Name: conversion of a capture elisa to a luminex xmap assay using a multiplex antibody screening method
Uploaded: 2012-07-06T14:00:00
Duration: 14 min 48 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Conversion of a Capture ELISA to a Luminex xMAP Assay using a Multiplex Antibody Screening Method at JoVE.com

وقد تم تمويل هذا العمل من قبل شركة Luminex.

<ol>
	<li>Fulton, J. R., McDade, R. L., Smith, P. L., Kienker, L. J., Kettman, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advanced+multiplexed+analysis+with+the+FlowMetrix+system.">Advanced multiplexed analysis with the FlowMetrix system.</a> Clinical Chemistry. 43, 1749-1756 (1997).</li><li>Carson, R. T., Vignali, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+quantation+of+15+cytokines+using+a+multiplexed+flow+cytometric+assay.">Simultaneous quantation of 15 cytokines using a multiplexed flow cytometric assay.</a> J. Immunol. Methods. 227, 41-52 (1999).</li><li>Peck, D., Crawford, E. D., Ross, K. N., Stegmaier, K., Golub, T. R., Lamb, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+high-throughput+gene+expression+signature+analysis.">A method for high-throughput gene expression signature analysis.</a> Genome Biol. 7, 61 (2006).</li><li>VanDerMeid, K. R., Su, S. P., Krenzer, K. L., Ward, K. W., Zhang, J. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+to+extract+cytokines+and+matrix+metalloproteinases+from+Schirmer+strips+and+analyze+using+Luminex.">A method to extract cytokines and matrix metalloproteinases from Schirmer strips and analyze using Luminex.</a> Mol Vis. 17, 1056-1063 (2011).</li><li>Liu, J., Kibiki, G., Maro, V., Maro, A., Kumburu, H., Swai, N., Taniuchi, M., Gratz, J., Toney, D., Kang, G., Houpt, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplex+reverse+transcription+PCR+Luminex+assay+for+detection+and+quantitation+of+viral+agents+of+gastroenteritis.">Multiplex reverse transcription PCR Luminex assay for detection and quantitation of viral agents of gastroenteritis.</a> J. Clin. Virol. 50, 308-313 (2011).</li><li>de Jager, W., Prakken, B. J., Bijlsma, J., WJ Kuis, W., Rijkers, G. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+multiplex+immunoassay+performance+in+human+plasma+and+synovial+fluid+following+removal+of+interfering+heterophilic+antibodies.">Improved multiplex immunoassay performance in human plasma and synovial fluid following removal of interfering heterophilic antibodies.</a> J. Immunol. Methods. 300, 124-135 (2005).</li><li>Codorean, E., Nichita, C., Albulescu, L., Raducan, E., Popescu, I. D., Lonita, A. C., Albulescu, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlation+of+xMAP+and+ELISA+cytokine+profiles;+development+and+validation+for+immunotoxicological+studies+in+vitro.">Correlation of xMAP and ELISA cytokine profiles; development and validation for immunotoxicological studies in vitro.</a> Roum. Arch. Microbiol. Immunol. 69, 3-19 (2010).</li><li>de Jager, W., te Velthuis, H., Prakken, B. J., Kuis, W., Rijkers, G. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+detection+of+15+human+cytokines+in+a+single+sample+of+stimulated+peripheral+blood+mononuclear+cells.">Simultaneous detection of 15 human cytokines in a single sample of stimulated peripheral blood mononuclear cells.</a> Clin. Diagn. Lab. Immunol. 10, 133-139 (2003).</li><li>DuPont, N. C., Wang, K. H., Wadhwa, P. D., Culhane, J. F., Nelson, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+and+comparison+of+Luminex+multiplex+cytokine+analysis+kits+with+ELISA:+Determinations+of+a+panel+of+nine+cytokines+in+clinical+sample+culture+supernatants.">Validation and comparison of Luminex multiplex cytokine analysis kits with ELISA: Determinations of a panel of nine cytokines in clinical sample culture supernatants.</a> J. Reprod. Immunol. 66, 175-191 (2005).</li><li>Richens, J. L., Urbanowicz, R. A., Metcalf, R., Corne, J., O'Shea, P., Fairclough, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+validation+and+comparison+of+multiplex+cytokine+kits.">Quantitative validation and comparison of multiplex cytokine kits.</a> Journal of Biomolecular Screening. 15, 562-568 (2010).</li><li>Rizzi, G., Zhang, Y. J., Latek, R., Weiner, R., Rhyne, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+development+of+a+Luminex-based+assay+for+the+detection+of+human+IL-23.">Characterization and development of a Luminex-based assay for the detection of human IL-23.</a> Bioanalysis. 2, 1561-1572 (2010).</li></ol>

