Name: analysis of single-cell gene transcription by rna fluorescent in situ hybridization (fish)
Uploaded: 2012-10-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Single-cell Gene Transcription by RNA Fluorescent In Situ Hybridization FISH at JoVE.com

Författarna vill tacka Michael Alifrangis och Ulla Abildtrup för genotypning av parasiter och Christina Holm för utmärkt tekniskt stöd. Detta arbete har finansierats av Howard Hughes Medical Institute (bidrag 55.005.511), The Lundbeck Foundation (bidrag R9-A840) och av Niels Bohr Foundation.

1. Generering av nyligen valda infekterade erytrocyter För denna analys är de bästa resultaten då nyligen utvalda odlingar för ytexpression av PfEMP1 protein. I detta speciella experiment 3D7 P. falciparum härstamning valdes med användning av specifika antikroppar som tidigare beskrivits 1. Dag 1 <ol><li> Skörd 200 pl packade blodkroppar från en P. falciparum kultur innehållande 2-5% sent stadium IE genom centrifugering vid 8...

<ol>
	<li>Joergensen, L., Bengtsson, D. C., Bengtsson, A., Ronander, E., Berger, S. S., Turner, L., Dalgaard, M. B., Cham, G. K., Victor, M. E., Lavstsen, T., Theander, T. G., Arnot, D. E., Jensen, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surface+co-expression+of+two+different+PfEMP1+antigens+on+single+Plasmodium+falciparum-infected+erythrocytes+facilitates+binding+to+ICAM1+and+PECAM1.">Surface co-expression of two different PfEMP1 antigens on single Plasmodium falciparum-infected erythrocytes facilitates binding to ICAM1 and PECAM1.</a> PLoS Pathog. 2, 1001083 (2010).</li><li>Pinaud, R., Mello, C. V., Velho, T. A., Wynne, R. D., Tremere, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+two+mRNA+species+at+single-cell+resolution+by+double-fluorescence+in+situ+hybridization.">Detection of two mRNA species at single-cell resolution by double-fluorescence in situ hybridization.</a> Nat. Protoc. 3, 1370-1379 (2008).</li><li>Cheeseborough, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> District Laboratory Practice in Tropical Countries. , (2006).</li><li>Brolin, K. J., Ribacke, U., Nilsson, S., Ankarklev, J., Moll, K., Wahlgren, M., Chen, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+transcription+of+duplicated+var2csa+gene+copies+in+individual+Plasmodium+falciparum+parasites.">Simultaneous transcription of duplicated var2csa gene copies in individual Plasmodium falciparum parasites.</a> Genome Biol. 10, R117 (2009).</li><li>Epp, C., Li, F., Howitt, C. A., Chookajorn, T., Deitsch, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromatin+associated+sense+and+antisense+noncoding+RNAs+are+transcribed+from+the+var+gene+family+of+virulence+genes+of+the+malaria+parasite+Plasmodium+falciparum.">Chromatin associated sense and antisense noncoding RNAs are transcribed from the var gene family of virulence genes of the malaria parasite Plasmodium falciparum.</a> RNA. 15, 116-127 (2009).</li><li>Freitas-Junior, L. H., Hernandez-Rivas, R., Ralph, S. A., Montiel-Condado, D., Ruvalcaba-Salazar, O. K., Rojas-Meza, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Telomeric+heterochromatin+propagation+and+histone+acetylation+control+mutually+exclusive+expression+of+antigenic+variation+genes+in+malaria+parasites.">Telomeric heterochromatin propagation and histone acetylation control mutually exclusive expression of antigenic variation genes in malaria parasites.</a> Cell. 121, 25-36 (2005).</li><li>Obernosterer, G., Martinez, J., Alenius, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Locked+nucleic+acid-based+in+situ+detection+of+microRNAs+in+mouse+tissue+sections.">Locked nucleic acid-based in situ detection of microRNAs in mouse tissue sections.</a> Nature Protoc. 2, 1508-1514 (2007).</li><li>Li, F., Sonbuchner, L., Kyes, S. A., Epp, C., Deitsch, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nuclear+non-coding+RNA+are+transcribed+from+the+centromeres+of+Plasmodium+falciparum+and+are+associated+with+centromeric+chromatin.">Nuclear non-coding RNA are transcribed from the centromeres of Plasmodium falciparum and are associated with centromeric chromatin.</a> J. Biol. Chem. 283, 5692-5698 (2008).</li><li>Thompson, J., Sinden, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+detection+of+Pbs21+mRNA+during+sexual+development+of+Plasmodium+berghei.">In situ detection of Pbs21 mRNA during sexual development of Plasmodium berghei.</a> Mol. Biochem. Parasitol. 68, 189-196 (1994).</li><li>Thompson, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+detection+of+RNA+in+blood-+and+mosquito-stage+malaria+parasites.">In situ detection of RNA in blood- and mosquito-stage malaria parasites.</a> Methods Mole Med. 72, 225-235 (2002).</li><li>Arnot, D. E., Ronander, E., Bengtsson, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+progression+of+the+intra-erythrocytic+cell+cycle+of+Plasmodium+falciparum+and+the+role+of+the+centriolar+plaques+in+asynchronous+mitotic+division+during+schizogony.">The progression of the intra-erythrocytic cell cycle of Plasmodium falciparum and the role of the centriolar plaques in asynchronous mitotic division during schizogony.</a> Int. J. Parasitol. 41, 71-80 (2011).</li><li>Osborne, C. S., Chakalova, L., Brown, K. E., Carter, D., Horton, A., Debrand, E., Goyenechea, B., Mitchell, J. A., Lopes, S., Reik, W., Fraser, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Active+genes+dynamically+colocalize+to+shared+sites+of+ongoing+transcription.">Active genes dynamically colocalize to shared sites of ongoing transcription.</a> Nat. Genet. 36, 1065-1071 (2004).</li></ol>

