Name: analysis of single-cell gene transcription by rna fluorescent in situ hybridization (fish)
Uploaded: 2012-10-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Single-cell Gene Transcription by RNA Fluorescent In Situ Hybridization FISH at JoVE.com

Forfatterne ønsker å takke Michael Alifrangis og Ulla Abildtrup for genotyping av parasitter og Christina Holm for utmerket teknisk assistanse. Dette arbeidet ble finansiert av Howard Hughes Medical Institute (tilskudd 55.005.511), The Lundbeck Foundation (tilskudd R9-A840) og ved Niels Bohr Foundation.

1. Generasjon Fersk Utvalgte Infiserte Erytrocytter For denne analysen, blir de beste resultater oppnådd ved bruk av ferskt utvalgte kulturer for overflate ekspresjon av PfEMP1 protein. I dette spesielle forsøket 3D7 P. falciparum avstamning ble valgt ved hjelp av spesifikke antistoffer som tidligere beskrevet 1. Dag 1 <ol><li> Innhøsting 200fil av pakkede blodlegemer fra en P. falciparum kultur inneholdende 2-5% sent stadium IE ved...

<ol>
	<li>Joergensen, L., Bengtsson, D. C., Bengtsson, A., Ronander, E., Berger, S. S., Turner, L., Dalgaard, M. B., Cham, G. K., Victor, M. E., Lavstsen, T., Theander, T. G., Arnot, D. E., Jensen, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surface+co-expression+of+two+different+PfEMP1+antigens+on+single+Plasmodium+falciparum-infected+erythrocytes+facilitates+binding+to+ICAM1+and+PECAM1.">Surface co-expression of two different PfEMP1 antigens on single Plasmodium falciparum-infected erythrocytes facilitates binding to ICAM1 and PECAM1.</a> PLoS Pathog. 2, 1001083 (2010).</li><li>Pinaud, R., Mello, C. V., Velho, T. A., Wynne, R. D., Tremere, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+two+mRNA+species+at+single-cell+resolution+by+double-fluorescence+in+situ+hybridization.">Detection of two mRNA species at single-cell resolution by double-fluorescence in situ hybridization.</a> Nat. Protoc. 3, 1370-1379 (2008).</li><li>Cheeseborough, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> District Laboratory Practice in Tropical Countries. , (2006).</li><li>Brolin, K. J., Ribacke, U., Nilsson, S., Ankarklev, J., Moll, K., Wahlgren, M., Chen, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+transcription+of+duplicated+var2csa+gene+copies+in+individual+Plasmodium+falciparum+parasites.">Simultaneous transcription of duplicated var2csa gene copies in individual Plasmodium falciparum parasites.</a> Genome Biol. 10, R117 (2009).</li><li>Epp, C., Li, F., Howitt, C. A., Chookajorn, T., Deitsch, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromatin+associated+sense+and+antisense+noncoding+RNAs+are+transcribed+from+the+var+gene+family+of+virulence+genes+of+the+malaria+parasite+Plasmodium+falciparum.">Chromatin associated sense and antisense noncoding RNAs are transcribed from the var gene family of virulence genes of the malaria parasite Plasmodium falciparum.</a> RNA. 15, 116-127 (2009).</li><li>Freitas-Junior, L. H., Hernandez-Rivas, R., Ralph, S. A., Montiel-Condado, D., Ruvalcaba-Salazar, O. K., Rojas-Meza, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Telomeric+heterochromatin+propagation+and+histone+acetylation+control+mutually+exclusive+expression+of+antigenic+variation+genes+in+malaria+parasites.">Telomeric heterochromatin propagation and histone acetylation control mutually exclusive expression of antigenic variation genes in malaria parasites.</a> Cell. 121, 25-36 (2005).</li><li>Obernosterer, G., Martinez, J., Alenius, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Locked+nucleic+acid-based+in+situ+detection+of+microRNAs+in+mouse+tissue+sections.">Locked nucleic acid-based in situ detection of microRNAs in mouse tissue sections.</a> Nature Protoc. 2, 1508-1514 (2007).</li><li>Li, F., Sonbuchner, L., Kyes, S. A., Epp, C., Deitsch, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nuclear+non-coding+RNA+are+transcribed+from+the+centromeres+of+Plasmodium+falciparum+and+are+associated+with+centromeric+chromatin.">Nuclear non-coding RNA are transcribed from the centromeres of Plasmodium falciparum and are associated with centromeric chromatin.</a> J. Biol. Chem. 283, 5692-5698 (2008).</li><li>Thompson, J., Sinden, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+detection+of+Pbs21+mRNA+during+sexual+development+of+Plasmodium+berghei.">In situ detection of Pbs21 mRNA during sexual development of Plasmodium berghei.</a> Mol. Biochem. Parasitol. 68, 189-196 (1994).</li><li>Thompson, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+detection+of+RNA+in+blood-+and+mosquito-stage+malaria+parasites.">In situ detection of RNA in blood- and mosquito-stage malaria parasites.</a> Methods Mole Med. 72, 225-235 (2002).</li><li>Arnot, D. E., Ronander, E., Bengtsson, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+progression+of+the+intra-erythrocytic+cell+cycle+of+Plasmodium+falciparum+and+the+role+of+the+centriolar+plaques+in+asynchronous+mitotic+division+during+schizogony.">The progression of the intra-erythrocytic cell cycle of Plasmodium falciparum and the role of the centriolar plaques in asynchronous mitotic division during schizogony.</a> Int. J. Parasitol. 41, 71-80 (2011).</li><li>Osborne, C. S., Chakalova, L., Brown, K. E., Carter, D., Horton, A., Debrand, E., Goyenechea, B., Mitchell, J. A., Lopes, S., Reik, W., Fraser, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Active+genes+dynamically+colocalize+to+shared+sites+of+ongoing+transcription.">Active genes dynamically colocalize to shared sites of ongoing transcription.</a> Nat. Genet. 36, 1065-1071 (2004).</li></ol>

