Name: protein misfolding cyclic amplification of prions
Uploaded: 2012-11-07T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Protein Misfolding Cyclic Amplification of Prions at JoVE.com

نود أن نشكر الدكتور نجمة المساء الحديد ماري راموس لقراءة نقدية للمخطوطة. وأيد هذا العمل من قبل المركز الوطني لبحوث الموارد (P20 RR0115635-6، C06-01 RR17417 وG20RR024001) والمعهد الوطني للاضطرابات العصبية والسكتة الدماغية (2R01 NS052609).

1. إعداد معدات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام Misonix 3000 أو 4000 Misonix sonicator (فارمنجديل، NY) متصلة حمام الحرارية Neslab الكترون EX-7 المياه (نوينغاتون، NH) للحفاظ على درجة حرارة ثابتة من 37 ° C. يصوتن العينات في 200 ميكرولتر رقيقة الجدران أنبوب PCR شرائط مع قبعات...

<ol>
	<li>Ayers, J. I., Schutt, C. R., Shikiya, R. A., Aguzzi, A., Kincaid, A. E., Bartz, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+strain-encoded+relationship+between+PrP+replication,+stability+and+processing+in+neurons+is+predictive+of+the+incubation+period+of+disease.">The strain-encoded relationship between PrP replication, stability and processing in neurons is predictive of the incubation period of disease.</a> PLoS pathogens. 7, e1001317 (2011).</li><li>Barria, M. A., Mukherjee, A., Gonzalez-Romero, D., Morales, R., Soto, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=De+novo+generation+of+infectious+prions+in+vitro+produces+a+new+disease+phenotype.">De novo generation of infectious prions in vitro produces a new disease phenotype.</a> PLoS Pathog. 5, e1000421 (2009).</li><li>Bessen, R. A., Marsh, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochemical+and+physical+properties+of+the+prion+protein+from+two+strains+of+the+transmissible+mink+encephalopathy+agent.">Biochemical and physical properties of the prion protein from two strains of the transmissible mink encephalopathy agent.</a> J. Virol. 66, 2096-2101 (1992).</li><li>Bessen, R. A., Marsh, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+PrP+properties+suggest+the+molecular+basis+of+strain+variation+in+transmissible+mink+encephalopathy.">Distinct PrP properties suggest the molecular basis of strain variation in transmissible mink encephalopathy.</a> J. Virol. 68, 7859-7868 (1994).</li><li>Bessen, R. A., Marsh, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+two+biologically+distinct+strains+of+transmissible+mink+encephalopathy+in+hamsters.">Identification of two biologically distinct strains of transmissible mink encephalopathy in hamsters.</a> J. Gen. Virol. 73, 329-334 (1992).</li><li>Castilla, J., Gonzalez-Romero, D., Saa, P., Morales, R., De Castro, J., Soto, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crossing+the+species+barrier+by+PrP(Sc)+replication+in+vitro+generates+unique+infectious+prions.">Crossing the species barrier by PrP(Sc) replication in vitro generates unique infectious prions.</a> Cell. 134, 757-768 (2008).</li><li>Castilla, J., Morales, R., Saa, P., Barria, M., Gambetti, P., Soto, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-free+propagation+of+prion+strains.">Cell-free propagation of prion strains.</a> EMBO J. 27, 2557-2566 (2008).</li><li>Caughey, B., Raymond, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+scrapie-associated+form+of+PrP+is+made+from+a+cell+surface+precursor+that+is+both+protease-+and+phospholipase-sensitive.">The scrapie-associated form of PrP is made from a cell surface precursor that is both protease- and phospholipase-sensitive.</a> J. Biol. Chem. 266, 18217-18223 (1991).</li><li>Deleault, N. R., Harris, B. T., Rees, J. R., Supattapone, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+native+prions+from+minimal+components+in+vitro.">Formation of native prions from minimal components in vitro.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104, 9741-9746 (2007).</li><li>Dickinson, A. G., Fraser, H., Meikle, V. M., Outram, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Competition+between+different+scrapie+agents+in+mice.">Competition between different scrapie agents in mice.</a> Nat. New Biol. 237, 244-245 (1972).</li><li>Gonzalez-Romero, D., Barria, M. A., Leon, P., Morales, R., Soto, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+infectious+prions+in+urine.">Detection of infectious prions in urine.