., Jensen, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surface+co-expression+of+two+different+PfEMP1+antigens+on+single+Plasmodium+falciparum-infected+erythrocytes+facilitates+binding+to+ICAM1+and+PECAM1.">Surface co-expression of two different PfEMP1 antigens on single Plasmodium falciparum-infected erythrocytes facilitates binding to ICAM1 and PECAM1.</a> PLoS Pathog. 2, 1001083 (2010).</li><li>Pinaud, R., Mello, C. V., Velho, T. A., Wynne, R. D., Tremere, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+two+mRNA+species+at+single-cell+resolution+by+double-fluorescence+in+situ+hybridization.">Detection of two mRNA species at single-cell resolution by double-fluorescence in situ hybridization.</a> Nat. Protoc. 3, 1370-1379 (2008).</li><li>Cheeseborough, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> District Laboratory Practice in Tropical Countries. , (2006).</li><li>Brolin, K. J., Ribacke, U., Nilsson, S., Ankarklev, J., Moll, K., Wahlgren, M., Chen, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+transcription+of+duplicated+var2csa+gene+copies+in+individual+Plasmodium+falciparum+parasites.">Simultaneous transcription of duplicated var2csa gene copies in individual Plasmodium falciparum parasites.</a> Genome Biol. 10, R117 (2009).</li><li>Epp, C., Li, F., Howitt, C. A., Chookajorn, T., Deitsch, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromatin+associated+sense+and+antisense+noncoding+RNAs+are+transcribed+from+the+var+gene+family+of+virulence+genes+of+the+malaria+parasite+Plasmodium+falciparum.">Chromatin associated sense and antisense noncoding RNAs are transcribed from the var gene family of virulence genes of the malaria parasite Plasmodium falciparum.</a> RNA. 15, 116-127 (2009).</li><li>Freitas-Junior, L. H., Hernandez-Rivas, R., Ralph, S. A., Montiel-Condado, D., Ruvalcaba-Salazar, O. K., Rojas-Meza, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Telomeric+heterochromatin+propagation+and+histone+acetylation+control+mutually+exclusive+expression+of+antigenic+variation+genes+in+malaria+parasites.">Telomeric heterochromatin propagation and histone acetylation control mutually exclusive expression of antigenic variation genes in malaria parasites.</a> Cell. 121, 25-36 (2005).</li><li>Obernosterer, G., Martinez, J., Alenius, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Locked+nucleic+acid-based+in+situ+detection+of+microRNAs+in+mouse+tissue+sections.">Locked nucleic acid-based in situ detection of microRNAs in mouse tissue sections.</a> Nature Protoc. 2, 1508-1514 (2007).</li><li>Li, F., Sonbuchner, L., Kyes, S. A., Epp, C., Deitsch, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nuclear+non-coding+RNA+are+transcribed+from+the+centromeres+of+Plasmodium+falciparum+and+are+associated+with+centromeric+chromatin.">Nuclear non-coding RNA are transcribed from the centromeres of Plasmodium falciparum and are associated with centromeric chromatin.</a> J. Biol. Chem. 283, 5692-5698 (2008).</li><li>Thompson, J., Sinden, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+detection+of+Pbs21+mRNA+during+sexual+development+of+Plasmodium+berghei.">In situ detection of Pbs21 mRNA during sexual development of Plasmodium berghei.</a> Mol. Biochem. Parasitol. 68, 189-196 (1994).</li><li>Thompson, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+detection+of+RNA+in+blood-+and+mosquito-stage+malaria+parasites.">In situ detection of RNA in blood- and mosquito-stage malaria parasites.</a> Methods Mole Med. 72, 225-235 (2002).</li><li>Arnot, D. E., Ronander, E., Bengtsson, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+progression+of+the+intra-erythrocytic+cell+cycle+of+Plasmodium+falciparum+and+the+role+of+the+centriolar+plaques+in+asynchronous+mitotic+division+during+schizogony.">The progression of the intra-erythrocytic cell cycle of Plasmodium falciparum and the role of the centriolar plaques in asynchronous mitotic division during schizogony.</a> Int. J. Parasitol. 41, 71-80 (2011).</li><li>Osborne, C. S., Chakalova, L., Brown, K. E., Carter, D., Horton, A., Debrand, E., Goyenechea, B., Mitchell, J. A., Lopes, S., Reik, W., Fraser, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Active+genes+dynamically+colocalize+to+shared+sites+of+ongoing+transcription.">Active genes dynamically colocalize to shared sites of ongoing transcription.</a> Nat. Genet. 36, 1065-1071 (2004).</li></ol>

