Name: conversion of a capture elisa to a luminex xmap assay using a multiplex antibody screening method
Uploaded: 2012-07-06T14:00:00
Duration: 14 min 48 s
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	<li>Fulton, J. R., McDade, R. L., Smith, P. L., Kienker, L. J., Kettman, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advanced+multiplexed+analysis+with+the+FlowMetrix+system.">Advanced multiplexed analysis with the FlowMetrix system.</a> Clinical Chemistry. 43, 1749-1756 (1997).</li><li>Carson, R. T., Vignali, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+quantation+of+15+cytokines+using+a+multiplexed+flow+cytometric+assay.">Simultaneous quantation of 15 cytokines using a multiplexed flow cytometric assay.</a> J. Immunol. Methods. 227, 41-52 (1999).</li><li>Peck, D., Crawford, E. D., Ross, K. N., Stegmaier, K., Golub, T. 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J., Latek, R., Weiner, R., Rhyne, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+development+of+a+Luminex-based+assay+for+the+detection+of+human+IL-23.">Characterization and development of a Luminex-based assay for the detection of human IL-23.</a> Bioanalysis. 2, 1561-1572 (2010).</li></ol>

이 작품은 Luminex 공사에서 제조 설비를 Luminex 공사에서 이루어졌다. R &amp; D 시스템 및 EMD Millipore는 Luminex Corporation의 전략적 파트너, 멀티 플렉스 xMAP 기반 assays을 개발하고 상용화 허가.

Luminex xMAP 플랫폼으로 엘리사 분석의 변환 streptavidin phycoerythrin (SA-PE)과 전형적인 엘리사 키트에 streptavidin 양고추냉이 퍼옥시데이즈 (SA-HRP)를 대체하고, 성능을 최적화하는 것만 큼이나 간단합니다. 최대 땅속에서 xMAP 면역 분석법을 생성하고자하는 사람들을 위해, 이것은 또한 항체 쌍의 빠른, 멀티 플렉스 평가있게 간단한 프로토콜로 수행할 수 있습니다. xMAP 분석을위한 시약 쉽게 부부 지정 캡처 항체에 MagPlex 낮은 농도 microspheres에 xMAP 항체 커플링 키트를 사용하여 작성되었다. 낮은 농도 microspheres의 사용은 높은 농도 microspheres의 동일한 분석 성능을 제공하면서 분석 개발 비용을 줄여줍니다. 결합 MagPlex microspheres를 준비하는 데 필요한 시간의 양은 어느가 22보다 훨씬 빠른, 약 3 시간 - 24 시간 치료 뒤에는 코트 엘리사 플레이트의 우물을 의무코팅 위. xMAP 분석의 성능을 탐지 (&lt;4 PG / ML 대&gt; 31 PG / ML) 및 동적 범위 (&lt;4 PG / ML로&gt; 8000 PG / ML 대 16 한계의 측면에서도 엘리사에게 우수 PG / ML 1000 PG / ML). 플레이트 리더는 분석을위한 동적 범위의 상한선을 제한, 중 3이나 4 OD는 제한된 OD의 범위가 있습니다. 의심의 여지가없이, 모든 항체는 엘리사 형식으로 작동하며 엘리사에 잘 작동하지 않을 모든 항체는 xMAP 분석 형식으로 쉽게 이전할 수 있습니다. xMAP의 assays가 (동시에 실행 IE) 멀티 플렉스 수 있기 때문에 그러나, 그것은 분석을 위해 사용하는 가장 좋은 쌍을 식별하는 동시에 여러 캡처 및 탐지 항체 조합을 평가하는 것이 가능합니다. 이 과정은 상당한 시간과 한 번에 한 쌍의 평가로 제한됩니다 엘리사 개발 절차와 비교 시약을 저장합니다. 두 개 이상의 항체 쌍은 equivalently 수행되어야하고 분석의 다른 매개 변수 수쌍 (예, 가용성, 비용 등)의 적합성을 결정 간주됩니다. xMAP 분석과 향상된 분석 성능과 유연성뿐만 아니라, 상당한 비용 절감 효과도있다. xMAP 분석을 잘 하나에 사용되는 구슬에 필요한 수량이 약 7.5 NG이지만 항체의 권장 수량은 코트 한 우물 엘리사 플레이트가 400ng이다에 필요합니다. 따라서, 하나 엘리사에 필요한 항체의 양을 잘 xMAP 분석에 사용되는 경우, 50 개 이상의 테스트 결과를 제공합니다. 귀중한 샘플을 포함한 어플 리케이션의 경우, xMAP 또한 상당한 장점이 있습니다. xMAP 분석에 필요한 볼륨 그 중 절반 이하가 될 수 반면 엘리사 권장 시료의 부피는 100 μL입니다. 우수한 동적 범위와 감도와 분석을 생산하면서 요약에 Luminex xMAP 플랫폼으로 엘리사 분석의 변환은, 단순한 효율 및 비용 절감이다.