RNA FISH analyse, i motsetning til metoder som Northern blotting og RT-PCR, tillater diskriminering av spesifikke mRNA transkripter på enkelt celle-nivå. Dette gjør det mulig å diskriminere mellom transkripsjonelt aktive og inaktive celler, i dette eksemplet, P. falciparum parasittiske protozoer inne humane røde blodceller. Slike hel-celle observasjoner er ofte nødvendig, og kan rakne viktige og romanen transkripsjonelle mønstre en. Selv om andre RNA FISH metoder h...

<table border="1"><tbody><tr><td> Navnet på reagensen </td><td> Selskapet </td><td> Katalognummer </td><td> Kommentarer </td></tr><tr><td> Eddiksyre </td><td> Sigma / Aldrich </td><td> 338826-100ml </td><td></td></tr><tr><td> Albumax media: RPMI 1640 Glutamin løsning </td><td> Lonza </td><td> BE12-115F </td><td> 500 ml RPMI 1640 5 ml glutamin løsning </td></tr><tr><td> Albumax media: Gentamycin sulfat Albumax-løsning </td><td> Lonza </td><td> BE02-012E </td><td> 2,5 ml gentamycin sulfat 50 ml Albumax-løsning </td></tr><tr><td> Albumax-løsning: hypoxantin </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> H9377 </td><td> 0,8 g hypoxantin </td></tr><tr><td> Albumax-løsning: AlbuMAX II </td><td> Jegnvitrogen </td><td> 11021-037 </td><td> 200 g Albumax </td></tr><tr><td> Albumax-løsning: RPMI 1640 </td><td> Lonza </td><td> BE12-115F </td><td> 4 liters RPMI 1640 Oppløse med magnet på maks. 50 ° C. Filtrer sterilisere og oppbevar ved -20 ° C i aliquoter. </td></tr><tr><td> Amberlite </td><td> Sigma </td><td> A5710-110g </td><td> Harpiks å deionize formamid. </td></tr><tr><td> Anti-biotin geit pAb Peroxidase konjugat </td><td> Calbiochem </td><td> 203206 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-Dig antistoff </td><td> Novus Biologicals </td><td> NB100-41330 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-fade reagens med DAPI </td><td> Invitrogen </td><td> P36931 </td><td> Monteringshullene media har å kurere i 24 timer før forsegling lysbildet helt. </td></tr><tr><td> Biotin RNA Merking Mix </td><td&gt; Roche </td><td> 11685597910 </td><td></td></tr><tr><td> Kameraet digital </td><td> Nikon syn DC-F11 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Dekkglass </td><td> Menzel-glaser </td><td> 631-1570 </td><td></td></tr><tr><td> kultur kolbe 25 cm 2 Nunclon overflate </td><td> Nunc </td><td> 156340 </td><td></td></tr><tr><td> DEPC </td><td> Fluka / Sigma </td><td> 32490-100ml </td><td> 1 ml DEPC i 1000 ml deinonized vann. Legg en rørepinne og rør i 12 timer. Autoklav for 30 min. </td></tr><tr><td> Digitalkamera </td><td> Nikon syn DC-F11 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Dynabeads Protein A </td><td> Invitrogen </td><td> 10002D </td><td></td></tr><tr><td> DynaMaq-15 Magnet </td><td> Invitrogen </td><td> 123-01D </td><td></td></tr><tr><td> Formamid