ניתוח דגי רנ&quot;א, בניגוד לשיטות כמו סופג צפון וRT-PCR, מאפשר אפליה של תעתיקי mRNA ספציפיים ברמת התא הבודדה. זה מאפשר להבחין בין תאי תעתיק פעילים ולא פעילים, בדוגמה זו, פ falciparum הטפיל פרוטוזואה בתוך תאי דם אדומים אנושיים. תצפיות כאלה כל תא הן לעתים הכרחיות ויכולות לחשוף ?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם המגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגים </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> חומצה אצטית </td><td> סיגמא / אולדריץ </td><td> 338826-100 מ&quot;ל </td><td></td></tr><tr><td> Albumax מדיה: 1640 פתרון גלוטמין RPMI </td><td> Lonza </td><td> BE12-115F </td><td> 500 המ&quot;ל RPMI 1640 פתרון 5 מ&quot;ל גלוטמין </td></tr><tr><td> Albumax תקשורת: Gentamycin גופרת Albumax-פתרון </td><td> Lonza </td><td> BE02-012E </td><td> 2.5 מ&quot;ל gentamycin גופרה 50 מ&quot;ל Albumax-פתרון </td></tr><tr><td> Albumax-פתרון: Hypoxanthine </td><td> סיגמה אולדריץ </td><td> H9377 </td><td> 0,8 גרם Hypoxanthine </td></tr><tr><td> Albumax-פתרון: AlbuMAX השני </td><td> אניnvitrogen </td><td> 11021-037 </td><td> 200 גרם Albumax </td></tr><tr><td> Albumax-פתרון: RPMI 1640 </td><td> Lonza </td><td> BE12-115F </td><td> 4 הליטר RPMI 1640 ממס עם מגנט במקסימום. 50 ° C. סנן לעקר ולאחסן ב -20 ° C בaliquots. </td></tr><tr><td> Amberlite </td><td> סיגמא </td><td> A5710-110g </td><td> שרף לdeionize פוראמיד. </td></tr><tr><td> הצמוד peroxidase אנטי ביוטין עז PAB </td><td> Calbiochem </td><td> 203206 </td><td></td></tr><tr><td> נוגדן אנטי Dig </td><td> נובוס ביולוגי </td><td> NB100-41330 </td><td></td></tr><tr><td> ריאגנט אנטי לדעוך עם DAPI </td><td> Invitrogen </td><td> P36931 </td><td> תקשורת ההרכבה יש לרפא עבור 24 שעות לפני שהוא סגר את השקופית לחלוטין. </td></tr><tr><td> ביוטין רנ&quot;א תיוג מיקס </td><td&gt; רוש </td><td> 11685597910 </td><td></td></tr><tr><td> מצלמה דיגיטלית </td><td> מראה דיגיטלי ניקון DC-F11 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Coverslips </td><td> מנזל-גלזר </td><td> 631-1570 </td><td></td></tr><tr><td> 25 משטח תרבות בקבוק 2 סנטימטר Nunclon </td><td> Nunc </td><td> 156340 </td><td></td></tr><tr><td> DEPC </td><td> Fluka / סיגמא </td><td> 32490-100 מ&quot;ל </td><td> 1 המ&quot;ל DEPC במי 1000 מ&quot;ל deinonized. הוסף בר מערבבים ומערבבים במשך 12 שעות. חיטוי למשך 30 דקות. </td></tr><tr><td> מצלמה דיגיטלית </td><td> מראה דיגיטלי ניקון DC-F11 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> חלבון Dynabeads </td><td> Invitrogen </td><td> 10002D </td><td></td></tr><tr><td> מגנט DynaMaq-15 </td><td> Invitrogen </td><td> 123-01D </td><td></td></tr><tr><td> פוראמיד bioultra 99% </td><td> Fluka/ סיגמא </td><td> 47671-1l-F </td><td> פוראמיד deionized: 5 גרם של שרף חילוף יונים לכל 100 מ&quot;ל של פוראמיד. מערבב 30 דקות. לסנן דרך נייר Whatman. </td></tr><tr><td> . ג&#39;לטין 0 75% פתרון: ג&#39;לטין </td><td> סיגמה אולדריץ </td><td> G2500 </td><td> 3.75 גר &#39;ג&#39;לטין 500 המ&quot;ל בRPMI 1640. חום עד 56 מעלות צלזיוס להמסה. סנן לעקר כאשר 56 ° C. חנות ב -20 ° C בaliquots. </td></tr><tr><td> . ג&#39;לטין 0 75% פתרון: RPMI 1640 </td><td> Lonza </td><td> BE12-115F </td><td> 3.75 גר &#39;ג&#39;לטין 500 המ&quot;ל בRPMI 1640. חום עד 56 מעלות צלזיוס להמסה. סנן לעקר כאשר 56 ° C. חנות ב -20 ° C בaliquots. </td></tr><tr><td> פתרון גלוטמין: L-glutamin </td><td> סיגמה אולדריץ </td><td> G3126 </td><td> 14.6 גלוטמין גרם לליטר ב500 מ&quot;ל 0,9% NaCl. להתמוסס, מסנן שלterilize ולאחסן ב -20 ° C בaliquots. </td></tr><tr><td> פתרון גלוטמין: HCl </td><td> סיגמא </td><td> H1758 </td><td> 14.6 גלוטמין גרם לליטר ב500 מ&quot;ל 0,9% NaCl. להתמוסס, לסנן לעקר ולאחסן ב -20 ° C בaliquots. </td></tr><tr><td> פתרון הכלאה: פוראמיד ביו אולטרה 99% SSC 20x </td><td> Fluka / סיגמא </td><td> 47671-1l-F </td><td> סה&quot;כ 20 מ&quot;ל, לשמור קפוא ב -20 ° C בaliquots 10 פוראמיד deionized מ&quot;ל </td></tr><tr><td> פתרון הכלאה: התרכיז של 50x Denhardt </td><td> סיגמא </td><td> D2532 </td><td> 20xSSC 5 מ&quot;ל </td></tr><tr><td> פתרון הכלאה: ריאגנט שמרים tRNARoche חסימה </td><td> סיגמא </td><td> R-6750 </td><td> 2 