وقد تم هذا العمل في شركة Luminex مع المعدات المصنعة في شركة Luminex. البحث والتطوير للنظم وEMD ميليبور من الشركاء الاستراتيجيين لشركة Luminex؛ ترخيص لتطوير وتسويق فحوصات xMAP متعددة القائم.

ويمكن تحويل لفحص ELISA إلى منصة xMAP Luminex ان تكون بسيطة مثل استبدال streptavidin الفجل البيروكسيديز (SA-HRP) في مجموعة ELISA نموذجي مع فيكوإيريترين streptavidin (SA-PE)، وتحسين الأداء. لأولئك الذين يريدون لإنشاء المناعية xMAP من الألف إلى الياء، ويمكن تحقيق ذلك مع بروتوكول واضحة أن تمكن أيضا من تقييم سريع متعددة، من أزواج الأضداد. وأعدت بسهولة الكواشف لفحص xMAP استخدام عدة جسم xMAP اقتران الزوجين إلى الأجسام المضادة المحددة لالتقاط MagPlex المجهرية تركيز منخفض. استخدام المجهرية التركيز المنخفض يقلل من تكلفة تطوير فحص في الوقت الذي توفر أداء الفحص نفسه من المجهرية تركيز أعلى. مقدار الوقت اللازم لإعداد يقترن MagPlex المجهرية ما يقرب من 3 ساعات، وهو أسرع بكثير من ال 22 - 24 ساعة المطلوبة لمعطف جيد من لوحة ELISA، تليها معاملةمن الآبار المغلفة. أداء فحص xMAP أيضا متفوقة على إليسا من حيث الحد من كشف (&lt;4 بيكوغرام / مل مقابل&gt; جزء من الغرام / مل 31) مجموعة والديناميكية (&lt;4 بيكوغرام / مل إلى&gt; 8000 جزء من الغرام / مل مقابل 16 جزء من الغرام / مل إلى 1000 جزء من الغرام / مل). القراء لوحة لديها مجموعة والتطوير التنظيمي المحدودة التي هي إما 3 أو 4 التطوير التنظيمي، وتقييد الحد الأعلى من النطاق الديناميكي للحصول على فحص. مما لا شك فيه، وليس كل الأجسام المضادة تعمل في شكل ELISA وليس كل الأجسام المضادة التي تعمل بشكل جيد في ELISA يمكن نقلها بسهولة إلى تنسيق فحص xMAP. ومع ذلك، نظرا لأنه يمكن المضاعفة المقايسات xMAP (أي تشغيل في نفس الوقت)، فمن الممكن لتقييم القبض على عدة مجموعات وكشف الأجسام المضادة في وقت واحد لتحديد أفضل زوج لاستخدام لفحص. هذه العملية يوفر وقتا كبيرا والكواشف بالمقارنة مع إجراء تطوير ELISA، والذي يقتصر على تقييم من زوج واحد في وقت واحد. وينبغي أن أزواج الأضداد اثنين أو أكثر من أداء مكافئ؛ المعلمات الأخرى للفحص يمكنينبغي النظر لتحديد مدى ملاءمتها للزوج (على سبيل المثال، وتوافر، والتكلفة، وما إلى ذلك). بالإضافة إلى فحص أداء أفضل ومرونة مع مقايسة xMAP، وهناك أيضا وفورات كبيرة في التكاليف. الكمية الموصى بها من الأجسام المضادة اللازمة لمعطف بئر واحدة من لوحة ELISA هو 400ng، في حين أن الكمية المطلوبة لالخرز المستخدمة في بئر واحدة لفحص xMAP هو ما يقرب من 7.5 نانوغرام. وبالتالي، فإن كمية من الأجسام المضادة اللازمة لأحد ELISA سوف توفر كذلك نتائج الاختبار أكثر من 50 عاما، إذا ما استخدمت في فحص xMAP. للتطبيقات التي تنطوي على العينات الثمينة، xMAP أيضا لديه ميزة كبيرة. حجم عينة الموصى بها لإليسا هو 100 ميكروليتر في حين أن حجم اللازمة لفحص xMAP يمكن أن يكون نصف هذا، أو أقل. في ملخص، وتحويل لفحص ELISA إلى منصة xMAP Luminex هو غير معقدة والكفاءة وتوفير التكاليف، في حين أن انتاج مقايسة مع مجموعة ديناميكية متفوقة وحساسية.