Name: assessing replication and beta cell function in adenovirally-transduced isolated rodent islets
Uploaded: 2012-06-25T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessing Replication and Beta Cell Function in Adenovirally-transduced Isolated Rodent Islets at JoVE.com

وأيد هذا العمل من قبل منحة DK078732 من المعاهد الوطنية للصحة (لPTF).

1. الفيروسة الغدانية تنبيغ والتثقيف من الجزر الجرذ <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد 6-جيدا لوحة ثقافة غير الأنسجة المغلفة بإضافة 2 مل من وسائل الاعلام (RPMI 1640 وسائل الإعلام التي تحتوي على نسبة الجلوكوز في 8 مم، 10٪ مصل بقري جنيني، والوحدات 50 / البنسل...

<ol>
	<li>Ferrannini, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=beta-Cell+function+in+subjects+spanning+the+range+from+normal+glucose+tolerance+to+overt+diabetes:+a+new+analysis.">beta-Cell function in subjects spanning the range from normal glucose tolerance to overt diabetes: a new analysis.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 90, 493-500 (2005).</li><li>Weyer, C., Bogardus, C., Mott, D. M., Pratley, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+natural+history+of+insulin+secretory+dysfunction+and+insulin+resistance+in+the+pathogenesis+of+type+2+diabetes+mellitus.">The natural history of insulin secretory dysfunction and insulin resistance in the pathogenesis of type 2 diabetes mellitus.</a> J. Clin. Invest. 104, 787-794 (1999).</li><li>Keenan, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Residual+insulin+production+and+pancreatic+ss-cell+turnover+after+50+years+of+diabetes:+Joslin+Medalist+Study.">Residual insulin production and pancreatic ss-cell turnover after 50 years of diabetes: Joslin Medalist Study.</a> Diabetes. 59, 2846-2853 (2010).</li><li>Bain, J. R., Schisler, J. C., Takeuchi, K., Newgard, C. B., Becker, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+adenovirus+vector+for+efficient+RNA+interference-mediated+suppression+of+target+genes+in+insulinoma+cells+and+pancreatic+islets+of+langerhans.">An adenovirus vector for efficient RNA interference-mediated suppression of target genes in insulinoma cells and pancreatic islets of langerhans.</a> Diabetes. 53, 2190-2194 (2004).</li><li>Fueger, P. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trefoil+factor+3+stimulates+human+and+rodent+pancreatic+islet+beta-cell+replication+with+retention+of+function.">Trefoil factor 3 stimulates human and rodent pancreatic islet beta-cell replication with retention of function.</a> Mol. Endocrinol. 22, 1251-1259 (2008).</li><li>Schisler, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stimulation+of+human+and+rat+islet+beta-cell+proliferation+with+retention+of+function+by+the+homeodomain+transcription+factor+Nkx6.1.">Stimulation of human and rat islet beta-cell proliferation with retention of function by the homeodomain transcription factor Nkx6.1.</a> Mol. Cell Biol. 28, 3465-3476 (2008).</li><li>Chan, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overexpression+of+uncoupling+protein+2+inhibits+glucose-stimulated+insulin+secretion+from+rat+islets.">Overexpression of uncoupling protein 2 inhibits glucose-stimulated insulin secretion from rat islets.</a> Diabetes. 48, 1482-1486 (1999).</li><li>Cozar-Castellano, I., Takane, K. K., Bottino, R., Balamurugan, A. N., Stewart, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+beta-cell+proliferation+and+retinoblastoma+protein+phosphorylation+in+rat+and+human+islets+using+adenovirus-mediated+transfer+of+cyclin-dependent+kinase-4+and+cyclin+D1.">Induction of beta-cell proliferation and retinoblastoma protein phosphorylation in rat and human islets using adenovirus-mediated transfer of cyclin-dependent kinase-4 and cyclin D1.</a> Diabetes. 53, 149-159 (2004).</li><li>Icyuz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adenovirus+infection+activates+akt1+and+induces+cell+proliferation+in+pancreatic+islets1.">Adenovirus infection activates akt1 and induces cell proliferation in pancreatic islets1.</a> Transplantation. 87, 821-824 (2009).</li><li>Kaneto, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+the+hexosamine+pathway+leads+to+deterioration+of+pancreatic+beta-cell+function+through+the+induction+of+oxidative+stress.">Activation of the hexosamine pathway leads to deterioration of pancreatic beta-cell function through the induction of oxidative stress.</a> J. Biol. Chem. 276, 31099-31104 (2001).</li><li>Antinozzi, P. A., Berman, H. K., O'Doherty, R. M., Newgard, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+engineering+with+recombinant+adenoviruses.">Metabolic engineering with recombinant adenoviruses.</a> Annu. Rev. Nutr. 19, 511-544 (1999).</li><li>Newgard, C. B., Becker, T. C., Berman, H. K., O'Doherty, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+overexpressed+hexokinases+in+liver+and+islet+cells.">Regulation of overexpressed hexokinases in liver and islet cells.</a> Biochem. Soc. Trans. 25, 118-122 (1997).</li><li>Becker, T. C., BeltrandelRio, H., Noel, R. J., Johnson, J. H., Newgard, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overexpression+of+hexokinase+I+in+isolated+islets+of+Langerhans+via+recombinant+adenovirus.+Enhancement+of+glucose+metabolism+and+insulin+secretion+at+basal+but+not+stimulatory+glucose+levels.">Overexpression of hexokinase I in isolated islets of Langerhans via recombinant adenovirus. Enhancement of glucose metabolism and insulin secretion at basal but not stimulatory glucose levels.</a> J. Biol. Chem. 269, 21234-21238 (1994).</li><li>Csete, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adenoviral-mediated+gene+transfer+to+pancreatic+islets+does+not+alter+islet+function.">Adenoviral-mediated gene transfer to pancreatic islets does not alter islet function.</a> Transplant Proc. 26, 756-757 (1994).</li><li>Csete, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+gene+transfer+to+pancreatic+islets+mediated+by+adenoviral+vectors.">Efficient gene transfer to pancreatic islets mediated by adenoviral vectors.</a> Transplantation. 59, 263-268 (1995).</li><li>Meng, Z. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+liver+X+receptors+inhibits+pancreatic+islet+beta+cell+proliferation+through+cell+cycle+arrest.">Activation of liver X receptors inhibits pancreatic islet beta cell proliferation through cell cycle arrest.</a> Diabetologia. 52, 125-135 (2009).</li><li>Ronnebaum, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+pyruvate+cycling+pathway+involving+cytosolic+NADP-dependent+isocitrate+dehydrogenase+regulates+glucose-stimulated+insulin+secretion.">A pyruvate cycling pathway involving cytosolic NADP-dependent isocitrate dehydrogenase regulates glucose-stimulated insulin secretion.</a> J. Biol. Chem. , (2006).</li><li>Milburn, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pancreatic+beta-cells+in+obesity.+Evidence+for+induction+of+functional,+morphologic,+and+metabolic+abnormalities+by+increased+long+chain+fatty+acids.">Pancreatic beta-cells in obesity. Evidence for induction of functional, morphologic, and metabolic abnormalities by increased long chain fatty acids.</a> J. Biol. Chem. 270, 1295-1299 (1995).</li><li>Szot, G., Koudria, P., Bluestone, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+Pancreatic+Islet+Isolation.">Murine Pancreatic Islet Isolation.</a> J. Vis. Exp. (7), e255 (2007).</li></ol>

