Name: assessing replication and beta cell function in adenovirally-transduced isolated rodent islets
Uploaded: 2012-06-25T13:00:00
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이 작품은 NIH (PTF까지)에서 부여 DK078732에 의해 지원되었다.

1. 쥐 Islets의 Adenoviral 형질 도입 및 Culturing <ol><li> 의 필요한 번호 미디어 2 ML (8 MM 포도당 10 % 태아 소 혈청, 50 단위 / ML 페니실린, 50 μg / ML의 스트렙토 마이신을 포함하는 RPMI 1640 미디어)를 추가하여 6 개 잘 아닌 조직 문화 코팅 플레이트를 준비 웰스. 노 바이러스 제어를위한 한 대씩, 바이러스 컨트롤 (예 : GFP-표현 아데노 바이러스)과 실험 집단 - 예를 들어, 일반적인 실험은 세 우물이 필요할 ?...

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	<li>Ferrannini, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=beta-Cell+function+in+subjects+spanning+the+range+from+normal+glucose+tolerance+to+overt+diabetes:+a+new+analysis.">beta-Cell function in subjects spanning the range from normal glucose tolerance to overt diabetes: a new analysis.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 90, 493-500 (2005).</li><li>Weyer, C., Bogardus, C., Mott, D. M., Pratley, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+natural+history+of+insulin+secretory+dysfunction+and+insulin+resistance+in+the+pathogenesis+of+type+2+diabetes+mellitus.">The natural history of insulin secretory dysfunction and insulin resistance in the pathogenesis of type 2 diabetes mellitus.</a> J. Clin. Invest. 104, 787-794 (1999).</li><li>Keenan, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Residual+insulin+production+and+pancreatic+ss-cell+turnover+after+50+years+of+diabetes:+Joslin+Medalist+Study.">Residual insulin production and pancreatic ss-cell turnover after 50 years of diabetes: Joslin Medalist Study.</a> Diabetes. 59, 2846-2853 (2010).</li><li>Bain, J. R., Schisler, J. C., Takeuchi, K., Newgard, C. B., Becker, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+adenovirus+vector+for+efficient+RNA+interference-mediated+suppression+of+target+genes+in+insulinoma+cells+and+pancreatic+islets+of+langerhans.">An adenovirus vector for efficient RNA interference-mediated suppression of target genes in insulinoma cells and pancreatic islets of langerhans.</a> Diabetes. 53, 2190-2194 (2004).</li><li>Fueger, P. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trefoil+factor+3+stimulates+human+and+rodent+pancreatic+islet+beta-cell+replication+with+retention+of+function.">Trefoil factor 3 stimulates human and rodent pancreatic islet beta-cell replication with retention of function.</a> Mol. Endocrinol. 22, 1251-1259 (2008).</li><li>Schisler, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stimulation+of+human+and+rat+islet+beta-cell+proliferation+with+retention+of+function+by+the+homeodomain+transcription+factor+Nkx6.1.">Stimulation of human and rat islet beta-cell proliferation with retention of function by the homeodomain transcription factor Nkx6.1.</a> Mol. Cell Biol. 28, 3465-3476 (2008).</li><li>Chan, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overexpression+of+uncoupling+protein+2+inhibits+glucose-stimulated+insulin+secretion+from+rat+islets.">Overexpression of uncoupling protein 2 inhibits glucose-stimulated insulin secretion from rat islets.</a> Diabetes. 48, 1482-1486 (1999).</li><li>Cozar-Castellano, I., Takane, K. K., Bottino, R., Balamurugan, A. N., Stewart, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+beta-cell+proliferation+and+retinoblastoma+protein+phosphorylation+in+rat+and+human+islets+using+adenovirus-mediated+transfer+of+cyclin-dependent+kinase-4+and+cyclin+D1.">Induction of beta-cell proliferation and retinoblastoma protein phosphorylation in rat and human islets using adenovirus-mediated transfer of cyclin-dependent kinase-4 and cyclin D1.</a> Diabetes. 53, 149-159 (2004).</li><li>Icyuz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adenovirus+infection+activates+akt1+and+induces+cell+proliferation+in+pancreatic+islets1.">Adenovirus infection activates akt1 and induces cell proliferation in pancreatic islets1.</a> Transplantation. 87, 821-824 (2009).</li><li>Kaneto, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+the+hexosamine+pathway+leads+to+deterioration+of+pancreatic+beta-cell+function+through+the+induction+of+oxidative+stress.">Activation of the hexosamine pathway leads to deterioration of pancreatic beta-cell function through the induction of oxidative stress.</a> J. Biol. Chem. 276, 31099-31104 (2001).</li><li>Antinozzi, P. A., Berman, H. K., O'Doherty, R. M., Newgard, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+engineering+with+recombinant+adenoviruses.">Metabolic engineering with recombinant adenoviruses.</a> Annu. Rev. Nutr. 19, 511-544 (1999).</li><li>Newgard, C. B., Becker, T. C., Berman, H. K., O'Doherty, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+overexpressed+hexokinases+in+liver+and+islet+cells.">Regulation of overexpressed hexokinases in liver and islet cells.</a> Biochem. Soc. Trans. 25, 118-122 (1997).</li><li>Becker, T. C., BeltrandelRio, H., Noel, R. J., Johnson, J. H., Newgard, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overexpression+of+hexokinase+I+in+isolated+islets+of+Langerhans+via+recombinant+adenovirus.+Enhancement+of+glucose+metabolism+and+insulin+secretion+at+basal+but+not+stimulatory+glucose+levels.">Overexpression of hexokinase I in isolated islets of Langerhans via recombinant adenovirus. Enhancement of glucose metabolism and insulin secretion at basal but not stimulatory glucose levels.</a> J. Biol. Chem. 269, 21234-21238 (1994).</li><li>Csete, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adenoviral-mediated+gene+transfer+to+pancreatic+islets+does+not+alter+islet+function.">Adenoviral-mediated gene transfer to pancreatic islets does not alter islet function.</a> Transplant Proc. 26, 756-757 (1994).</li><li>Csete, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+gene+transfer+to+pancreatic+islets+mediated+by+adenoviral+vectors.">Efficient gene transfer to pancreatic islets mediated by adenoviral vectors.</a> Transplantation. 59, 263-268 (1995).</li><li>Meng, Z. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+liver+X+receptors+inhibits+pancreatic+islet+beta+cell+proliferation+through+cell+cycle+arrest.">Activation of liver X receptors inhibits pancreatic islet beta cell proliferation through cell cycle arrest.</a> Diabetologia. 52, 125-135 (2009).</li><li>Ronnebaum, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+pyruvate+cycling+pathway+involving+cytosolic+NADP-dependent+isocitrate+dehydrogenase+regulates+glucose-stimulated+insulin+secretion.">A pyruvate cycling pathway involving cytosolic NADP-dependent isocitrate dehydrogenase regulates glucose-stimulated insulin secretion.</a> J. Biol. Chem. , (2006).</li><li>Milburn, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pancreatic+beta-cells+in+obesity.+Evidence+for+induction+of+functional,+morphologic,+and+metabolic+abnormalities+by+increased+long+chain+fatty+acids.">Pancreatic beta-cells in obesity. Evidence for induction of functional, morphologic, and metabolic abnormalities by increased long chain fatty acids.</a> J. Biol. Chem. 270, 1295-1299 (1995).</li><li>Szot, G., Koudria, P., Bluestone, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+Pancreatic+Islet+Isolation.">Murine Pancreatic Islet Isolation.</a> J. Vis. Exp. (7), e255 (2007).</li></ol>