מ&quot;ל של 50x Denhardt 250 20 מ&quot;ג למ&quot;ל μl שמרי tRNA </td></tr><tr><td><sטרונג&gt; פתרון הכלאה: DNA זרע הסלמון </td><td> Fluka / סיגמא </td><td> 31149-106GF </td><td> 0.4g רוש חסימת מגיב 1 מ&quot;ל של 10 מ&quot;ג לכל דנ&quot;א זרע סלמון מ&quot;ל (קריטי: לפגל הסלמון spermDNA בגיל 96 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות לפני שמוסיף לפתרון ההכלאה) </td></tr><tr><td> מכליא ThermoStar 100 HC4 </td><td> Quantifoil המכשירים GmbH </td><td> 1004-0011 </td><td> יכול להיות מוחלף על ידי תאי הכלאה חופשיות RNase מרופדים במי DEPC תנור הכלאה ו. </td></tr><tr><td> טבילת שמן UV שקוף פלואורסצנטי חופשי </td><td> סיגמא </td><td> 10976-1EA </td><td></td></tr><tr><td> מיקרוסקופ immunofluorescence או confocal </td><td> ניקון D-Eclipse TE2000C </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Nailpolish </td><td> ניתן להשיג בכל בית מרקחת </td><td></td><td></td></tr><tr><td> PBS 20x: NaCl KCl Na 2 HPO 4 x 2H 2 O KH 2 PO 4 DEPC deionized H 2 O </td><td></td><td></td><td> pH Ajust ל -7.4 160 גרם 4 גרם 23 גרם 4 גרם 1 הליטר </td></tr><tr><td> Paraformaldehyde 4% </td><td> Fluka / chemika </td><td> 76240 </td><td> 4 גרם PFA ב80 המ&quot;ל PBS / DEPC. חום עד 65 מעלות צלזיוס עד שPFA נמס. הוסף 20 המ&quot;ל PBS, מאפשר הפתרון לצינון. התאם את ה-pH ל -7.4. לסנן. חנות בaliquots ב -20 ° C. </td></tr><tr><td> Paraformaldehyde 4% / חומצה אצטית 5% </td><td></td><td></td><td> 950 paraformaldhyde μl + 50 חומצה אצטית μl </td></tr><tr><td> עכלן </td><td> סיגמא / אולדריץ </td><td> P7000 </td><td></td></tr><tr><td> מצומדות peroxidase אנטיביוטין </td><td> Calbiochem </td><td> 203206 </td><td></td></tr><tr><td> RBC-לשטוף מדיה: 1640 פתרון גלוטמין RPMI </td><td> Lonza </td><td> BE12-115F </td><td> 500 1640 פתרון מיליליטר RPMI 5 מ&quot;ל גלוטמין </td></tr><tr><td> RBC-לשטוף תקשורת: סולפט Gentamycin </td><td> Lonza </td><td> BE02-012E </td><td> 2.5 מ&quot;ל gentamycin גופרה </td></tr><tr><td> RNase </td><td> סיגמא / אולדריץ </td><td></td><td> הפוך פתרון מניית מ&quot;ל 10 מ&quot;ג /. </td></tr><tr><td> 1.5 צינור RNase החופשי מ&quot;ל </td><td> Ambion </td><td> AM12450 </td><td></td></tr><tr><td> RNase Zap </td><td> Ambion </td><td> AM9780 </td><td></td></tr><tr><td> שקופיות 4 בארות 11mm </td><td> Thermo Scientific </td><td> MENZXER306W </td><td></td></tr><tr><td> SSC 20x: NaCl </td><td> סיגמא / אלהיידריך </td><td> S9625 </td><td> M 3 NaCl (175 גר &#39;/ ליטר) 0.3M Na 3 ציטראט x H 2 O (88 ג&#39;/ ליטר) התאם ל -7.0 pH עם 1M HCl </td></tr><tr><td> SSC 20x: מייבשי ציטראט נתרן </td><td> סיגמא / אולדריץ </td><td> W302600 </td><td> M 3 NaCl (175 גר &#39;/ ליטר) 0.3M Na 3 ציטראט x H 2 O (88 ג&#39;/ ליטר) התאם ל -7.0 pH עם 1M HCl </td></tr><tr><td> SSPE 20x: NaCl </td><td> סיגמא / אולדריץ </td><td> S9625 </td><td> 175.3 גרם NaCl </td></tr><tr><td> SSPE 20x: Nah 2 PO 4 </td><td> סיגמא / אולדריץ </td><td> S0751 </td><td> 27.6 גרם לאא 2 PO 4. </td></tr><tr><td> SSPE 20x: 4 EDTA אבקה </td><td></td><td></td><td> 9.4 גרם אבקת EDTA מוסיף מי DEPC, להתאים pH 7.4. אוטומטיClave ל20 דקות </td></tr><tr><td> TNB חיץ: TNT חיץ </td><td></td><td></td><td> 10 מ&quot;ל TNT חיץ </td></tr><tr><td> TNB חיץ: ריאגנט חסימה </td><td></td><td></td><td> מגיב חסימת 0.05g כדי לפזר את מגיב החסימה, מחמם את התמיסה ל 60 מעלות צלזיוס במשך שעה אחת עם ערבוב. חנות ב -20 ° C. (נגזר פרקין אלמר TSA-הפרוטוקול). </td></tr><tr><td> TNT חיץ: טריס / HCl </td><td> סיגמא </td><td> T1503 </td><td> 1M טריס / HCl, 8.0 pH </td></tr><tr><td> TNT חיץ: NaCl </td><td> סיגמה אולדריץ </td><td> S9625 </td><td> 100 מ&quot;ל </td></tr><tr><td> TNT חיץ: Tween20 </td><td> סיגמא </td><td> 93773 </td><td> 5 M NaCl 30 מ&quot;ל 1 המ&quot;ל DEPC DH 2 O869 מ&quot;ל התאם pH ל -7.5 בטמפרטורת חדר. (נגזר פרקין אלמר TSA-הפרוטוקול). </td></tr><tr><td> TSA בתוספת מערכת Cyanine3 / fluorescein </td><td> פרקין אלמר </td><td> NEL753000IKT </td><td> קראו את הפרוטוקול מTSA פלוס מערכת פלטת פלואורסצנטי בקפידה לפני תחילת הניסוי. </td></tr><tr><td> צינורות 14 מיליליטר סטרילי </td><td> Almeco - Aps LAB CM </td><td> 91016 </td><td></td></tr></tbody></table>