</a> FEBS Lett. 582, 3161-3166 (2008).</li><li>Green, K. M., Castilla, J., Seward, T. S., Napier, D. L., Jewell, J. E., Soto, C., Telling, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+high+fidelity+prion+amplification+within+and+across+prion+species+barriers.">Accelerated high fidelity prion amplification within and across prion species barriers.</a> PLoS Pathog. 4, e1000139 (2008).</li><li>Hadlow, W. J., Race, R. E., Kennedy, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+distribution+of+transmissible+mink+encephalopathy+virus+in+mink+inoculated+subcutaneously.">Temporal distribution of transmissible mink encephalopathy virus in mink inoculated subcutaneously.</a> J. Virol. 61, 3235-3240 (1987).</li><li>Kocisko, D. A., Come, J. H., Priola, S. A., Chesebro, B., Raymond, G. J., Lansbury, P. T., Caughey, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-free+formation+of+protease-resistant+prion+protein.">Cell-free formation of protease-resistant prion protein.</a> Nature. 370, 471-474 (1994).</li><li>Kurt, T. D., Telling, G. C., Zabel, M. D., Hoover, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trans-species+amplification+of+PrP(CWD)+and+correlation+with+rigid+loop+170N.">Trans-species amplification of PrP(CWD) and correlation with rigid loop 170N.</a> Virology. 387, 3235-3240 (2009).</li><li>Maddison, B. C., Baker, C. A., Terry, L. A., Bellworthy, S. J., Thorne, L., Rees, H. C., Gough, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Environmental+sources+of+scrapie+prions.">Environmental sources of scrapie prions.</a> J. Virol. 84, 11560-11562 (2010).</li><li>Nichols, T. A., Pulford, B., Wyckoff, A. C., Meyerett, C., Michel, B., Gertig, K., Hoover, E. A., Jewell, J. E., Telling, G. C., Zabel, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+protease-resistant+cervid+prion+protein+in+water+from+a+CWD-endemic+area.">Detection of protease-resistant cervid prion protein in water from a CWD-endemic area.</a> Prion. 3, 171-183 (2009).</li><li>Prusiner, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+proteinaceous+infectious+particles+cause+scrapie.">Novel proteinaceous infectious particles cause scrapie.</a> Science. 216, 136-144 (1982).</li><li>Saborio, G. P., Permanne, B., Soto, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitive+detection+of+pathological+prion+protein+by+cyclic+amplification+of+protein+misfolding.">Sensitive detection of pathological prion protein by cyclic amplification of protein misfolding.</a> Nature. 411, 810-813 (2001).</li><li>Saunders, S. E., Bartz, J. C., Vercauteren, K. C., Bartelt-Hunt, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+enzymatic+treatment+of+soil-bound+prions+effectively+inhibits+replication.">An enzymatic treatment of soil-bound prions effectively inhibits replication.</a> Appl. Environ. Microbiol. 77, 4313-4317 (2011).</li><li>Saunders, S. E., Shikiya, R. A., Langenfeld, K., Bartelt-Hunt, S. L., Bartz, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Replication+efficiency+of+soil-bound+prions+varies+with+soil+type.">Replication efficiency of soil-bound prions varies with soil type.</a> Journal of virology. , (2011).</li><li>Schutt, C. R., Bartz, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prion+interference+with+multiple+prion+isolates.">Prion interference with multiple prion isolates.</a> Prion. 2, 61-63 (2008).</li><li>Shikiya, R. A., Ayers, J. I., Schutt, C. R., Kincaid, A. E., Bartz, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-infecting+prion+strains+compete+for+a+limiting+cellular+resource.">Co-infecting prion strains compete for a limiting cellular resource.</a> Journal of. 84, 5706-5714 (2010).</li><li>Shikiya, R. A., Bartz, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+generation+of+high+titer+prions.">In vitro generation of high titer prions.</a> Journal of virology. , (2011).</li><li>Weber, P., Giese, A., Piening, N., Mitteregger, G., Thomzig, A., Beekes, M., Kretzschmar, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+genuine+prion+infectivity+by+serial+PMCA.">Generation of genuine prion infectivity by serial PMCA.</a> Veterinary microbiology. 123, 346-357 (2007).</li></ol>