RNA-FISH-analys, i motsats till metoder såsom Northern blotting och RT-PCR, möjliggör diskriminering av specifika mRNA-transkript på en enda cell nivån. Detta gör det möjligt att diskriminera mellan transkriptionellt aktiva och inaktiva celler, i detta exempel, P. falciparum parasitiska protozoer inuti humana röda blodkroppar. Sådana hel-cell observationer är ofta nödvändiga och kan reda ut viktiga och nya transkriptionella mönster 1. Fastän andra RNA FISH m...

<table border="1"><tbody><tr><td> Namnet av reagenset </td><td> Företag </td><td> Katalognummer </td><td> Kommentarer </td></tr><tr><td> Ättiksyra </td><td> Sigma / Aldrich </td><td> 338.826-100ml </td><td></td></tr><tr><td> Albumax medier: RPMI 1640 Glutamin lösning </td><td> Lonza </td><td> BE12-115F </td><td> 500 ml RPMI 1640 5 ml glutamin lösning </td></tr><tr><td> Albumax medier: Gentamycin sulfat Albumax-lösning </td><td> Lonza </td><td> BE02-012E </td><td> 2,5 ml gentamycin sulfat 50 ml Albumax-lösning </td></tr><tr><td> Albumax-lösning: hypoxantin </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> H9377 </td><td> 0,8 g Hypoxantin </td></tr><tr><td> Albumax-lösning: AlbuMAX II </td><td> Jagnvitrogen </td><td> 11021-037 </td><td> 200 g Albumax </td></tr><tr><td> Albumax-lösning: RPMI 1640 </td><td> Lonza </td><td> BE12-115F </td><td> 4 liters RPMI 1640 Lös med magnet vid max. 50 ° C. Filtersterilisera och lagra vid -20 ° C i alikvoter. </td></tr><tr><td> Amberlite </td><td> Sigma </td><td> A5710-110G </td><td> Harts deionize formamid. </td></tr><tr><td> Anti-biotin get pAb peroxidaskonjugat </td><td> Calbiochem </td><td> 203.206 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-Dig-antikropp </td><td> Novus biologiska </td><td> NB100-41.330 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-fade reagens med DAPI </td><td> Invitrogen </td><td> P36931 </td><td> Monteringselementen media har att härda under 24 timmar före försegling sliden fullständigt. </td></tr><tr><td> Biotin-RNA Märkning Mix </td><td&gt; Roche </td><td> 11685597910 </td><td></td></tr><tr><td> Kamera Digital </td><td> Nikon digital syn DC-F11 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Täckglas </td><td> Menzel Glaser- </td><td> 631-1570 </td><td></td></tr><tr><td> odlingskolv 25 cm 2 Nunclon yta </td><td> Nunc </td><td> 156.340 </td><td></td></tr><tr><td> DEPC </td><td> Fluka / Sigma </td><td> 32.490-100ml </td><td> 1 ml DEPC i 1000 ml deinonized vatten. Lägg en omrörarstav och omrör under 12 timmar. Autoklav under 30 min. </td></tr><tr><td> Digitalkamera </td><td> Nikon digital syn DC-F11 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Dynabeads Protein A </td><td> Invitrogen </td><td> 10002D </td><td></td></tr><tr><td> DynaMaq-15 magnet </td><td> Invitrogen </td><td> 123-01D </td><td></td></tr><tr><td> Formamid bioultra 99% </td><td> Fluka/ Sigma </td><td> 47.671-1l-F </td><td> Avjoniserad formamid: 5 g jonbytarharts per 100 ml formamid. Rör 30 minuter. Filtrera genom Whatman-papper. </td></tr><tr><td> . Gelatin 0 75% lösning: Gelatin </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> G2500 </td><td> 3,75 g gelatin i 500 ml RPMI 1640. Värm till 56 ° C för upplösning. Filtersterilisera när 56 ° C. Förvara vid -20 ° C i alikvoter. </td></tr><tr><td> . Gelatin 0 75% lösning: RPMI 1640 </td><td> Lonza </td><td> BE12-115F </td><td> 3,75 g gelatin i 500 ml RPMI 1640. Värm till 56 ° C för upplösning. Filtersterilisera när 56 ° C. Förvara vid -20 ° C i alikvoter. </td></tr><tr><td> Glutamin lösning: L-glutamin </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> G3126 </td><td> 14,6 g L-glutamin i 500 ml 0,9% NaCl. Lös, filtrera sterilize och lagra vid -20 ° C i alikvoter. </td></tr><tr><td> Glutamin lösning: HCI </td><td> Sigma </td><td> H1758 </td><td> 14,6 g L-glutamin i 500 ml 0,9% NaCl. Lös, filtersterilisera och lagra vid -20 ° C i alikvoter. </td></tr><tr><td> Hybridiseringslösningen: Formamid Bio Ultra 99% SSC 20x </td><td> Fluka / Sigma </td><td> 47.671-1l-F </td><td> Totalt 20 ml, hålla fryst vid -20 ° C i alikvoter 10 ml avjoniserad formamid </td></tr><tr><td> Hybridiseringslösning: Denhardts 50x koncentrat </td><td> Sigma </td><td> D2532 </td><td> 5ml 20xSSC </td></tr><tr><td> Hybridiseringslösning: Jäst tRNARoche blockeringsreagens </td><td> Sigma </td><td> R-6750 </td><td> 2 ml 50x Denhardts 250 pl 20 mg per ml jäst-tRNA </td></tr><tr><td><sTrong&gt; hybridiseringslösningen: laxsperma-DNA </td><td> Fluka / Sigma </td><td> 31.149-106GF </td><td> 0,4 g Roche blockeringsreagens 1 ml av 10 mg per ml laxspermie-DNA (Kritisk: denaturerar lax spermDNA vid 96 ° C under 5 min före tillsats till hybridiseringslösningen) </td></tr><tr><td> Hybridizer THERMOstar 100 HC4 </td><td> Quantifoil Instruments GmbH </td><td> 1004-0011 </td><td> Kan ersättas genom hybridisering ugn och RNas-fritt kammare hybridiseringsbetingelser vadderade med DEPC vatten. </td></tr><tr><td> Immersionsolja UV-transparent fluorescens fri </td><td> Sigma </td><td> 10.976-1EA </td><td></td></tr><tr><td> Immunofluorescens eller konfokalmikroskop </td><td> Nikon D-Eclipse TE2000C </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Nagellack </td><td> Finns i apotek </td><td></td><td></td></tr><tr><td> PBS 20x: NaCI KCl Na 2 HPO 4 x 2H 2 O KH 2 PO 4 DEPC avjoniserat H 2 O </td><td></td><td></td><td> Ajust pH till 7,4 160 g 4 g 23 g 4 g 1 liter </td></tr><tr><td> Paraformaldehyd 4% </td><td> Fluka / Chemika </td><td> 76.240 </td><td> 4 g PFA i 80 ml PBS / DEPC. Värm till 65 ° C tills PFA löses. Tillsätt 20 ml PBS, låt lösningen svalna. Justera pH till 