bioultra 99% </td><td> Fluka/ Sigma </td><td> 47671-1L-F </td><td> Avionisert formamid: 5 g ionebytterharpiks per 100 ml formamid. Omrør 30 min. Filtrere gjennom Whatman papir. </td></tr><tr><td> . Gelatin 0 75% løsning: Gelatin </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> G2500 </td><td> 3,75 g gelatin i 500 ml RPMI 1640. Varm opp til 56 ° C for å oppløse. Filter sterilisere når 56 ° C. Oppbevar ved -20 ° C i aliquoter. </td></tr><tr><td> . Gelatin 0 75% løsning: RPMI 1640 </td><td> Lonza </td><td> BE12-115F </td><td> 3,75 g gelatin i 500 ml RPMI 1640. Varm opp til 56 ° C for å oppløse. Filter sterilisere når 56 ° C. Oppbevar ved -20 ° C i aliquoter. </td></tr><tr><td> Glutamin løsning: L-Glutamin </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> G3126 </td><td> 14,6 g L glutamin i 500 ml 0,9% NaCl. Oppløses, filter sterilize og lagre ved -20 ° C i aliquoter. </td></tr><tr><td> Glutamin løsning: HCl </td><td> Sigma </td><td> H1758 </td><td> 14,6 g L glutamin i 500 ml 0,9% NaCl. Oppløs, filtrer sterilisere og oppbevar ved -20 ° C i aliquoter. </td></tr><tr><td> Hybridisering løsning: formamid Bio ultra 99% SSC 20x </td><td> Fluka / Sigma </td><td> 47671-1L-F </td><td> Totalt 20 ml, holde fryses ved -20 ° C i aliquoter 10 ml avionisert formamid </td></tr><tr><td> Hybridisering løsning: Denhardfs 50x konsentrat </td><td> Sigma </td><td> D2532 </td><td> 5ml 20xSSC </td></tr><tr><td> Hybridisering løsning: Gjær tRNARoche blokkering reagens </td><td> Sigma </td><td> R-6750 </td><td> 2 ml 50x Denhardfs 250 pl 20 mg per ml gjær tRNA </td></tr><tr><td><sTrong&gt; Hybridisering løsning: Laks sperm DNA </td><td> Fluka / Sigma </td><td> 31149-106GF </td><td> 0.4g Roche blokkerer reagens 1 ml av 10 mg per ml laksesperm DNA (kritisk: denaturerer laks spermDNA ved 96 ° C i 5 min før tilsetning til hybridiseringsreaksjonen løsning) </td></tr><tr><td> Hybridizer ThermoStar 100 HC4 </td><td> Quantifoil Instruments GmbH </td><td> 1004-0011 </td><td> Kan erstattes av hybridisering ovn og RNase gratis hybridisering kamre polstret med DEPC vann. </td></tr><tr><td> Immersjonsolje UV gjennomsiktig fluorescens gratis </td><td> Sigma </td><td> 10976-1EA </td><td></td></tr><tr><td> Immunfluorescens eller confocal mikroskop </td><td> Nikon D-Eclipse TE2000C </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Neglelakk </td><td> Tilgjengelig i alle apotek </td><td></td><td></td></tr><tr><td> PBS 20x: NaCl KCl Na 2 HPO 4 x 2H 2 O KH 2 PO 4 DEPC avionisert H 2 O </td><td></td><td></td><td> Ajust pH til 7,4 160 g 4 g 23 g 4 g 1 l </td></tr><tr><td> Paraformaldehyd 4% </td><td> Fluka / chemika </td><td> 76240 </td><td> 4 g PFA i 80 ml PBS / DEPC. Varm opp til 65 ° C til PFA oppløses. Tilsett 20 ml PBS, la oppløsningen avkjøles. Juster