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> وصف </td><td> بائع </td><td> فهرس العدد </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> الإنسان TNF-α/TNFSF1A DuoSet ELISA عدة </td><td> R &amp; D أنظمة </td><td> DY210 </td><td> ويشمل المضادة والأجسام المضادة البيوتين بولكلونل جانب والمؤتلف مستوى بروتين TNF-α </td></tr><tr><td> ضد وحيد النسيلة لTNF-α </td><td> Abcam </td><td> Ab18696 </td><td> القبض على الأضداد، استنساخ CH8820 </td></tr><tr><td> ضد وحيد النسيلة لTNF-α </td><td> Abcam </td><td> Ab16166 </td><td> البيوتين جسم الكشف الديناميكي، استنساخ AS1 </td></tr><tr><td> تنف ألفا من البروتين </td><td> Abcam </td><td> Ab9642 </td><td> المؤتلف مستوى بروتين TNF-α </td></tr><tr><td> ضد وحيد النسيلة لTNF-α </td><td> Novus </td><td> NBP1-50115 </td><td> القبض على الأضداد، استنساخ 4H31 </td></tr><tr><td> ضد وحيد النسيلة لTNF-α </td><td> نوفوس </td><td> NB100-78162 </td><td> البيوتين جسم الكشف الديناميكي، استنساخ MAb11 </td></tr><tr><td> تنف ألفا من البروتين </td><td> نوفوس </td><td> NBC1-18460 </td><td> المؤتلف مستوى بروتين TNF-α </td></tr><tr><td> ضد وحيد النسيلة لTNF-α </td><td> EMD ميليبور </td><td> MAB1141 </td><td> القبض على الأضداد، استنساخ 3C7.2 </td></tr><tr><td> ضد متعدد النسائل إلى TNF-α </td><td> EMD ميليبور </td><td> 654250 </td><td> جسم الأرنب كشف بولكلونل </td></tr><tr><td> Streptavidin-فيكوإيريترين </td><td> طحلب </td><td> من عصارات-001 </td><td> فلوري الكاشف مراسل لفحص xMAP Luminex </td></tr><tr><td> MAGPIX ث / برامج xPONENT </td><td> Luminex شركة </td><td> MAGPIX-XPONENT </td><td> Luminex الصك </td></tr><tr><td> xMAP جسم اقتران (ABC) كيت </td><td> Luminex شركة </td><td> 40-50016 </td><td> ويشمل EDC كاشف، كاشف سلفو-NHS، عازلة التنشيط، عازلة غسيل، 1.5 مل أنابيب رد فعل، وماصات القابل للتصرف </td></tr><tr><td> MagPlex المجهرية، تركيز منخفض </td><td> Luminex شركة </td><td> MC10012-ID، MC10013 معرف، MC10014 معرف، MC10015-ID </td><td> الخرز تركيز منخفض (@ 2.5 × 10 6 حبة / مل) </td></tr><tr><td> EZ-رابط سلفو-NHS-LC-بيوتين </td><td> الحرارية فيشر </td><td> PI-21335 </td><td> Biotinylation عدة لاكتشاف الأجسام المضادة غير معدلة </td></tr><tr><td> Tecan اللانهائي F200 قارئ </td><td> Tecan </td><td></td><td> ELISA لوحة قارئ </td></tr><tr><td> التخزين المؤقت فوسفات المالحة </td><td> سيغما الدريخ </td><td> P-3688 </td><td> 1٪ PBS-BSA، الفحص الواق </td></tr><tr><td> نصف لتر واحد منظف بالموجات فوق الصوتية المدمجة، 115 VAC </td><td> كول، Parmer </td><td> وو 08849-00 </td><td> ينتج تردد التشغيل الفعال من 55 كيلو هرتز </td></tr><tr><td> المغناطيسي أنبوب فاصل </td><td> Luminex شركة </td><td> CN-0288-01 </td><td> لفصل واحد أنبوب 1.5mL المغناطيسي في خطوات غسل اقتران </td></tr><tr><td> المغناطيسي لوحة فاصل </td><td> Luminex شركة </td><td> CN-0269-01 </td><td> ل96-جيدا فصل لوحة المغناطيسي في خطوات غسل مقايسة </td></tr></tbody></table>