복제를 자극하고 베타 세포의 기능을 향상시키기 위해 변조된 수 수립 경로는 당뇨병의 두 주요 형태와 관련이 있습니다. 기능적인 베타 세포 질량이 determinants을 평가, 인슐린 - secreting 세포의 존재와 기능에 종속되어 있기 때문에 동시에 그것의 장점이 있습니다. 이 프로토콜은 단백질의 overexpression 또는 억제 그러면 생체내에 효능에 대해 테스트할 수 체외에서 기능적인 베타 세포...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 댓글 </td></tr><tr><td> RPMI 1640 미디어 </td><td> Gibco </td><td> 11,879 </td><td></td></tr><tr><td> 페니실린 / 스트렙토 마이신 </td><td> Gibco </td><td> 15,140 </td><td></td></tr><tr><td> 6 - 잘 플레이트 </td><td> BD-팔콘 </td><td> 35-1146 </td><td> 비 TC 처리 </td></tr><tr><td> [메틸-3 H]-thymidine </td><td> Perkin 엘머 </td><td> NET027Z001MC </td><td> 한 MCI / ML </td></tr><tr><td> 마이크로 원심 분리기 튜브 </td><td> Denville </td><td> C2170 </td><td> 1.7 ML </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> 시그마 </td><td> 59,888 </td><td></td></tr><tr><td> KCl </td><td> Acros </td><td> 42,409 </td><td></td></tr><tr><td> KH 2 &lt;/ 서브&gt; PO 4 </td><td> Acros </td><td> 20,592 </td><td></td></tr><tr><td> MgSO 4 </td><td> Acros </td><td> 41,348 </td><td></td></tr><tr><td> CaCl 2 </td><td> Acros </td><td> 34,961 </td><td></td></tr><tr><td> HEPES </td><td> 시그마 </td><td> H0887 </td><td> 1 M 솔루션 </td></tr><tr><td> 35% BSA </td><td> 시그마 </td><td> A7979 </td><td></td></tr><tr><td> NaHCO 3 </td><td> Acros </td><td> 42,427 </td><td></td></tr><tr><td> D-글루코오스 </td><td> 시그마 </td><td> G8769 </td><td></td></tr><tr><td> TCA </td><td> 피셔 과학 </td><td> SA9410-1 </td><td> 10% W / V </td></tr><tr><td> NaOH </td><td> Acros </td><td> 12,426 </td><td></td></tr><tr><td> 섬광은 튜브를 센다 </td><td> Sarstedt </td><td> 58.536 </td><td> 7 ML, PP </td&gt; </tr><tr><td> 섬광 계수 튜브 캡 </td><td> Sarstedt </td><td> 65.816 </td><td></td></tr><tr><td> 이코노 - 안전 계수 칵테일 </td><td> RPI </td><td> 111,175 </td><td></td></tr><tr><td> 인슐린 RIA </td><td> 지멘스 </td><td> TKIN2 </td><td></td></tr><tr><td> BCA 분석 키트 </td><td> 써모 과학 </td><td> 23,250 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> 장비 </td></tr><tr><td> 원심 분리기 </td><td> Eppendorf </td><td> 5415R </td><td></td></tr><tr><td> 섬광은 튜브 랙을 계산 </td><td> Sarstedt </td><td> 93.1431.001 </td><td></td></tr><tr><td> 액체 섬광 계수기 </td><td> Perkin 엘머 </td><td> 트라이 수화물 2910TR </td><td></td></tr></tbody></table>