تأسيس مسارات التي يمكن أن تكون منظم لحفز تكرار وتعزيز وظيفة خلايا بيتا ذات الصلة على حد سواء الأشكال الرئيسية لداء السكري. لأن كتلة خلايا بيتا وظيفي يعتمد على وجود وظيفة الانسولين إفراز الخلايا، وتقييم هذه المحددات لديها في وقت واحد مزاياه. هذا البروتوكول يصف بروتوك...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> RPMI 1640 وسائل الاعلام </td><td> Gibco </td><td> 11879 </td><td></td></tr><tr><td> البنسلين / الستربتومايسين </td><td> Gibco </td><td> 15140 </td><td></td></tr><tr><td> 6 كذلك لوحة </td><td> BD-الصقر </td><td> 35-1146 </td><td> غير TC المعالجة </td></tr><tr><td> [الميثيل-3 H]-ثيميدين </td><td> بيركن إلمر </td><td> NET027Z001MC </td><td> 1 زارة التجارة والصناعة / مل </td></tr><tr><td> الدقيقة أنابيب الطرد المركزي </td><td> Denville </td><td> C2170 </td><td> 1.7 مل </td></tr><tr><td> كلوريد الصوديوم </td><td> سيغما </td><td> 59888 </td><td></td></tr><tr><td> بوكل </td><td> Acros </td><td> 42409 </td><td></td></tr><tr><td> KH 2 &lt;/ الفرعي&gt; PO 4 </td><td> Acros </td><td> 20592 </td><td></td></tr><tr><td> MgSO 4 </td><td> Acros </td><td> 41348 </td><td></td></tr><tr><td> CaCl 2 </td><td> Acros </td><td> 34961 </td><td></td></tr><tr><td> HEPES </td><td> سيغما </td><td> H0887 </td><td> 1 م حل </td></tr><tr><td> جيش صرب البوسنة 35٪ </td><td> سيغما </td><td> A7979 </td><td></td></tr><tr><td> NaHCO 3 </td><td> Acros </td><td> 42427 </td><td></td></tr><tr><td> D-جلوكوز </td><td> سيغما </td><td> G8769 </td><td></td></tr><tr><td> TCA </td><td> فيشر العلمية </td><td> SA9410-1 </td><td> 10٪ وزن / </td></tr><tr><td> هيدروكسيد الصوديوم </td><td> Acros </td><td> 12426 </td><td></td></tr><tr><td> التلألؤ عد أنبوب </td><td> Sarstedt </td><td> 58،536 </td><td> 7 مل، PP </td&gt; </tr><tr><td> قبعة التلألؤ أنبوب عد </td><td> Sarstedt </td><td> 65،816 </td><td></td></tr><tr><td> ECONO-الآمن كوكتيل عد </td><td> RPI </td><td> 111175 </td><td></td></tr><tr><td> الانسولين ريا </td><td> شركة سيمنز </td><td> TKIN2 </td><td></td></tr><tr><td> BCA الفحص كيت </td><td> الحرارية العلمية </td><td> 23250 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> معدات </td></tr><tr><td> نبذ </td><td> إيبندورف </td><td> 5415R </td><td></td></tr><tr><td> التلألؤ عد رف أنبوب </td><td> Sarstedt </td><td> 93.1431.001 </td><td></td></tr><tr><td> السائلة التلألؤ عداد </td><td> بيركن إلمر </td><td> ثلاثي كارب 2910TR </td><td></td></tr></tbody></table>