تحديات تضخيم بروتينات بريون المعدية هي فترات حضانة طويلة ونفقات في التجارب المجراة. هذه التقنية هي وسيلة PMCA فعالة من حيث التكلفة لتضخيم وكلاء بريون المعدية. وقد أكدت عدة مختبرات قدرة PMCA بدقة لتضخيم سلالات بريون في المختبر 7، 9، 12، 14، 19،24. <p class="jov...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> كاشف / معدات </td><td> الصانع </td><td> القط. عدد </td></tr><tr><td> Misonix 3000 </td><td> Misonix </td><td> S-3000 </td></tr><tr><td> Misonix 4000 </td><td> Misonix </td><td> S-4000 </td></tr><tr><td> Tenbroeck الأنسجة المطحنة </td><td> Kontes </td><td> 885000-0007 </td></tr><tr><td> Neslab حمام EX-7 المياه </td><td> الحرارية الكترون </td><td> Neslab EX-7 </td></tr><tr><td> 0،2 أنبوب PCR شرائط مل </td><td> الحرارية العلمية </td><td> AB-0451 </td></tr><tr><td> تريتون X-100 </td><td> سيغما الدريتش </td><td> T9284-100ML </td></tr><tr><td> البروتياز المانع كاملة </td><td> روش </td><td> 11 697 498 001 </td></tr><tr><td> EDTA </td><td> JT بيكر </td><td> 4040-00 </td></tr><tr><td> DPBS </td><td> مالينكرودت بيكر Mediatech </td><td> 21-031-CV </td></tr><tr><td> الحفاضات مختبر فيرسي الجافة </td><td> فيشر العلمية </td><td> 14 206 28 </td></tr><tr><td> Repti ثيرم سخان </td><td> حديقة الحيوان ميد المختبرات، وشركة </td><td> RH-4 </td></tr></tbody></table>

protein misfolding cyclic amplification of prions

البريونات هي العوامل المعدية التي تسبب الوفاة حتما انتقال مرض جنون (TSE) في الحيوانات والبشر 9،18. من بروتين بريون اثنين من الأشكال الإسوية متميزة، وغير المعدية المضيف ترميز البروتين (بي ار بي C) والبروتين المعدية (بي ار بي SC)، وهو شكل الإسوي بشكل غير طبيعي مطوية من C بي ار بي 8. واحدة من التحديات التي تواجه العمل مع وكلاء بريون هي فترة حضانة طويلة قبل وضع العلامات السريرية بعد التلقيح المضيف 13. هذا تكليف تقليديا طويلة ومكلفة الدراسات الأحيائي الحيواني. وعلاوة على ذلك، تتميز سيئة خصائص البيوكيميائية والفيزيائية الحيوية للبرأسية بي ار بي بسبب التشكل غير عادية والدول التجميع. بي ار بي برأسية البذور يمكن تحويل C بي ار بي بي ار بي إلى اتفاقية استكهولم في المختبر 14. PMCA هو أسلوب المختبر في أن يأخذ أدفاntage من هذه القدرة باستخدام صوتنة والحضانة دورات لإنتاج كميات كبيرة من بي ار بي برأسية، بمعدل متسارع، من نظام التي تحتوي على كميات الزائدة من بي ار بي C وكميات ضئيلة من البذور برأسية بي ار بي 19. وقد ثبت أن ألخص هذه التقنية بشكل فعال خصوصية الأنواع وسلالة من بي ار بي برأسية التحويل من C بي ار بي، لمحاكاة التدخل سلالة بريون، وتضخيم مستويات منخفضة جدا من بي ار بي برأسية من الأنسجة المصابة، والسوائل، والعينات البيئية 6،7،16، 23. هذه الورقة تفاصيل البروتوكول PMCA، بما في ذلك توصيات للتقليل من التلوث، وتوليد نتائج متسقة، وقياس تلك النتائج. نناقش أيضا العديد من التطبيقات PMCA، بما في ذلك الجيل وتوصيف سلالات بريون المعدية، بريون تدخل السلالة، وكشف عن البريونات في البيئة.

ويستخدم البروتين التضخيم دوري misfolding (PMCA) لتضخيم بي ار بي برأسية في المختبر 7 و 12 و 14 و 19 و 24. ويرد ناجحة التضخيم برأسية بي ار بي زيادة في كثافة الفرقة على البقع الغربية من بروتين بريون PK-مقاومة (المهاجرة ما بين 19 و 30 كيلو دالتون لسلالات الهامستر بري?...

Watch this Scientific Journal Video about Protein Misfolding Cyclic Amplification of Prions at JoVE.com

Protein Misfolding Cyclic Amplification of Prions

التضخيم البروتين دوري misfolding (PMCA) هو فحص المختبر في لدراسة تحويل بريون والحواجز سلالة والأنواع. ويمكن أيضا أن تستخدم لفحص الكشف عن بريون.