7,4. Filter. Lagra i alikvoter vid -20 ° C. </td></tr><tr><td> Paraformaldehyd 4% / syra ättiksyra 5% </td><td></td><td></td><td> 950 pl paraformaldhyde + 50 pl Ättiksyra </td></tr><tr><td> Pepsin </td><td> Sigma / Aldrich </td><td> P7000 </td><td></td></tr><tr><td> Peroxidas-konjugerad anti-biotin </td><td> Calbiochem </td><td> 203.206 </td><td></td></tr><tr><td> RBC-tvätt medier: RPMI 1640 Glutamin lösning </td><td> Lonza </td><td> BE12-115F </td><td> 500 ml RPMI 1640 5 ml glutamin lösning </td></tr><tr><td> RBC-tvätt medier: gentamycinsulfat </td><td> Lonza </td><td> BE02-012E </td><td> 2,5 ml gentamycin sulfat </td></tr><tr><td> RNas </td><td> Sigma / Aldrich </td><td></td><td> Gör en 10 mg / ml stamlösning. </td></tr><tr><td> RNas-fritt 1,5 ml rör </td><td> Ambion </td><td> AM12450 </td><td></td></tr><tr><td> RNas Zap </td><td> Ambion </td><td> AM9780 </td><td></td></tr><tr><td> Slides 4 brunnar 11mm </td><td> Thermo Scientific </td><td> MENZXER306W </td><td></td></tr><tr><td> SSC 20x: NaCl </td><td> Sigma / Aldrich </td><td> S9625 </td><td> 3 M NaCl (175 g / l) 0,3 M Na-citrat 3 x H 2 O (88 g / l) Justera till pH 7,0 med 1 M HCl </td></tr><tr><td> SSC 20x: Natriumcitrat torkar </td><td> Sigma / Aldrich </td><td> W302600 </td><td> 3 M NaCl (175 g / l) 0,3 M Na-citrat 3 x H 2 O (88 g / l) Justera till pH 7,0 med 1 M HCl </td></tr><tr><td> SSPE 20x: NaCl </td><td> Sigma / Aldrich </td><td> S9625 </td><td> 175,3 g NaCl </td></tr><tr><td> SSPE 20x: NaH 2 PO 4 </td><td> Sigma / Aldrich </td><td> S0751 </td><td> 27,6 g NaH 2 PO 4. </td></tr><tr><td> SSPE 20x: 4 EDTA pulver </td><td></td><td></td><td> 9,4 g EDTA pulver Lägg DEPC vatten, justera pH 7,4. Autoklöv sönder under 20 min </td></tr><tr><td> TNB buffert: TNT-buffert </td><td></td><td></td><td> 10 ml TNT-buffert </td></tr><tr><td> TNB buffert: blockeringsreagens </td><td></td><td></td><td> 0,05 g blockeringsreagens För att lösa upp den blockerande reagenset, upphettas lösningen till 60 ° C i en timme under omrörning. Förvara vid -20 ° C. (Härrörande från Perkin Elmer TSA-protokoll.) </td></tr><tr><td> TNT-buffert: Tris / HCl </td><td> Sigma </td><td> T1503 </td><td> 1 M Tris / HCl, pH 8,0 </td></tr><tr><td> TNT-buffert: NaCl </td><td> Sigma Aldrich </td><td> S9625 </td><td> 100 ml </td></tr><tr><td> TNT-buffert: Tween20 </td><td> Sigma </td><td> 93.773 </td><td> 5 M NaCl 30 ml 1 ml DEPC dH 2 O869 Ml Justera pH till 7,5 vid rumstemperatur. (Härrörande från Perkin Elmer TSA-protokoll.) </td></tr><tr><td> TSA plus Cyanine3 / Fluorescein-system </td><td> Perkin Elmer </td><td> NEL753000IKT </td><td> Läs protokollet från TSA Plus Fluorescens Palette systemet noga innan experimentet. </td></tr><tr><td> Rör 14 ml sterilt </td><td> Almeco - CM LAB Aps </td><td> 91.016 </td><td></td></tr></tbody></table>

