Name: fret microscopy for real-time monitoring of signaling events in live cells using unimolecular biosensors
Uploaded: 2012-08-20T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about FRET Microscopy for Real-time Monitoring of Signaling Events in Live Cells Using Unimolecular Biosensors at JoVE.com

저자는 기술 지원을 Anke Rüttgeroth와 카리나 Zimmermann 감사드립니다. 이 작품은 독일 Forschungsgemeinschaft (폰에 부여 NI 1301/1-1)와 괴팅겐 의료 센터의 대학 (폰에 &#39;프로 futura &quot;보조금)에 의해 지원되었다.

1. 설정하면 영상 현미경을 안달 원칙적으로 연구실에서 사용할 수 있으며 카메라 포트를 가진 역 형광 현미경은 이미지를 걱정에 적응 할 수 있습니다. 현미경과 광원 또는 추가 셔터, 방출 빛과 CCD 카메라 (그림 1 참조) 빔 - 스플리터가없는 : 최종 설정은 다음과 같은 중요한 구성 요소를 포함해야합니다. 하드웨어 장치, 특히 광원, 셔터와 카메라 통합 및 이미지 ...

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	<li>Zaccolo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+chimeric+fluorescent+proteins+and+fluorescence+resonance+energy+transfer+to+monitor+cellular+responses.">Use of chimeric fluorescent proteins and fluorescence resonance energy transfer to monitor cellular responses.</a> Circ. Res. 94, 866-873 (2004).</li><li>Mehta, S., Zhang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reporting+from+the+field:+genetically+encoded+fluorescent+reporters+uncover+signaling+dynamics+in+living+biological+systems.">Reporting from the field: genetically encoded fluorescent reporters uncover signaling dynamics in living biological systems.</a> Annu. Rev. Biochem. 80, 375-401 (2011).</li><li>Zhang, J., Campbell, R. E., Ting, A. Y., Tsien, R. 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Protoc. 1, 1044-1055 (2006).</li><li>Aoki, K., Matsuda, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+small+GTPase+activity+with+fluorescence+resonance+energy+transfer-based+biosensors.">Visualization of small GTPase activity with fluorescence resonance energy transfer-based biosensors.</a> Nat. Protoc. 4, 1623-1631 (2009).</li></ol>

이 프로토콜에서, 우리는 가능한 바이오 센서의 다양한 일상 응용 프로그램에 대한 간단한 저렴한 비용으로하지만 강력한 걱정 이미징 시스템을 구축하는 방법을 보여줍니다. 여기에 제시된 시스템은 기증자 - 수용체 쌍으로 CFP와 YFP, 또는 형광 단백질의 유사한 유형을 위해 설계되었습니다. 한편, 다른 개인의 바이오 센서는 예를 들어 녹색과 적색 형광 단백질에게 14 사용하는 사용할 ?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약 / 장비의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 코멘트 </td></tr><tr><td> BES 버퍼 학년 </td><td> AppliChem </td><td> A1062 </td><td></td></tr><tr><td> CaCl 2 이수화 </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> C5010 </td><td></td></tr><tr><td> 유리 coverslides </td><td> 열 과학 </td><td> 004710781 </td><td> 직경 24mm </td></tr><tr><td> 바닥이 유리로 세포 배양 요리 </td><td> 세계 정밀 계측기 </td><td> FD3510-100 </td><td></td></tr><tr><td> D-가상 매체 </td><td> Biochrom AG </td><td> F0445 </td><td></td></tr><tr><td> 태아 송아지 혈청 (FCS) </td><td> 열 과학 </td><td> SH30073.02 </td><td></td></tr><tr><td> L-글루타민 </td><td> Biochrom AG </td><td> K0283 </td><td></td></tr><tr><td> HEPES </td><td> 시그마 </td><td> H4034 </td><td></td></tr><tr><td> KCl </td><td> 시그마 </td><td> P5405 </td><td></td></tr><tr><td> MgCl 2 hexahydrate </td><td> AppliChem </td><td> A4425 </td><td></td></tr><tr><td> NaCl </td><td> AppliChem </td><td> A1149 </td><td></td></tr><tr><td> NA 2 HPO 4 </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> S9707 </td><td></td></tr><tr><td> 페니실린 / 스트렙토 마이신 </td><td> Biochrom AG </td><td> A2213 </td><td></td></tr><tr><td> 역 형광 현미경 </td><td> 예를 들어 니콘 </td><td> 니콘의 요청 </td><td></td></tr><tr><td> CoolLED </td><td> CoolLED </td><td> P E-100 </td><td> 440 nm의 </td></tr><tr><td> DualView </td><td> Photometrics </tD&gt; <td> DV2-SYS </td><td></td></tr><tr><td> DualView 필터 슬라이더 </td><td> Photometrics </td><td> 05-EM </td><td></td></tr><tr><td> CFP / YFP 필터 세트 </td><td> 크로마 기술 </td><td> 49,052 </td><td> 방출 필터없이 </td></tr><tr><td> ORCA-03G 카메라 </td><td> 하마 마츠 포토닉스 </td><td> C8484-03G02 </td><td></td></tr><tr><td> I / O 보드를 아두 이노 </td><td> Sparkfun 전자 </td><td> DEV-00666 </td><td></td></tr><tr><td> Attofluor 셀 챔버 </td><td> Invitrogen </td><td> A-7816 </td><td></td></tr><tr><td> WindowsXP 또는 Windows7 시스템과 개인용 컴퓨터 </td><td> 모든 공급 업체 </td><td></td><td> 높은 용량의 하드 드라이브를 포함 </td></tr></tbody></table>