analysis of single-cell gene transcription by rna fluorescent in situ hybridization (fish)

הידבקות של אריתרוציטים Plasmodium falciparum הנגועים (IE) לקולטנים אנדותל אדם במהלך זיהומי מלריה מתווכת על ידי ביטוי של PfEMP1 גרסות חלבונים המקודדות על ידי גני var. הפלואידים פ falciparum הגנום מטפח כ 60 גני var שונים אשר אחד בלבד כבר האמינו שעבד לכל תא בכל פעם בשלב הדם של הזיהום. איך רגולציה סותרת כזה של שעתוק הגנים var מושגת לא ברור, כפי שהוא זיהוי גני var בודדים או תת קבוצות של גנים הקשורים לvar קולטנים שונים והתוצאה של מחייב הפרש בתוצאה הקלינית של פ זיהומי falciparum. לאחרונה, הפרדיגמה שעתוק מוציאות כבר נקראה בספק על ידי מבחני שעתוק המבוססים על פ פרט זיהוי תמליל falciparum בinf אחתתאי האריתרוציטים ected באמצעות רנ&quot;א ניאון כלאה באתר (FISH) ניתוח של שעתוק הגנים var ידי הטפיל בגרעינים בודדים של פ falciparum 1-IE. כאן, אנו מציגים פרוטוקול מפורט לביצוע המתודולוגיה RNA-FISH לניתוח של שעתוק הגנים var בגרעינים בודדים של פ falciparum נגוע אריתרוציטים אדם. השיטה מבוססת על השימוש בdigoxigenin וביוטין שכותרתו RNA באמצעות בדיקות antisense TSA פלוס מערכת פלואורסצנטי פלטת 2 (פרקין אלמר), ניתוחים מיקרוסקופים ונבחר טריים פ falciparum IE. בשיטת כלאה באתר ניתן להשתמש כדי לפקח על שעתוק ורגולציה של מגוון רחב של גנים הביע בשלבים השונים של פ מחזור חי falciparum וניתן להתאמה למינים אחרים מלריה טפיל ואורגניזמים אחרים וסוגי תאים.