analysis of single-cell gene transcription by rna fluorescent in situ hybridization (fish)

Vidhäftning av Plasmodium falciparum-infekterade erytrocyter (IE) till humana endotelceller receptorer under malariainfektionerna förmedlas genom uttryck av PfEMP1 proteinvarianter kodade av VAR generna. Den haploida P. falciparum genomet hyser ungefär 60 olika VAr gener av vilka endast en har tros vara transkriberas per cell vid en tidpunkt under blod skede av infektionen. Hur sådana ömsesidigt uteslutande reglering av var gentranskription uppnås är oklart, liksom att identifiera enskilda Var gener eller undergrupper av VaR gener associerade med olika receptorer och följden av differentierad bindande för kliniska utfallet av P. falciparum infektioner. Nyligen har ömsesidigt uteslutande transkription paradigm kallats in tvivel genom transkription analyser baserade på individuella P. falciparum avskrift identifiering enda infected erytrocytiska celler med användning av RNA-fluorescent in situ hybridisering (FISH) analys av var gentranskription av parasiten i enskilda kärnor av P. falciparum IE 1. Här presenterar vi ett detaljerat protokoll för att genomföra RNA-FISH metodik för analys av var gentranskription i singel-kärnor av P. falciparum infekterade humana erytrocyter. Metoden är baserad på användning av digoxigenin-och biotin-märkt antisens-RNA-prober med hjälp av TSA Plus Fluorescens Palett System 2 (Perkin Elmer), mikroskopiska analyser och nyligen valda P. falciparum IE. In situ-hybridisering metod kan användas för att övervaka transkription och reglering av ett flertal gener uttrycks under de olika stadierna av P. falciparum livscykel och kan anpassas till andra arter malariaparasiten och andra organismer och celltyper.

Figur 1 illustrerar ett flödesschema av de viktigaste stegen och tidslängden av RNA-FISH metoden. En serie representativa bilder av bra och dåligt bevarade färgade experiment mRNA fiskar med enkel P. falciparum lE visas i figur 2. Denna intracellulära protozoer har en liten (1-1,5 nm diameter) kärna, som färgas blå med DAPI. Tjugofyra timmar efter erytrocyt invasionen i P. falciparum processen schizogony, dvs kärnkraft div...

Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Single-cell Gene Transcription by RNA Fluorescent In Situ Hybridization FISH at JoVE.com

Analysis of Single-cell Gene Transcription by RNA Fluorescent In Situ Hybridization FISH

Lysrör<em&gt; In situ</em&gt; Hybridisering (FISH) för att identifiera mRNA-transkript i enskilda celler kan analysera polygenisk aktivitet såsom samtidig transkription av mer än en ledamot av<em&gt; Var</em&gt; Multigenfamilj i<em&gt; Plasmodium falciparum</em&gt; Infekterade erytrocyter<sup&gt; 1</sup&gt;. Tekniken är anpassningsbar och kan användas på olika typer av gener, celler och organismer.

Analys av encelliga gentranskription av RNA-lysrör<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisering (FISH)

Adhesion of Plasmodium falciparum infected erythrocytes (IE) to human endothelial receptors during malaria infections is mediated by expression of PfEMP1 ...