pH-verdien til 7,4. Filtrere. Oppbevares i alikvoter ved -20 ° C. </td></tr><tr><td> Paraformaldehyd 4% / Acid eddiksyre 5% </td><td></td><td></td><td> 950 ul paraformaldhyde + 50 pl Eddiksyre </td></tr><tr><td> Pepsin </td><td> Sigma / Aldrich </td><td> P7000 </td><td></td></tr><tr><td> Peroksidase-konjugert anti-biotin </td><td> Calbiochem </td><td> 203206 </td><td></td></tr><tr><td> RBC-wash media: RPMI 1640 Glutamin løsning </td><td> Lonza </td><td> BE12-115F </td><td> 500 ml RPMI 1640 5 ml glutamin oppløsning </td></tr><tr><td> RBC-wash media: Gentamycin sulfate </td><td> Lonza </td><td> BE02-012E </td><td> 2,5 ml gentamycin sulfat </td></tr><tr><td> RNase </td><td> Sigma / Aldrich </td><td></td><td> Lage en 10 mg / ml stamløsning. </td></tr><tr><td> RNase fri 1,5 ml tube </td><td> Ambion </td><td> AM12450 </td><td></td></tr><tr><td> RNase Zap </td><td> Ambion </td><td> AM9780 </td><td></td></tr><tr><td> Slides 4 brønner 11mm </td><td> Thermo Scientific </td><td> MENZXER306W </td><td></td></tr><tr><td> SSC 20x: NaCl </td><td> Sigma / Aldrich </td><td> S9625 </td><td> 3 M NaCl (175 g / l) 0.3 M Na 3 citrate x H 2 O (88 g / l) Juster til pH 7,0 med 1M HCl </td></tr><tr><td> SSC 20x: Natriumsitrat dehydrate </td><td> Sigma / Aldrich </td><td> W302600 </td><td> 3 M NaCl (175 g / l) 0.3 M Na 3 citrate x H 2 O (88 g / l) Juster til pH 7,0 med 1M HCl </td></tr><tr><td> SSPE 20x: NaCl </td><td> Sigma / Aldrich </td><td> S9625 </td><td> 175,3 g NaCl </td></tr><tr><td> SSPE 20x: NaH 2 PO 4 </td><td> Sigma / Aldrich </td><td> S0751 </td><td> 27,6 g NaH 2 PO 4. </td></tr><tr><td> SSPE 20x: 4 EDTA pulver </td><td></td><td></td><td> 9,4 g EDTA pulver Legg DEPC vann, justere pH 7,4. AutoClave for 20 min </td></tr><tr><td> TNB buffer: TNT buffer </td><td></td><td></td><td> 10 ml TNT buffer </td></tr><tr><td> TNB buffer: Blokkering reagens </td><td></td><td></td><td> 0.05g Blokkering reagens Å oppløse blokkering reagens, oppvarme oppløsningen til 60 ° C i en time under omrøring. Oppbevares ved -20 ° C. (Avledet fra Perkin Elmer TSA-protokollen.) </td></tr><tr><td> TNT buffer: Tris / HCl </td><td> Sigma </td><td> T1503 </td><td> 1M Tris / HCl, pH 8,0 </td></tr><tr><td> TNT buffer: NaCl </td><td> Sigma Aldrich </td><td> S9625 </td><td> 100 ml </td></tr><tr><td> TNT buffer: Tween20 </td><td> Sigma </td><td> 93773 </td><td> 5 M NaCl 30 ml 1 ml DEPC dH 2 O869 Ml Justere pH til 7,5 ved romtemperatur. (Avledet fra Perkin Elmer TSA-protokollen.) </td></tr><tr><td> TSA pluss Cyanine3 / Fluorescein system </td><td> Perkin Elmer </td><td> NEL753000IKT </td><td> Les protokollen fra TSA Plus Fluorescence Palette System nøye før du starter eksperimentet. </td></tr><tr><td> Rør 14 ml sterilt </td><td> ALMECO - CM LAB Aps </td><td> 91016 </td><td></td></tr></tbody></table>