איור 1 מדגים תרשים זרימה של השלבים העיקריים ומשך הזמן של המתודולוגיה דגי רנ&quot;א. סדרה של תמונות מייצגות של ניסויים וגם גרועים השתמרו מוכתמים mRNA דגים באמצעות פ אחת falciparum אקספלורר מוצגים באיור 2. protozoan הת...

Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Single-cell Gene Transcription by RNA Fluorescent In Situ Hybridization FISH at JoVE.com

Analysis of Single-cell Gene Transcription by RNA Fluorescent In Situ Hybridization FISH

פלואורני<em&gt; באתר</em&gt; הכלאה (דגים) כדי לזהות תעתיקי mRNA בתאים בודדים מאפשרת ניתוח של פעילות polygenic כגון שעתוק סימולטני של חבר אחד או יותר של<em&gt; Var</em&gt; משפחת multigene ב<em&gt; Plasmodium falciparum</em&gt; אריתרוציטים נגועים<sup&gt; 1</sup&gt;. הטכניקה ניתנת להתאמה, וניתן להשתמש בסוגים שונים של גנים, תאים ואורגניזמים.

ניתוח של שעתוק גנים מהתא הבודד על ידי RNA פלורסנט<em&gt; באתר</em&gt; הכלאה (דגים)

Adhesion of Plasmodium falciparum infected erythrocytes (IE) to human endothelial receptors during malaria infections is mediated by expression of PfEMP1 ...