Research

JoVE Journal

Biology

Analysis of Single-cell Gene Transcription by RNA Fluorescent In Situ Hybridization (FISH)

Zebrafish Whole Mount High-Resolution Double Fluorescent In Situ Hybridization

Zebrafish Whole Mount High-Resolution Double Fluorescent In Situ Hybridization

Zebrafisk Hela Mount högupplöst Dubbel Fluorescerande In Situ Hybridisering

Whole mount in situ hybridization is one of the most widely used techniques in developmental biology.  Here, we present a high-resolution double ...

Fluorescence in situ hybridization (FISH) Protocol in Human Sperm

Fluorescence in situ hybridization FISH Protocol in Human Sperm

Fluorescens På plats Hybridisering (FISH) Protokoll i mänskliga spermier

Aneuploidies are the most frequent chromosomal abnormalities in humans. Most of these abnormalities result from meiotic errors during the gametogenic ...

In vitro Transcription and Capping of Gaussia Luciferase mRNA Followed by HeLa Cell Transfection

In vitro Transcription and Capping of Gaussia Luciferase mRNA Followed by HeLa Cell Transfection

In vitro transkription och begränsning av Gaussia Luciferas mRNA Följt av HeLa celltransfektion

In vitro transcription is the synthesis of RNA transcripts by RNA polymerase from a linear DNA template containing the corresponding promoter sequence ...

Radioactive in situ Hybridization for Detecting Diverse Gene Expression Patterns in Tissue

Radioactive in situ Hybridization for Detecting Diverse Gene Expression Patterns in Tissue

Radioaktivt In situ Hybridisering för Upptäcka Diverse Mönster genuttryck i Tissue

Knowing the timing, level, cellular localization, and cell type that a gene is expressed in contributes to our understanding of the function of the gene. ...

Detection of Viral RNA by Fluorescence in situ Hybridization (FISH)

Detection of Viral RNA by Fluorescence in situ Hybridization FISH

Detektering av viralt RNA genom Fluorescens<em&gt; In situ</em&gt; Hybridisering (FISH)

Viruses  that infect cells elicit specific changes to normal cell functions which serve  to divert energy and resources for viral replication. Many ...

Chromosome Replicating Timing Combined with Fluorescent In situ Hybridization

Chromosome Replicating Timing Combined with Fluorescent In situ Hybridization

Kromosom Replikera Timing kombination med fluorescerande<em&gt; In situ</em&gt; Hybridisering

Mammalian DNA replication initiates at multiple sites along chromosomes at different times during S phase, following a temporal replication program. The ...

Whole Mount RNA Fluorescent in situ Hybridization of Drosophila Embryos

Whole Mount RNA Fluorescent in situ Hybridization of Drosophila Embryos

Hel Mount RNA Lysrör<em&gt; In situ</em&gt; Hybridisering av<em&gt; Drosophila</em&gt; Embryon

Assessing  the expression pattern of a gene, as well as the subcellular localization  properties of its transcribed RNA, are key features for ...

RNA In situ Hybridization in Whole Mount Embryos and Cell Histology Adapted for Marine Elasmobranchs

RNA In situ Hybridization in Whole Mount Embryos and Cell Histology Adapted for Marine Elasmobranchs

RNA<em&gt; In situ</em&gt; Hybridisering i hela Mount Embryon och Cell Histologi Anpassad för marina Elasmobranchii

Marine  elasmobranchs are valued animal models for biomedical and genomic studies as  they are the most primitive vertebrates to have adaptive immunity ...

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Visualisering och analys av mRNA-molekyler användning av fluorescens<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisering i<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em

The Fluorescence in situ Hybridization (FISH) method allows one to detect nucleic acids in the native cellular environment. Here we provide a protocol for ...

Analysis of Global RNA Synthesis at the Single Cell Level following Hypoxia

Analys av global RNA syntes vid den inre cellnivå efter Hypoxi

Hypoxia or lowering of the oxygen availability is involved in many physiological and pathological processes. At the molecular level, cells initiate a ...