Name: stereotactic intracranial implantation and in vivo bioluminescent imaging of tumor xenografts in a mouse model system of glioblastoma multiforme
Uploaded: 2012-09-25T11:00:00
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Somos gratos ao Dr. Andrew Hollander, Sara Davis, Shuman Lee, Tim Jenkins, e Xiangsheng Dr. Xu por sua assistência especializada. Agradecemos o apoio do Dr. Ann Kennedy. BCB foi apoiado para a formação Biologia Radiação Grant C5T32CA009677. JFD foi apoiado sobre o Prémio Carreira Burroughs Wellcome para cientistas médicos (1.006.792). JLB foi apoiada sobre a concessão Supers (5 R25 CA140116-03). Nós gostaríamos de agradecer o Dr. Steve Hahn cujo incentivo e apoio ajudou a tornar possível a nossa pesquisa. Gostaríamos também de agradecer à Universidade da Pensilvânia Nano-Bio interface Center (NBIC) e Dennis Dr. Discher para o incentivo e comentários úteis. Nós reconhecemos a Facilidade de Imagem de Pequenos Animais (SAIF) da Universidade da Pensilvânia, pelo uso de suas instalações fundamentais de ressonância magnética e óptica / bioluminescência. Estas técnicas foram desenvolvidas como parte de projetos que foram apoiados pelos Institutos Nacionais de Saúde (RC1 CA145075 e K08-NS07654801).

A. Preparação pré-operatória de células tumorais <ol><li> Transduzir células U251 de glioblastoma multiforme, com um vector de expressão lentiviral (pGreenFire, Sistema Biosciences) para estavelmente expressam o gene da luciferase do pirilampo. </li><li> Estas células foram cultivadas em 10 ml de Modificação de Dulbecco completa de meio de Eagle (DMEM), que consiste de meio DMEM suplementado com soro de vitela fetal a 10%, 1% de penicilina-estreptomicina, e 1% de aminoácidos não essenciais em um frasco de ...

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	<li>Stupp, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiotherapy+plus+concomitant+and+adjuvant+temozolomide+for+glioblastoma.">Radiotherapy plus concomitant and adjuvant temozolomide for glioblastoma.</a> N. Engl. J. Med. 352, 987-996 (2005).</li><li>Jacobs, V. L., Valdes, P. A., Hickey, W. F., De Leo, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+review+of+in+vivo+GBM+rodent+models:+emphasis+on+the+CNS-1+tumour+model.">Current review of in vivo GBM rodent models: emphasis on the CNS-1 tumour model.</a> ASN Neuro. 3, e00063 (2011).</li><li>Shelton, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+pre-clinical+in+vivo+mouse+model+for+malignant+brain+tumor+growth+and+invasion.">A novel pre-clinical in vivo mouse model for malignant brain tumor growth and invasion.</a> J. Neurooncol. 99, 165-176 (2010).</li><li>Brehar, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development+of+xenograft+glioblastoma+implants+in+nude+mice+brain.">The development of xenograft glioblastoma implants in nude mice brain.</a> J. Med. Life. 1, 275-286 (2008).</li><li>Ozawa, T., James, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishing+Intracranial+Brain+Tumor+Xenografts+With+Subsequent+Analysis+of+Tumor+Growth+and+Response+to+Therapy+using+Bioluminescence+Imaging.">Establishing Intracranial Brain Tumor Xenografts With Subsequent Analysis of Tumor Growth and Response to Therapy using Bioluminescence Imaging.</a> J. Vis. Exp. (41), e1986 (2010).</li><li>Radaelli, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunohistopathological+and+neuroimaging+characterization+of+murine+orthotopic+xenograft+models+of+glioblastoma+multiforme+recapitulating+the+most+salient+features+of+human+disease.">Immunohistopathological and neuroimaging characterization of murine orthotopic xenograft models of glioblastoma multiforme recapitulating the most salient features of human disease.</a> Histol. Histopathol. 24, 879-891 (2009).</li><li>Baumann, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancing+the+efficacy+of+drug-loaded+nanocarriers+against+brain+tumors+by+targeted+radiation+therapy.">Enhancing the efficacy of drug-loaded nanocarriers against brain tumors by targeted radiation therapy.</a> , (2012).</li><li>Baumann, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+integrated+method+for+reproducible+and+accurate+image-guided+stereotactic+cranial+irradiation+of+brain+tumors+using+the+Small+Animal+Radiation+Research+Platform+(SARRP).">An integrated method for reproducible and accurate image-guided stereotactic cranial irradiation of brain tumors using the Small Animal Radiation Research Platform (SARRP).</a> Transl. Oncol. , (2012).</li><li>Park, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroPET/CT+imaging+of+an+orthotopic+model+of+human+glioblastoma+multiforme+and+evaluation+of+pulsed+low-dose+irradiation.">MicroPET/CT imaging of an orthotopic model of human glioblastoma multiforme and evaluation of pulsed low-dose irradiation.</a> Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. 80, 885-892 (2011).</li><li>Szentirmai, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+bioluminescence+imaging+of+luciferase+expressing+intracranial+U87+xenografts:+correlation+with+magnetic+resonance+imaging+determined+tumor+volume+and+longitudinal+use+in+assessing+tumor+growth+and+antiangiogenic+treatment+effect.">Noninvasive bioluminescence imaging of luciferase expressing intracranial U87 xenografts: correlation with magnetic resonance imaging determined tumor volume and longitudinal use in assessing tumor growth and antiangiogenic treatment effect.</a> Neurosurgery. 58, 365-372 (2006).</li><li>Dinca, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioluminescence+monitoring+of+intracranial+glioblastoma+xenograft:+response+to+primary+and+salvage+temozolomide+therapy.">Bioluminescence monitoring of intracranial glioblastoma xenograft: response to primary and salvage temozolomide therapy.</a> J. Neurosurg. 107, 610-616 (2007).</li></ol>