fret microscopy for real-time monitoring of signaling events in live cells using unimolecular biosensors

포스터 공명 에너지 전달은 (걱정) 현미경 라이브 세포와 조직의 생화학 및 신호 이벤트의 실시간 모니터링을위한 기법으로 증가 관심을 얻기 위해 계속합니다. 클래식 생화학 방법에 비해,이 소설 기술은 높은 시간적 공간적 해상도가 특징입니다. 실험 표현하고 원위치 또는 생체 1-2에 시간이 지남에 따라 이미징 될 수있는 다양한 유전자 인코딩 바이오 센서를 사용 초조해. 일반적인 바이오 센서 중 하나 단백질의 형광 태그 쌍 또는 기증자와 3-4 관심 분자에 대한 구속력있는 잔기와 상호 수용체 fluorophores을 비호하는 단일 단백질의 conformational 변화 사이에 걱정 측정하여 단백질 단백질 상호 작용을 신고 할 수 있습니다. 단백질 단백질 상호 작용에 대한 Bimolecular 바이오 센서 포함, 예를 들어, 동안 unimolecular 센서 MEA, 세포 5 G-단백질 활성화를 모니터링하기위한 구성합니다suring conformational 변화 널리 칼슘 6, 캠프 7-8, 이노시톨 인산염 9 cGMP 10-11과 같은 이미지 초 메신저로 사용됩니다. 여기 어떻게 사용자 정의 epifluorescence를 구축하는 것이 하나의 상업적으로 이용 가능한 구성 요소와 방법 마이크로 관리자 프리웨어를 사용하여 전체 설정을 제어하는​​ 방법에서 영상 시스템을 초조해 설명합니다. 이 간단하지만 강력한 계기는 라이브 셀에 걱정 일상이나보다 정교한 측정을 위해 설계되었습니다. 획득 이미지는 그래픽 형식으로 저장되기 전에 모든 실험을하는 동안 실시간으로 초조해 비율의 변화를 시각적으로 자기 작성된 플러그인을 사용하여 처리됩니다와 호환 빌드 된 다음 데이터 분석에 사용 ImageJ 프리웨어. 이 저렴한 비용으로 시스템이 높은 유연성을 특징으로하며 성공적으로 사용할 수의 과다에 의해 다양한 생화학 행사 및 신호 분자를 모니터링하는 데 사용할 수있는 것은 라이브 세포와 조직에 바이오 센서를 안달. 예를 들어, 우리는 H를 보여β-아드레날린 수용체 작용제 및 차단기가있는 자극시 라이브 293A 세포에서 캠프의 실시간 모니터링을 수행하려면이 이미징 시스템을 사용하는 아야.

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FRET Microscopy for Real-time Monitoring of Signaling Events in Live Cells Using Unimolecular Biosensors

포스터 공명 에너지 전달은 (걱정) 현미경 기자 등 다양한 바이오 센서를 사용하여 라이브 세포에서 이벤트를 신호의 실시간 모니터링을위한 강력한 기술이다. 여기 어떻게 사용자 정의 epifluorescence를 구축하는 것은 상업적으로 이용 가능한 구성 요소와 방법을 실험을 안달을 위해 사용하는 방법에서 영상 시스템을 초조해 설명합니다.