assessing replication and beta cell function in adenovirally-transduced isolated rodent islets

ويتم التحكم في المقام الأول توازن الجلوكوز من قبل الغدد الصماء هرمونات الانسولين والجلوكاجون، يفرز من خلايا بيتا في البنكرياس، وألفا، على التوالي. يتم تحديد وظيفي كتلة خلايا بيتا بيتا من كتلة الخلية التشريحية، فضلا عن قدرة خلايا بيتا للرد على حمل المغذيات. وفقدان وظيفي بيتا كتلة الخلية المركزية على كل من الأشكال الرئيسية لداء السكري 1-3. في حين تراجع وظيفي النتائج بيتا كتلة الخلية من هجوم المناعة الذاتية في مرض السكري نوع 1، في مرض السكري من النوع 2، وهذا النقصان يطور من عدم القدرة على حد سواء من خلايا بيتا لإفراز الإنسولين بشكل مناسب، وتدمير خلايا بيتا من كادر من الآليات. وبالتالي، الجهود المبذولة لاستعادة وظيفي كتلة خلايا بيتا لها أهمية قصوى لتحسين معاملة وعلاج محتمل لمرض السكري. هناك جهود جارية لتحديد المسارات الجزيئية التي يمكن استغلالها لتحفيز تكرار وتعزيز وظيفة خلايا بيتا.من الناحية المثالية، فإن الأهداف العلاجية تحسين كل من نمو خلايا بيتا ووظيفتها. ربما أكثر أهمية على الرغم من ذلك هو تحديد ما إذا كانت الاستراتيجية التي تحفز نمو خلايا بيتا يأتي على حساب إضعاف وظيفة خلايا بيتا (مثل مع بعض الجينات المسرطنة)، والعكس بالعكس. بواسطة التعبير قمع منهجي أو overexpressing من الجينات المستهدفة في الجزر الفئران المعزولة، يمكن للمرء تحديد الأهداف العلاجية المحتملة لزيادة وظيفية بيتا كتلة الخلية 4-6. ويمكن استخدام ناقلات الفيروسة الغدانية للبروتينات overexpress بكفاءة أو ضربة قاضية في الجزر الفئران المعزولة 4،7-15. هنا، نقدم طريقة للتلاعب الجيني باستخدام تنبيغ الفيروسة الغدانية وتقييم تكرار جزيرة وظيفة خلايا بيتا في جزر الفئران المعزولة (الشكل 1). وقد استخدمت هذه الطريقة سابقا لتحديد أهداف جديدة أن تعدل بيتا تكرار خلية أو وظيفة 5،6،8،9،16،17.

Watch this Scientific Journal Video about Assessing Replication and Beta Cell Function in Adenovirally-transduced Isolated Rodent Islets at JoVE.com

Assessing Replication and Beta Cell Function in Adenovirally-transduced Isolated Rodent Islets

هذا البروتوكول يسمح احد لتحديد العوامل التي تعدل وظيفي كتلة خلايا بيتا للعثور على الأهداف العلاجية المحتملة لعلاج مرض السكري. بروتوكول يتكون من طريقة مبسطة لتقييم تكرار جزيرة وظيفة خلايا بيتا في جزر معزولة في اعقاب الفئران التلاعب في الجينات مع الفيروسات الغدية.