<table border="1"><tbody><tr><td> 설명 </td><td> 공급 업체 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 댓글 </td></tr><tr><td> 인간 TNF-α/TNFSF1A DuoSet 엘리사 키트 </td><td> R &amp; D 시스템 </td><td> DY210 </td><td> 단클론 및 비오틴 결합 polyclonal 항체 및 재조합 TNF-α 단백질 표준을 포함 </td></tr><tr><td> TNF-α에 대한 단클론 항체 </td><td> Abcam </td><td> Ab18696 </td><td> , 클론 CH8820를 항체를 캡처 </td></tr><tr><td> TNF-α에 대한 단클론 항체 </td><td> Abcam </td><td> Ab16166 </td><td> 비오틴 결합 감지 항체, 클론 AS1 </td></tr><tr><td> TNF 알파 단백질 </td><td> Abcam </td><td> Ab9642 </td><td> 재조합 TNF-α 단백질 표준 </td></tr><tr><td> TNF-α에 대한 단클론 항체 </td><td> Novus </td><td> NBP1-50115 </td><td> , 클론 4H31을 항체를 캡처 </td></tr><tr><td> TNF-α에 대한 단클론 항체 </td><td> Novus </td><td> NB100-78162 </td><td> 비오틴 결합 감지 항체, 클론 MAb11 </td></tr><tr><td> TNF 알파 단백질 </td><td> Novus </td><td> NBC1-18460 </td><td> 재조합 TNF-α 단백질 표준 </td></tr><tr><td> TNF-α에 대한 단클론 항체 </td><td> EMD Millipore </td><td> MAB1141 </td><td> 항체를 캡처, 3C7.2을 복제 </td></tr><tr><td> TNF-α에 대한 Polyclonal 항체 </td><td> EMD Millipore </td><td> 654,250 </td><td> 토끼 polyclonal 감지 항체 </td></tr><tr><td> Streptavidin-Phycoerythrin </td><td> 이끼 </td><td> SAPE-001 </td><td> Luminex xMAP 분석을위한 형광 기자 시약 </td></tr><tr><td> MAGPIX W / xPONENT 소프트웨어 </td><td> Luminex 공사 </td><td> 석사GPIX-XPONENT </td><td> Luminex의 악기 </td></tr><tr><td> xMAP 항체 커플링 (AB​​C) 키트 </td><td> Luminex 공사 </td><td> 40-50016 </td><td> EDC 시약, Sulfo-보건국 시약, 활성화 버퍼, 세차 버퍼, 1.5 ML 반응 튜브, 그리고 일회용 pipettes 포함 </td></tr><tr><td> MagPlex Microspheres, 낮은 농도 </td><td> Luminex 공사 </td><td> MC10012-ID, MC10013-ID, MC10014-ID, MC10015-ID </td><td> 낮은 농도 구슬 (@ 2.5 X 10 6 비드 / ML) </td></tr><tr><td> EZ-링크 Sulfo-NHS-LC-비오틴 </td><td> 써모 피셔 </td><td> PI-21335 </td><td> 수정되지 않은 항체 검출을위한 Biotinylation 키트 </td></tr><tr><td> Tecan 무한 F200 리더 </td><td> Tecan </td><td></td><td> 엘리사 플레이트 리더 </td></tr><tr><td> 인산염은 염분 버퍼 </td><td> 시그마 - 올드 리치 </td><td> P-3688 </td><td> 1퍼센트 PBS-BSA, 분석 완충액 </td></tr><tr><td> 한 파인트 소형 초음파 청소기, VAC 115 </td><td> 콜 - Parmer </td><td> WU-08849-00 </td><td> 55 kHz에서의 효과적인 운영 주파수를 제작 </td></tr><tr><td> 마그네틱 튜브 구분 기호 </td><td> Luminex 공사 </td><td> CN-0288-01 </td><td> 커플링 세탁 단계에서 단일 1.5mL 튜브 자성 분리를 위해 </td></tr><tr><td> 마그네틱 플레이트 구분 기호 </td><td> Luminex 공사 </td><td> CN-0269-01 </td><td> 검정 세척 단계에서 96 - 웰 플레이트 자성 분리를 위해 </td></tr></tbody></table>

conversion of a capture elisa to a luminex xmap assay using a multiplex antibody screening method