Research

JoVE Journal

Biology

Analysis of Single-cell Gene Transcription by RNA Fluorescent In Situ Hybridization (FISH)

Zebrafish Whole Mount High-Resolution Double Fluorescent In Situ Hybridization

Zebrafish Whole Mount High-Resolution Double Fluorescent In Situ Hybridization

דג הזברה שלמים הר ברזולוציה גבוהה פעמיים פלורסנט באתרו הכלאה

Whole mount in situ hybridization is one of the most widely used techniques in developmental biology.  Here, we present a high-resolution double ...

Fluorescence in situ hybridization (FISH) Protocol in Human Sperm

Fluorescence in situ hybridization FISH Protocol in Human Sperm

פלואורסצנציה באתרו הכלאה (FISH) פרוטוקול של זרע אדם

Aneuploidies are the most frequent chromosomal abnormalities in humans. Most of these abnormalities result from meiotic errors during the gametogenic ...

In vitro Transcription and Capping of Gaussia Luciferase mRNA Followed by HeLa Cell Transfection

In vitro Transcription and Capping of Gaussia Luciferase mRNA Followed by HeLa Cell Transfection

בתעתיק במבחנה תקרת של mRNA בלוציפראז Gaussia ואחריו transfection Cell הלה

In vitro transcription is the synthesis of RNA transcripts by RNA polymerase from a linear DNA template containing the corresponding promoter sequence ...

Radioactive in situ Hybridization for Detecting Diverse Gene Expression Patterns in Tissue

Radioactive in situ Hybridization for Detecting Diverse Gene Expression Patterns in Tissue

רדיואקטיבי באתרו הכלאה לזיהוי תבניות ביטוי מגוונות גנים רקמות

Knowing the timing, level, cellular localization, and cell type that a gene is expressed in contributes to our understanding of the function of the gene. ...

Detection of Viral RNA by Fluorescence in situ Hybridization (FISH)

Detection of Viral RNA by Fluorescence in situ Hybridization FISH

זיהוי של רנ&quot;א נגיפי על ידי הקרינה<em&gt; באתרו</em&gt; הכלאה (דגים)

Viruses  that infect cells elicit specific changes to normal cell functions which serve  to divert energy and resources for viral replication. Many ...

Chromosome Replicating Timing Combined with Fluorescent In situ Hybridization

Chromosome Replicating Timing Combined with Fluorescent In situ Hybridization

עיתוי מעתיק כרומוזום בשילוב עם פלורסנט<em&gt; באתר</em&gt; הכלאה

Mammalian DNA replication initiates at multiple sites along chromosomes at different times during S phase, following a temporal replication program. The ...

Whole Mount RNA Fluorescent in situ Hybridization of Drosophila Embryos

Whole Mount RNA Fluorescent in situ Hybridization of Drosophila Embryos

הר כולו RNA פלורסנט<em&gt; באתר</em&gt; הכלאה של<em&gt; דרוזופילה</em&gt; עוברים

Assessing  the expression pattern of a gene, as well as the subcellular localization  properties of its transcribed RNA, are key features for ...

RNA In situ Hybridization in Whole Mount Embryos and Cell Histology Adapted for Marine Elasmobranchs

RNA In situ Hybridization in Whole Mount Embryos and Cell Histology Adapted for Marine Elasmobranchs

רנ&quot;א<em&gt; באתר</em&gt; הכלאה בעוברי הר שלמים והיסטולוגיה הסלולרית מותאמת לElasmobranchs הימי

Marine  elasmobranchs are valued animal models for biomedical and genomic studies as  they are the most primitive vertebrates to have adaptive immunity ...

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

הדמיה וניתוח של מולקולות ה-mRNA באמצעות הקרינה<em&gt; באתרו</em&gt; הכלאה ב<em&gt; Cerevisiae Saccharomyces</em

The Fluorescence in situ Hybridization (FISH) method allows one to detect nucleic acids in the native cellular environment. Here we provide a protocol for ...

Analysis of Global RNA Synthesis at the Single Cell Level following Hypoxia

ניתוח של גלובל RNA סינתזה ברמת התא בודד הבאות היפוקסיה

Hypoxia or lowering of the oxygen availability is involved in many physiological and pathological processes. At the molecular level, cells initiate a ...