O método de implantação estereotáxica de células de cancro em ratinhos descritos neste documento de forma reprodutível gera tumores que razoavelmente recapitulam o padrão de infiltração e rápida de crescimento do glioblastoma multiforme clínico 2, 6-8. Esta técnica é especialmente bem adequado para as experiências ratinhos estratificando uniformemente para diferentes grupos de tratamento em que os tumores de tamanho comparável reprodutíveis e propriedades biológicas e em localizações anató...

<table border="1"><tbody><tr><td> Descrição </td><td> Fornecedor </td><td> Número de Catálogo </td><td> Comentários </td></tr><tr><td> Digital Apenas para Rato Instrumento Estereotáxica </td><td> Stoelting </td><td> 51730D </td><td> Plataforma estereotáxica para implantação do mouse </td></tr><tr><td> De cetamina / xilazina </td><td></td><td></td><td> Anestesia injetável </td></tr><tr><td> Puralube Pomada Vet (oftálmica) </td><td> Amazon.com </td><td></td><td> Para evitar a secagem dos olhos do rato </td></tr><tr><td> perfurar titular para a plataforma estereotáxica </td><td> Stoelting </td><td> 51681 </td><td></td></tr><tr><td> Broca Micromotor </td><td> Stoelting </td><td> 51449 </td><td> Para perfurar o crânio </td></tr><tr><td> 0,45 milímetros broca de carboneto </td><td> Stoelting </td><td> 514551 </td><td></td></tr><tr><td> Cotonetes estéreis </td><td> Fisher Scientific </td><td> 23-400-100 </td><td></td></tr><tr><td> Conta de vidro seco esterilizador (Germinator 500) </td><td> Braintree Científica </td><td> GER-5287 </td><td> Para esterilizar instrumentos cirúrgicos metálicos </td></tr><tr><td> Rato retal sonda </td><td> Braintree Científica </td><td> RET-3-ISO </td><td> Compatível com o controlador de temperatura </td></tr><tr><td> Controlador de temperatura (TCAT-2DF) </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 727561 </td><td> Controlador de temperatura para manter a temperatura do animal durante a cirurgia </td></tr><tr><td> Pequena placa de aquecimento </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 727617 </td><td> Para uso com o controlador de temperatura para aquecer rato durante a cirurgia. A placa de aquecimento se encaixa sob o mouse sobre a plataforma estereotáxica. </td></tr><tr><td> Bisturis descartáveis </td><td> BD Bard-Parker </td><td> 2015-11 </td><td> º 10 bisturi </td></tr><tr><td> Seringa de 10 microlitros </td><td> Hamilton </td><td> 7635-01 </td><td> Para a injecção de células tumorais </td></tr><tr><td> 30 agulhas de calibre, 1 &quot;de comprimento, com ponto liso </td><td> Hamilton </td><td> Vário </td><td> Deve ser compatível com a seringa de 10 ul </td></tr><tr><td> Nanomite bomba de seringa programáveis </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 704507 </td><td> Digital motorizado seringa injetora para o dispositivo estereotáxico </td></tr><tr><td> Celulose estéreis cirúrgicos esponjas lança </td><td> Ultracell </td><td> 40410 </td><td> Para secar o campo cirúrgico </td></tr><tr><td> Cera de osso </td><td> Ethicon </td><td> W31 </td><td> Para selar o furo da rebarba </td></tr><tr><td> Tissumend II adesivo de tecido sintético absorvível </td><td> Laboratórios veterinários </td><td> 3002931 </td><td> Para selar a incisão </td></tr><tr><td> Bomba de água quente com a almofada de aquecimento </td><td> Gaymar </td><td> TP-650 </td><td> Aquece ratos no período pós-operatório </td></tr><tr><td> IVIS Lumina II </td><td> Caliper Life Science </td><td></td><td> Bioluminescent imager </td></tr><tr><td> D-luciferina sal de potássio </td><td> Biotecnologia ouro </td><td> SORTE-1 </td><td> Luciferina para bioluminescente de imagem </td></tr></tbody></table>