Unimolecular 바이오 센서를 사용하여 라이브 세포에서 이벤트를 신호의 실시간 모니터링을위한 현미경을 안달

F&ouml;rster resonance energy transfer (FRET) microscopy  continues to gain increasing interest as a technique for real-time monitoring  of biochemical ...

Research

JoVE Journal

Biology

Combining QD-FRET and Microfluidics to Monitor DNA Nanocomplex Self-Assembly in Real-Time

결합 QD - 걱정과 Microfluidics 실시간으로 DNA의 Nanocomplex 자체 어셈블리를 모니터하기 위해

Advances in genomics continue to fuel the development of therapeutics that can target pathogenesis at the cellular and molecular level. Typically ...

연구

생물학

Real-time Monitoring of Ligand-receptor Interactions with Fluorescence Resonance Energy Transfer

형광 공명 에너지 전송과 리간드 - 수용체 상호 작용의 실시간 모니터링

FRET is a process  whereby energy is non-radiatively transferred from an excited donor molecule to  a ground-state acceptor molecule through long-range ...

Monitoring Plasmid Replication in Live Mammalian Cells over Multiple Generations by Fluorescence Microscopy

형광 현미경으로 여러 세대 이상 라이브 포유류의 세포에 플라스미드 복제 모니터링

Few naturally-occurring plasmids are maintained in mammalian cells.  Among these are genomes of gamma-herpesviruses, including Epstein-Barr virus  (EBV) ...

Autonomously Bioluminescent Mammalian Cells for Continuous and Real-time Monitoring of Cytotoxicity

세포 독성의 지속적인 실시간 모니터링을위한 자율적으로 바이오 루미 네 센트 포유 동물 세포

Mammalian  cell-based in vitro assays have been  widely employed as alternatives to animal testing for toxicological studies but  have been limited due to ...

Real-time Imaging of Single Engineered RNA Transcripts in Living Cells Using Ratiometric Bimolecular Beacons

비례 생체 분자 비콘을 사용하여 살아있는 세포의 단일 엔지니어링 RNA 성적 증명서의 실시간 영상

The growing realization that both the temporal and spatial regulation of gene expression can have important consequences on cell function has led to the ...

Detection of Intracellular Gene Expression in Live Cells of Murine, Human and Porcine Origin Using Fluorescence-labeled Nanoparticles

형광 표지 된 나노 입자를 사용하여 쥐, 인간과 돼지 유래의 살아있는 세포에서 세포 내 유전자 발현의 검출

The reprogramming of somatic cells to induced pluripotent stem cells (iPS) has successfully been performed in different mammalian species including mouse, ...

Imaging G Protein-coupled Receptor-mediated Chemotaxis and its Signaling Events in Neutrophil-like HL60 Cells

이미징 G의 호중구와 같은 HL60 세포에서 화성과 시그널링 이벤트 수용체가 매개 단백질 결합

Eukaryotic cells sense and move towards a chemoattractant gradient, a cellular process referred as chemotaxis. Chemotaxis plays critical roles in many ...

Identification of Intracellular Signaling Events Induced in Viable Cells by Interaction with Neighboring Cells Undergoing Apoptotic Cell Death

세포 내 이웃 셀을받은 사멸 세포 죽음과의 상호 작용에 의해 실행 가능한 세포에서 유도 된 이벤트를 시그널링의 식별

Cells dying by apoptosis, also referred to as regulated cell death, acquire multiple new activities that enable them to influence the function of adjacent ...

Characterization of Calcification Events Using Live Optical and Electron Microscopy Techniques in a Marine Tubeworm

해양 tubeworm 인 라이브 광학 및 전자 현미경 기술을 사용하여 석회화 이벤트의 특성

Characterizing the first event of biological production of calcium carbonate requires a combination of microscopy approaches. First, intracellular pH ...

Photostimulation by Femtosecond Laser Activates Extracellular-signal-regulated Kinase (ERK) Signaling or Mitochondrial Events in Target Cells

Photostimulation by Femtosecond Laser Activates Extracellular-signal-regulated Kinase ERK Signaling or Mitochondrial Events in Target Cells

펨토초 레이저에 의한 광자극은 대상 세포에서 세포외 신호 조절 키나아제(ERK) 신호 또는 미토콘드리아 이벤트를 활성화합니다.

Direct control of cellular defined molecular events is important to life science. Recently, studies have demonstrated that femtosecond laser stimulation ...