conversion of a capture elisa to a luminex xmap assay using a multiplex antibody screening method

كان فحص انزيم مرتبط المناعي (ELISA) لفترة طويلة الأداة الرئيسية للكشف عن من analytes من مصلحة في العينات البيولوجية لكل من الأبحاث والتشخيص السريري. ومع ذلك، ELISA له حدود. وعادة ما يتم تنفيذ ذلك في microplate 96-جيدا، والمغلفة الآبار مع الأجسام المضادة الطبيعية، التي تتطلب كمية كبيرة نسبيا من عينة لالتقاط مستضد من الفائدة. يمكن أن مساحة كبيرة من الآبار وملزم مسعور من الأجسام المضادة الطبيعية تؤدي أيضا إلى خلفية غير محددة ملزمة، وزيادة. وبالإضافة إلى ذلك، فإن معظم ELISAs الاعتماد على انزيم بوساطة تضخيم إشارة من أجل تحقيق حساسية معقولة. تضخيم هذه ليست دائما الخطية ويمكن لنتائج الانحراف وهكذا. في السنوات ال 15 الماضية، برزت تقنية جديدة تقدم فوائد ELISA، ولكن أيضا تمكن أعلى من الناتج، وزيادة المرونة، وانخفاض حجم العينة، وانخفاض التكلفة، مع التعليم الجامعي مماثلةrkflow 1 و 2. Luminex xMAP التكنولوجيا هي منصة microsphere الصفيف (حبة) تمكين كل من monoplex وفحوصات متعددة والتي يمكن تطبيقها على كل من البروتين وتطبيقات الحمض النووي 3-5. حبات لديهم الأجسام المضادة يجمد تساهمي القبض على أصغر مساحة السطح، وتتطلب قدرا أقل من الأجسام المضادة الطبيعية، وأحجام أصغر العينة مقارنة مع إليسا، وغير محدد وملزم انخفاضا كبيرا. حجم أصغر عينة مهمة عند التعامل مع العينات الحد من مثل السائل المخي الشوكي، السائل الزليلي، الخ 6. الإرسال المتعدد الفحص يقلل من متطلبات حجم العينة، وتمكين نتائج متعددة من عينة واحدة. التحسن الذي طرأ مؤخرا من قبل Luminex ما يلي: نظام MAGPIX جديدة، أصغر حجما، وأقل تكلفة وأسهل للاستخدام محلل؛ منخفضة التركيز المغناطيسي MagPlex المجهرية التي تلغي الحاجة إلى لوحات مرشح مكلفة وتأتي في تركيز عمل أكثر ملاءمة للتنمية وفحصمنخفضة الإنتاجية التطبيقات، واقتران جسم xMAP مجموعة (اي بي سي)، والذي يتضمن بروتوكول والكواشف والمواد الاستهلاكية الضرورية للاقتران حبات لالتقاط الاجسام المضادة للاهتمام. (راجع المواد قسم للحصول على قائمة مفصلة من محتويات عدة.) في هذه التجربة، ونحن تحويل فحص ELISA قبل الأمثل لTNF-ألفا خلوى إلى منصة xMAP ومقارنة أداء الطريقتين 7-11. TNF-alpha عبارة عن العلامات البيولوجية المستخدمة في قياس الاستجابات الالتهابية في المرضى الذين يعانون من اضطرابات المناعة الذاتية. نبدأ من قبل اقتران أربعة أجسام مضادة والقبض على مرشح لأربع مجموعات microsphere أو مناطق مختلفة. عندما مختلطة معا، وهذه المجموعات الأربع تسمح للاختبار في وقت واحد من جميع المرشحين الأربعة مع أربعة أجسام مضادة كشف منفصل لتحديد هذا الزوج أفضل الأجسام المضادة، الكواشف الادخار، وعينة والوقت. هي التي شيدت بعد ذلك اثنين من المقايسات xMAP مع اثنين ازواج الضد الأمثل والأكثر من أدائهامقارنة بما كان عليه من فحص ELISA الأصلية في ما يخص قوة الإشارة، ومجموعة ديناميكية، والحساسية.