الفشوت القوارض تقييم النسخ المتماثل وظيفة خلايا بيتا في Adenovirally-transduced المعزولة

Glucose homeostasis is primarily controlled by the endocrine hormones insulin and glucagon, secreted from the pancreatic beta and alpha cells, ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Assessment of Cardiac Function and Energetics in Isolated Mouse Hearts Using 31P NMR Spectroscopy

Assessment of Cardiac Function and Energetics in Isolated Mouse Hearts Using 31P NMR Spectroscopy

تقييم وظيفة القلب وعلم الطاقة في قلوب معزولة عن طريق الماوس 31 P الرنين المغناطيسي الطيفي

Bioengineered mouse models have become powerful research tools in determining causal relationships between molecular alterations and models of ...

Assessing Endothelial Vasodilator Function with the Endo-PAT 2000

تقييم وظيفة غشائي عائي مع إندو 2000 - PAT

The endothelium is a delicate monolayer of cells that lines all blood vessels, and which comprises the systemic and lymphatic capillaries. By virtue of ...

Myo-mechanical Analysis of Isolated Skeletal Muscle

ميو الميكانيكية وتحليل الهيكل العظمي والعضلات المعزولة

To assess the in vivo effects of therapeutic interventions for the treatment of muscle disease 1,2,3, quantitative methods are needed that measure force ...

Isolation of Human Islets from Partially Pancreatectomized Patients

عزلة الإنسان الفشوت من المرضى مستأصل البنكرياس جزئيا

Investigations into the pathogenesis of type 2 diabetes and islets of Langerhans malfunction 1 have been hampered by the limited availability of type 2 ...

Assessing Teratogenic Changes in a Zebrafish Model of Fetal Alcohol Exposure

تقييم التغييرات المشوهة في نموذج الزرد من التعرض الكحول الجنينية

Fetal alcohol syndrome (FAS) is a severe manifestation of embryonic exposure to ethanol. It presents with characteristic defects to the face and organs, ...

Staining Protocols for Human Pancreatic Islets

تلطيخ بروتوكولات لجزر البنكرياس الإنسان

Estimates of islet area and numbers and endocrine cell composition in the adult human pancreas vary from several hundred thousand to several million and ...

Leprdb Mouse Model of Type 2 Diabetes: Pancreatic Islet Isolation and Live-cell 2-Photon Imaging Of Intact Islets

Leprdb Mouse Model of Type 2 Diabetes: Pancreatic Islet Isolation and Live-cell 2-Photon Imaging Of Intact Islets

Lepr<sup&gt; ديسيبل</sup&gt; نموذج الفأر من النوع 2 من مرض السكري: البنكرياس عزل جزيرة وتعيش خلية 2 فوتون التصوير من الجزر سليمة

Type 2 diabetes is a chronic disease affecting 382 million people in 2013, and is expected to rise to 592 million by 2035 1. During the past 2 decades, ...

A High-content In Vitro Pancreatic Islet &#946;-cell Replication Discovery Platform

A High-content In Vitro Pancreatic Islet ÃƒÅ½Ã‚Â²-cell Replication Discovery Platform

والمحتوى العالي<em&gt; في المختبر</em&gt; البنكرياس جزيرة β خلايا النسخ المتماثل منصة ديسكفري

Loss of insulin-producing &#946;-cells is a central feature of diabetes. While a variety of potential replacement therapies are being explored, expansion ...

Quantitative 3D In Silico Modeling (q3DISM) of Cerebral Amyloid-beta Phagocytosis in Rodent Models of Alzheimer's Disease

Quantitative 3D In Silico Modeling q3DISM of Cerebral Amyloid-beta Phagocytosis in Rodent Models of Alzheimer's Disease

3D الكمي<em&gt; في السيليكو</em&gt; النمذجة (q3DISM) من الدماغيه اميلويد بيتا البلعمة في نماذج القوارض من مرض الزهايمر

Neuroinflammation is now recognized as a major etiological factor in neurodegenerative disease. Mononuclear phagocytes are innate immune cells responsible ...

Nerve-sparing Mid-urethral Obstruction (NeMO) in Female Small Rodents

Nerve-sparing Mid-urethral Obstruction NeMO in Female Small Rodents

التي تقتصد في العصب منتصف الإحليلية إعاقة (نيمو) في أنثى القوارض الصغيرة

Partial bladder outlet obstruction (pBOO) has a high prevalence, causes significant patient burden, and immense health care costs. The most common animal ...