تضخيم بروتين دوري Misfolding من البريونات

Prions  are infectious agents that cause the inevitably fatal transmissible spongiform  encephalopathy (TSE) in animals and humans9,18. The prion protein ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Comparative Approach to Characterize the Landscape of Host-Pathogen Protein-Protein Interactions

A المنهج المقارن لتوصيف المشهد من المضيف الممرض البروتين البروتين التفاعلات

Significant efforts were gathered to generate  large-scale comprehensive protein-protein interaction network maps. This is  instrumental to understand the ...

Procedures for Identifying Infectious Prions After Passage Through the Digestive System of an Avian Species

إجراءات لتحديد المعدية البريونات بعد المرور عبر الجهاز الهضمي لأنواع الطيور

Infectious prion (PrPRes) material is likely the cause of fatal, neurodegenerative transmissible spongiform encephalopathy (TSE) diseases1. Transmission ...

Demonstrating a Multi-drug Resistant Mycobacterium tuberculosis Amplification Microarray

Demonstrating a Multi-drug Resistant Mycobacterium tuberculosis Amplification Microarray

مما يدل على متعدد المخدرات مقاومة<em&gt; السل المتفطرة</em&gt; التضخيم ميكروأري

Simplifying microarray workflow is a necessary first step for creating MDR-TB microarray-based diagnostics that can be routinely used in lower-resource ...

Loop-mediated Isothermal Amplification (LAMP) Assays for the Species-specific Detection of Eimeria that Infect Chickens

Loop-mediated Isothermal Amplification LAMP Assays for the Species-specific Detection of Eimeria that Infect Chickens

متساوي التضخيم (LAMP) فحوصات بوساطة حلقة للكشف عن أنواع محددة من<em&gt; الأيمرية</em&gt; التي تصيب الدجاج

Eimeria species parasites, protozoa which cause the enteric disease coccidiosis, pose a serious threat to the production and welfare of chickens. In the ...

The Development of Lyophilized Loop-mediated Isothermal Amplification Reagents for the Detection of Coxiella burnetii

The Development of Lyophilized Loop-mediated Isothermal Amplification Reagents for the Detection of Coxiella burnetii

تطوير بوساطة حلقة-المجففة بالتبريد متساوي التضخيم الكواشف للكشف عن<em&gt; الكوكسيلا البورنيتية</em

Coxiella burnetii, the agent causing Q fever, is an obligate intracellular bacterium. PCR based diagnostic assays have been developed for detecting C. ...

Real-time Quaking-induced Conversion Assay for Detection of CWD Prions in Fecal Material

في الوقت الحقيقي مهتز الناجمة عن تحويل الفحص للكشف عن البريونات CWD في المواد البرازية

The RT-QuIC technique is a sensitive in vitro cell-free prion amplification assay based mainly on the seeded misfolding and aggregation of recombinant ...

Building Up a High-throughput Screening Platform to Assess the Heterogeneity of HER2 Gene Amplification in Breast Cancers

بناء منصة فرز الفائق لتقييم عدم تجانس التضخيم الجين HER2 في سرطان الثدي

Targeted therapies against the human epidermal growth factor receptor 2 (HER2) have radically changed the outcome of patients with HER2-positive breast ...

Dissecting Multi-protein Signaling Complexes by Bimolecular Complementation Affinity Purification (BiCAP)

Dissecting Multi-protein Signaling Complexes by Bimolecular Complementation Affinity Purification BiCAP

تشريح مجمعات البروتين متعدد الإشارات بالتكامل Bimolecular انجذاب تطهير (بيكاب)

The assembly of protein complexes is a central mechanism underlying the regulation of many cell signaling pathways. A major focus of biomedical research ...

Automated Behavioral Analysis of Large C. elegans Populations Using a Wide Field-of-view Tracking Platform

Automated Behavioral Analysis of Large C. elegans Populations Using a Wide Field-of-view Tracking Platform

الآلي التحليل السلوكي لكبير C. ايليجانس السكان استخدام واسعة مجال-من-عرض "تتبع النظام الأساسي"

Caenorhabditis elegans is a well-established animal model in biomedical research, widely employed in functional genomics and ageing studies. To assess the ...

Generation, Amplification, and Titration of Recombinant Respiratory Syncytial Viruses

جيل، والتضخيم، ومعايرة المؤتلف من فيروسات الجهاز التنفسي المخلوي

The use of recombinant viruses has become crucial in basic or applied virology. Reverse genetics has been proven to be an extremely powerful technology, ...