Watch this Scientific Journal Video about Conversion of a Capture ELISA to a Luminex xMAP Assay using a Multiplex Antibody Screening Method at JoVE.com

Conversion of a Capture ELISA to a Luminex xMAP Assay using a Multiplex Antibody Screening Method

يمكن أن يكون ELISA تحويلها بسهولة الى فحص xMAP Luminex و، من خلال الفوائد من الأجسام المضادة، ومضاعفة عدة يمكن عرضه في وقت واحد لتحديد هوية زوج الضد الأمثل، مما أدى إلى زيادة الحساسية ومجموعة ديناميكية، في حين خفض تكلفة الفحص.

تحويل لالتقاط ELISA لفحص xMAP Luminex باستخدام فحص الجسم المضاد الطريقة ملتيبليكس

The enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) has long been the primary tool for detection of analytes of interest in biological samples for both life ...

Research

JoVE Journal

Biology

Laser Capture Microdissection of Mammalian Tissue

الليزر Microdissection القبض على أنسجة الثدييات

Laser capture microscopy, also known as laser microdissection (LMD), enables the user to isolate small numbers of cells or tissues from frozen or ...

Cell Capture Using a Microfluidic Device

القبض على خلية باستخدام جهاز ميكروفلويديك

Method for Whole Mount Antibody Staining in Chick

طريقة لتلطيخ جسم الجامع في جبل الفرخ

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

RNAi Screening to Identify Postembryonic Phenotypes in C. elegans

RNAi Screening to Identify Postembryonic Phenotypes in C. elegans

[رني الفرز لتحديد الظواهر تال للمرحلة الجنينية في C. ايليجانس</em

C. elegans has proven to be a valuable model system for the discovery and functional characterization of many genes and gene pathways1. More sophisticated ...

A Fluorescent Screening Assay for Identifying Modulators of GIRK Channels

والفحص الفحص نيون لتحديد المغيرون من القنوات GIRK

G protein-gated inward rectifier K+ (GIRK) channels function as cellular mediators of a wide range of hormones and neurotransmitters and are expressed in ...

A Liquid Phase Affinity Capture Assay Using Magnetic Beads to Study Protein-Protein Interaction: The Poliovirus-Nanobody Example

تقارب المرحلة السائلة الفحص التقاطها باستخدام الخرز المغناطيسي لدراسة البروتين البروتين التفاعل: المثال فيروس شلل الأطفال، Nanobody

In this article, a simple, quantitative, liquid phase affinity capture assay is presented. Provided that one protein can be tagged and another protein ...

High-throughput Functional Screening using a Homemade Dual-glow Luciferase Assay

الإنتاجية العالية فحص وظيفية باستخدام محلية الصنع ثنائي توهج luciferase الفحص

We present a rapid and inexpensive high-throughput screening protocol to identify transcriptional regulators of alpha-synuclein, a gene associated with ...

Anti-Nuclear Antibody Screening Using HEp-2 Cells

مكافحة النووية عن طريق فحص الأجسام المضادة التهاب الكبد-2 خلايا

The American College of Rheumatology position statement on ANA testing stipulates the use of IIF as the gold standard method for ANA screening1. Although ...

A Method for Selecting Structure-switching Aptamers Applied to a Colorimetric Gold Nanoparticle Assay

منهج في اختيار الأبتامرات تبديل الهيكل تطبيقها على اللونية الذهب جسيمات متناهية الصغر الفحص

Small molecules provide rich targets for biosensing applications due to their physiological implications as biomarkers of various aspects of human health ...

Identification of Kinase-substrate Pairs Using High Throughput Screening

تحديد أزواج كيناز الركيزة عن طريق فحص إنتاجية عالية


We have developed a screening platform to identify dedicated human protein kinases for phosphorylated substrates which can be used to elucidate novel ...