효소 결합 면역 분석 (엘리사)는 오랫동안 생명 과학 연구 및 임상 진단 모두에 대한 생물 학적 시료에 대한 관심 analytes의 검출하기위한 중요한 도구가되었습니다. 그러나 엘리사는 제한 사항이 있습니다. 그것은 일반적으로 96 - 웰 microplate에서 수행되며, 우물은 관심 항원을 포착하기 위해 시료의 비교적 큰 금액을 요구, 캡처 항체로 코팅됩니다. 우물의 넓은 표면적과 캡쳐 항체의 소수성 바인딩도 아닌 특정 바인딩과 증가 배경으로 이어질 수 있습니다. 또한 대부분의 ELISAs는 합리적인 감도를 달성하기 위해서는 신호의 효소 - 매개 증폭에 의존. 이러한 증폭은 항상 선형 아니며 수 있으므로 스큐 결과입니다. 지난 15 년 동안 새로운 기술은 비슷한 우와 함께하는가 엘리사의 혜택을 제공뿐만 아니라, 높은 처리량, 향상된 유연성, 감소 샘플 볼륨, 그리고 낮은 비용을 가능하게 떠오르고rkflow 1, 2. Luminex xMAP 기술 monoplex과 단백질과 핵산 응용 3-5 모두에 적용할 수있는 멀티 플렉스 assays를 모두 가능하게 microsphere (구슬) 배열 플랫폼입니다. 구슬은 엘리사에 비해 덜 캡처 항체와 작은 샘플 볼륨을 필요로하는, covalently 작은 표면적에 고정화 캡처 항체를 가지고 있고, 이외의 구체적인 구속력이 크게 줄어 듭니다. 같은 뇌척수, 활액 액체 등 6 등 제한 샘플 작업시 작은 샘플 볼륨이 중요하다. 분석을 다중화하는 것은 더 이상 하나의 샘플에서 여러 결과를함으로써, 샘플 볼륨 요구 사항을 줄여줍니다. Luminex에 의한 최근의 향상된 기능은 다음과 같습니다 : 새로운 MAGPIX 시스템, 작고, 저렴, 쉽게 - 사용하기 분석기, 낮은 농도 마그네틱 MagPlex Microspheres 고가의 필터 플레이트에 대한 필요성을 제거하고 더 나은 분석 개발에 적합 근무 농도에 와서낮은 처리량 어플 리케이션 및 xMAP 항체 커플링 (AB​​C) 키트, 프로토콜, 시약 및 관심 캡처 항체에 구슬을 커플링에 필요한 소모품을 포함합니다. (키트 내용의 자세한 목록은 자료 섹션을 참조하십시오.) 본 실험에서는 xMAP 플랫폼 TNF-알파 시토킨위한 사전 최적화된 엘리사 분석을 변환하고 두 가지 방법 7-11의 성능을 비교합니다. TNF-알파는 면역 장애 환자에서 염증 반응의 측정에 사용되는 biomarker입니다. 우리는 네 가지 microsphere 세트 또는 지역 네 가지 후보 캡처 항체를 결합하여 시작합니다. 함께 혼합하면 이들 4 세트는 최고의 항체 쌍, 저장 시약, 샘플 및 시간을 결정하는 4 개의 별도의 탐지 항체를 가진 네 명의 후보 중 동시 테스트하실 수 있습니다. 두 xMAP의 assays 그런 다음 두 가장 최적 항체 쌍과 건설과 그 성과가있다신호 강도, 동적 범위 및 감도에 관해서 원래 엘리사 분석의 비교.

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Conversion of a Capture ELISA to a Luminex xMAP Assay using a Multiplex Antibody Screening Method

엘리사 쉽게 Luminex xMAP 분석으로 변환될 수 있으며, 멀티플렉싱, 여러 항체의 장점을 통해 분석 비용을 줄이는 한편, 증가 감도 및 다이나믹 레인지 결과, 최적 항체 쌍을 식별하는 동시에 상영 할 수 있습니다.

멀티 플렉스 항체 검사 방법을 사용하여 Luminex xMAP 분석에 캡처 엘리사의 전환

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