analysis of single-cell gene transcription by rna fluorescent in situ hybridization (fish)

Heft Plasmodium falciparum infiserte erytrocytter (IE) til humane endotelceller reseptorer under malaria infeksjoner er mediert av uttrykk for PfEMP1 protein varianter kodet av VAR gener. Den haploid P. falciparum genom havner omtrent 60 forskjellige VaR gener hvorav kun ett er antas å bli transkribert per celle om gangen under blod stadium av infeksjonen. Hvordan et slikt gjensidig utelukkende regulering av Var gentranskripsjon oppnås er uklart, er som identifisering av individuelle VAR gener eller undergrupper av Var gener assosiert med ulike reseptorer og konsekvensen av differensial binding på den kliniske utfallet av P. falciparum infeksjoner. Nylig har gjensidig utelukkende transkripsjon paradigme blitt kalt inn tvil ved transkripsjon analyser basert på individuelle P. falciparum karakterutskrift identifikasjon i ett infected erythrocytic celler ved hjelp av RNA fluorescerende in situ hybridisering (FISH) analyse av Var gentranskripsjon av parasitten i enkelte kjerner av P. falciparum IE en. Her presenterer vi en detaljert protokoll for gjennomføring av RNA-FISH metodikk for analyse av Var gentranskripsjon i single-kjerner av P. falciparum smittet humane erytrocytter. Metoden er basert på bruk av Digoxigenin-og biotin-merket antisens RNA sonder bruker TSA Plus Fluorescence Palette System 2 (Perkin Elmer), mikroskopiske analyser og ferskt valgt P. falciparum IE. In situ hybridisering metoden kan brukes til å overvåke transkripsjon og regulering av en rekke gener som skal uttrykkes under de forskjellige stadier av P. falciparum livssyklus og er tilpasningsdyktig til andre malariaparasitten arter og andre organismer og celletyper.

Figur 1 illustrerer et flytskjema av de store trinn og varigheten av RNA FISH metodikk. En rekke representative bilder av godt og dårlig bevarte farget mRNA FISK forsøk med én P. falciparum IE er vist i figur 2. Dette intracellulære protozo har en liten (1-1,5 mikrometer diameter) kjerne som er farget blå med DAPI. Fire tyve timer etter erytrocytt invasjon i P. falciparum prosessen schizogony, dvs. kjernefysisk inndeling, begy...

Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Single-cell Gene Transcription by RNA Fluorescent In Situ Hybridization FISH at JoVE.com

Analysis of Single-cell Gene Transcription by RNA Fluorescent In Situ Hybridization FISH

Fluoriserende<em&gt; In situ</em&gt; Hybridisering (FISH) til å identifisere mRNA transkripsjoner i enkeltceller tillater analyse av polygenisk aktivitet som samtidig transkripsjon av mer enn ett medlem av<em&gt; Var</em&gt; Multigene familie i<em&gt; Plasmodium falciparum</em&gt; Infiserte erytrocytter<sup&gt; 1</sup&gt;. Teknikken er tilpasningsdyktig og kan brukes på forskjellige typer gener, celler og organismer.