stereotactic intracranial implantation and in vivo bioluminescent imaging of tumor xenografts in a mouse model system of glioblastoma multiforme

Glioblastoma multiforme (GBM) é um alto grau de cancro cerebral primário com uma sobrevida média de apenas 14,6 meses em humanos, apesar do tratamento modalidade tri-padrão consiste na ressecção cirúrgica, pós-operatório de radioterapia e quimioterapia temozolomida 1. Novas abordagens terapêuticas são claramente necessárias para melhorar a sobrevida do paciente e qualidade de vida. O desenvolvimento de estratégias mais eficazes de tratamento seria auxiliada por modelos animais de GBM que recapitular doença humana ainda permitir imagens em série para acompanhar o crescimento do tumor e resposta ao tratamento. Neste artigo, descrevemos a nossa técnica para a implantação estereotáxica precisa de bio-representável células cancerosas GBM no cérebro de camundongos nude, resultando em xenotransplantes tumorais que recapitulam principais características clínicas da GBM 2. Este método produz tumores que são reprodutíveis e estão localizados em locais anatómicos precisos, permitindo simultaneamente in vivo imaging bioluminescente para monitorar intra serialmentecrescimento de xenoenxertos de crânio e resposta a tratamentos 3-5. Este método também é bem tolerado pelos animais com morbilidade e mortalidade perioperatória baixo.

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Stereotactic Intracranial Implantation and In vivo Bioluminescent Imaging of Tumor Xenografts in a Mouse Model System of Glioblastoma Multiforme

Nós descrevemos um método integrado para a implantação, precisa estereotáxica de células de glioblastoma multiforme humano no cérebro de camundongos nude e série subseqüente<em&gt; In vivo</em&gt; De imagem para monitorizar o crescimento e a resposta ao tratamento dos xenoenxertos resultantes.

Implantação estereotáxica intracraniana e<em&gt; Em vivo</em&gt; Imaging Bioluminescent de xenoenxertos de tumores em um Sistema Modelo de Rato Glioblastoma Multiforme

Glioblastoma multiforme (GBM) is a high-grade primary brain cancer with a median survival of only 14.6 months in humans despite standard tri-modality ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Stereotactic Intracranial Implantation and In vivo Bioluminescent Imaging of Tumor Xenografts in a Mouse Model System of Glioblastoma Multiforme

Multi-photon Imaging of Tumor Cell Invasion in an Orthotopic Mouse Model of Oral Squamous Cell Carcinoma

Multi-fotão imagem de invasão das células tumorais em um modelo de camundongo ortotópico de carcinoma epidermóide oral

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient ...

Medicina

In vivo Bioluminescence Imaging of Tumor Hypoxia Dynamics of Breast Cancer Brain Metastasis in a Mouse Model

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Na imagem de bioluminescência vivo Tumor de mama Dynamics Hipóxia metástase do cancro cerebral em um modelo de rato

It is well recognized that tumor hypoxia plays an important role in promoting malignant progression and affecting therapeutic response negatively. There ...

In vivo Dual Substrate Bioluminescent Imaging

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In vivo dupla Substrato Bioluminescent imagem

Our understanding of how and when breast cancer cells transit from established primary tumors to metastatic sites has increased at an exceptional rate ...

Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas

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Implantação intracraniana com 3D subseqüentes In Vivo Bioluminescent imagem de Gliomas murino

The mouse glioma 261 (GL261) is recognized as an in vivo model system that recapitulates many of the features of human glioblastoma multiforme (GBM). The ...

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The tumor microenvironment plays a pivotal role in tumor initiation, progression, metastasis, and the response to anti-cancer therapies. Three-dimensional ...

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

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A Novel de alta resolução<em&gt; In vivo</em&gt; Técnica de Imagem para estudar a resposta dinâmica de estruturas intracranianas ao crescimento do tumor e Terapêutica

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In vivo 19F MRI for Cell Tracking

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