assessing replication and beta cell function in adenovirally-transduced isolated rodent islets

포도당 항상성은 주로 각각 췌장 베타와 알파 세포에서 분비 내분비 호르몬의 인슐린과 글루카곤에 의해 제어됩니다. 기능성 베타 세포 질량은 해부학 베타 세포 질량뿐만 아니라 영양 하중에 대응하는 베타 세포의 능력에 의해 결정됩니다. 기능적인 베타 세포 대량의 손실은 당뇨병 1-3의 두 주요 형태의 핵심이다. 제 1 형 당뇨병의 면역 공격의 감소 기능성 베타 세포 질량 결과 반해, 제 2 형 당뇨병에이 감소가 적절하게 인슐린을 분비하는 베타 세포의 무능력과 메커니즘의 간부로부터 베타 세포의 파괴 양쪽에서 개발하고 있습니다. 따라서 기능적인 베타 세포 질량을 복원하기위한 노력은보다 나은 치료 및 당뇨병에 대한 잠재적인 치료에 답해야합니다. 노력은 복제를 자극하고 베타 세포의 기능을 향상시키기 위해 악용될 수있는 분자 경로를 식별하는 진행되고 있습니다.이상적인 치료 목표는 베타 세포의 성장과 기능을 모두 향상시킬 것입니다. 하지만 아마도 더 중요한 베타 세포 성장을 자극 전략은 혼란 베타 세포 기능 (예 : 일부 oncogenes과 등)와 그 반대의 비용으로 오는지를 파악하는 것입니다. 고립된 쥐 islets에서 대상 유전자의 체계적 억제하거나 overexpressing 표현함으로써, 하나는 증가 기능성 베타 세포 대량 4-6에 대한 잠재적인 치료 표적을 식별할 수 있습니다. Adenoviral 벡터는 고립된 쥐 islets 4,7-15의 효율적 overexpress 또는 최저의 단백질로 근무하실 수 있습니다. 여기서는 adenoviral 형질 도입을 이용한 유전자 발현을 조작하고 고립된 쥐 islets (그림 1)의 섬 복제 및 베타 세포 기능을 평가하기위한 방법을 제시한다. 이 메소드는 베타 세포 복제 또는 기능 5,6,8,9,16,17 보죠 소설 대상을 식별하기 위해 이전에 사용되었습니다.

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Assessing Replication and Beta Cell Function in Adenovirally-transduced Isolated Rodent Islets

이 프로토콜은 하나가 당뇨병 치료를위한 잠재적인 치료 표적을 찾기 위해 기능성 베타 세포 질량을 조절 요소를 식별할 수 있습니다. 프로토콜은 adenoviruses과 유전자 발현의 조작에 따라 분리된 쥐의 islets에 섬 복제 및 베타 세포 기능을 평가하기위한 간소화된 방법으로 구성되어 있습니다.

에서 복제와 베타 세포 기능을 평가 Adenovirally-transduced 절연 쥐 Islets

Glucose homeostasis is primarily controlled by the endocrine hormones insulin and glucagon, secreted from the pancreatic beta and alpha cells, ...

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