Analyse av encellede gentranskripsjon av RNA Fluorescent<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisering (FISH)

Adhesion of Plasmodium falciparum infected erythrocytes (IE) to human endothelial receptors during malaria infections is mediated by expression of PfEMP1 ...

Research

JoVE Journal

Biology

Analysis of Single-cell Gene Transcription by RNA Fluorescent In Situ Hybridization (FISH)

Zebrafish Whole Mount High-Resolution Double Fluorescent In Situ Hybridization

Zebrafish Whole Mount High-Resolution Double Fluorescent In Situ Hybridization

Whole mount in situ hybridization is one of the most widely used techniques in developmental biology.  Here, we present a high-resolution double ...

Fluorescence in situ hybridization (FISH) Protocol in Human Sperm

Fluorescence in situ hybridization FISH Protocol in Human Sperm

Aneuploidies are the most frequent chromosomal abnormalities in humans. Most of these abnormalities result from meiotic errors during the gametogenic ...

In vitro Transcription and Capping of Gaussia Luciferase mRNA Followed by HeLa Cell Transfection

In vitro Transcription and Capping of Gaussia Luciferase mRNA Followed by HeLa Cell Transfection

In vitro Transkripsjon og tildekking av Gaussia luciferase mRNA Etterfulgt av Jakten Cell Transfeksjon

In vitro transcription is the synthesis of RNA transcripts by RNA polymerase from a linear DNA template containing the corresponding promoter sequence ...

Radioactive in situ Hybridization for Detecting Diverse Gene Expression Patterns in Tissue

Radioactive in situ Hybridization for Detecting Diverse Gene Expression Patterns in Tissue

Radioaktivt In situ Hybridisering for å oppdage Diverse Gene Expression Mønstre i Tissue

Knowing the timing, level, cellular localization, and cell type that a gene is expressed in contributes to our understanding of the function of the gene. ...

Detection of Viral RNA by Fluorescence in situ Hybridization (FISH)

Detection of Viral RNA by Fluorescence in situ Hybridization FISH

Påvisning av virale RNA ved fluorescens<em&gt; In situ</em&gt; Hybridisering (FISH)

Viruses  that infect cells elicit specific changes to normal cell functions which serve  to divert energy and resources for viral replication. Many ...

Chromosome Replicating Timing Combined with Fluorescent In situ Hybridization

Chromosome Replicating Timing Combined with Fluorescent In situ Hybridization

Kromosom Replikere Timing Kombinert med fluoriserende<em&gt; I situ</em&gt; Hybridisering

Mammalian DNA replication initiates at multiple sites along chromosomes at different times during S phase, following a temporal replication program. The ...

Whole Mount RNA Fluorescent in situ Hybridization of Drosophila Embryos

Whole Mount RNA Fluorescent in situ Hybridization of Drosophila Embryos

Hele Mount RNA Fluorescent<em&gt; In situ</em&gt; Hybridisering av<em&gt; Drosophila</em&gt; Embryoer

Assessing  the expression pattern of a gene, as well as the subcellular localization  properties of its transcribed RNA, are key features for ...

RNA In situ Hybridization in Whole Mount Embryos and Cell Histology Adapted for Marine Elasmobranchs

RNA In situ Hybridization in Whole Mount Embryos and Cell Histology Adapted for Marine Elasmobranchs

RNA<em&gt; I situ</em&gt; Hybridisering i Whole Mount embryoer og cellehistologi Tilrettelagt for Marine Elasmobranchs

Marine  elasmobranchs are valued animal models for biomedical and genomic studies as  they are the most primitive vertebrates to have adaptive immunity ...

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Visualisering og analyse av mRNA molekyler med fluorescens<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisering i<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em

The Fluorescence in situ Hybridization (FISH) method allows one to detect nucleic acids in the native cellular environment. Here we provide a protocol for ...

Analysis of Global RNA Synthesis at the Single Cell Level following Hypoxia

Analyse av global RNA syntese på celle-nivå etter Hypoksi

Hypoxia or lowering of the oxygen availability is involved in many physiological and pathological processes. At the molecular level, cells initiate a ...