Name: in vitro analysis of pdz-dependent cftr macromolecular signaling complexes
Uploaded: 2012-08-13T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vitro Analysis of PDZ-dependent CFTR Macromolecular Signaling Complexes at JoVE.com

وقد تم دعم عملنا من المنح المقدمة من جمعية القلب الأميركية (جنوب شرق الكبرى التابعة ل) 0765185B البداية للمنح في والمعونة، وU. باردي إلسا مؤسسة منح البحوث، وجامعة واين ستيت صندوق بدء التشغيل ضمن الجدران والقلب والأوعية الدموية بحوث مبادرة إيزيس جائزة المعهد. وكان في الأصل هذه الطريقة في المختبر من الجزيئات CFTR الجمعية المعقدة التي بدأها الدكتور AP نارين (جامعة تينيسي مركز علوم الصحة).

1. التعبير وتنقية البروتينات المؤتلف المرتبطة دلاليا الانصهار في البكتيريا <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تضخيم مناطق محددة من C-ذيول (آخر 50-100 الأحماض الأمينية التي تحتوي على زخارف PDZ في نهاية-C) لCFTR، LPA 2، MRP2، MRP4، β 2 AR، وNHERFs (بالطول أو المج...

<ol>
	<li>Anderson, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Demonstration+that+CFTR+is+a+chloride+channel+by+alteration+of+its+anion+selectivity.">Demonstration that CFTR is a chloride channel by alteration of its anion selectivity.</a> Science. 253, 202-205 (1991).</li><li>Bear, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+and+functional+reconstitution+of+the+cystic+fibrosis+transmembrane+conductance+regulator+(CFTR.">Purification and functional reconstitution of the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR.</a> Cell. 68, 809-818 (1992).</li><li>Quinton, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chloride+impermeability+in+cystic+fibrosis.">Chloride impermeability in cystic fibrosis.</a> Nature. 301, 421-422 (1983).</li><li>Cheng, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defective+intracellular+transport+and+processing+of+CFTR+is+the+molecular+basis+of+most+cystic+fibrosis.">Defective intracellular transport and processing of CFTR is the molecular basis of most cystic fibrosis.</a> Cell. 63, 827-834 (1990).</li><li>Gabriel, S. E., Brigman, K. N., Koller, B. H., Boucher, R. C., Stutts, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cystic+fibrosis+heterozygote+resistance+to+cholera+toxin+in+the+cystic+fibrosis+mouse+model.">Cystic fibrosis heterozygote resistance to cholera toxin in the cystic fibrosis mouse model.</a> Science. 266, 107-109 (1994).</li><li>Li, C., Naren, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CFTR+chloride+channel+in+the+apical+compartments:+spatiotemporal+coupling+to+its+interacting+partners.">CFTR chloride channel in the apical compartments: spatiotemporal coupling to its interacting partners.</a> Integr. Biol (Camb). 2, 161-177 (2010).</li><li>Chao, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+intestinal+CFTR+Cl-+channel+by+heat-stable+enterotoxin+and+guanylin+via+cAMP-dependent+protein+kinase.">Activation of intestinal CFTR Cl- channel by heat-stable enterotoxin and guanylin via cAMP-dependent protein kinase.</a> Embo. J. 13, 1065-1072 (1994).</li><li>Gabriel, S. E., Clarke, L. L., Boucher, R. C., Stutts, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CFTR+and+outward+rectifying+chloride+channels+are+distinct+proteins+with+a+regulatory+relationship.">CFTR and outward rectifying chloride channels are distinct proteins with a regulatory relationship.</a> Nature. 363, 263-268 (1993).</li><li>McNicholas, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitivity+of+a+renal+K++channel+(ROMK2)+to+the+inhibitory+sulfonylurea+compound+glibenclamide+is+enhanced+by+coexpression+with+the+ATP-binding+cassette+transporter+cystic+fibrosis+transmembrane+regulator.">Sensitivity of a renal K+ channel (ROMK2) to the inhibitory sulfonylurea compound glibenclamide is enhanced by coexpression with the ATP-binding cassette transporter cystic fibrosis transmembrane regulator.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 93, 8083-8088 (1996).</li><li>Schreiber, R., Nitschke, R., Greger, R., Kunzelmann, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cystic+fibrosis+transmembrane+conductance+regulator+activates+aquaporin+3+in+airway+epithelial+cells.">The cystic fibrosis transmembrane conductance regulator activates aquaporin 3 in airway epithelial cells.</a> J. Biol. Chem. 274, 11811-11816 (1999).</li><li>Shumaker, H., Amlal, H., Frizzell, R., Ulrich, C. D., Soleimani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CFTR+drives+Na+-nHCO-3+cotransport+in+pancreatic+duct+cells:+a+basis+for+defective+HCO-3+secretion+in+CF.">CFTR drives Na+-nHCO-3 cotransport in pancreatic duct cells: a basis for defective HCO-3 secretion in CF.</a> Am. J. Physiol. 276, 16-25 (1999).</li><li>Ahn, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulatory+interaction+between+the+cystic+fibrosis+transmembrane+conductance+regulator+and+HCO3-+salvage+mechanisms+in+model+systems+and+the+mouse+pancreatic+duct.">Regulatory interaction between the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator and HCO3- salvage mechanisms in model systems and the mouse pancreatic duct.</a> J. Biol. Chem. 276, 17236-17243 (2001).</li><li>Sugita, M., Yue, Y., Foskett, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CFTR+Cl-+channel+and+CFTR-associated+ATP+channel:+distinct+pores+regulated+by+common+gates.">CFTR Cl- channel and CFTR-associated ATP channel: distinct pores regulated by common gates.</a> Embo. J. 17, 898-908 (1998).</li><li>Naren, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+CFTR+chloride+channels+by+syntaxin+and+Munc18+isoforms.">Regulation of CFTR chloride channels by syntaxin and Munc18 isoforms.</a> Nature. 390, 302-305 (1997).</li><li>Naren, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Syntaxin+1A+is+expressed+in+airway+epithelial+cells,+where+it+modulates+CFTR+Cl(-)+currents.">Syntaxin 1A is expressed in airway epithelial cells, where it modulates CFTR Cl(-) currents.</a> J. Clin. Invest. 105, 377-386 (2000).</li><li>Naren, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+macromolecular+complex+of+beta+2+adrenergic+receptor,+CFTR,+and+ezrin/radixin/moesin-binding+phosphoprotein+50+is+regulated+by+PKA.">A macromolecular complex of beta 2 adrenergic receptor, CFTR, and ezrin/radixin/moesin-binding phosphoprotein 50 is regulated by PKA.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 100, 342-346 (1073).</li><li>Li, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lysophosphatidic+acid+inhibits+cholera+toxin-induced+secretory+diarrhea+through+CFTR-dependent+protein+interactions.">Lysophosphatidic acid inhibits cholera toxin-induced secretory diarrhea through CFTR-dependent protein interactions.</a> J. Exp. Med. 202, 975-986 (2005).</li><li>Li, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatiotemporal+coupling+of+cAMP+transporter+to+CFTR+chloride+channel+function+in+the+gut+epithelia.">Spatiotemporal coupling of cAMP transporter to CFTR chloride channel function in the gut epithelia.</a> Cell. 131, 940-951 (2007).</li><li>Li, C., Schuetz, J. D., Naren, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tobacco+carcinogen+NNK+transporter+MRP2+regulates+CFTR+function+in+lung+epithelia:+implications+for+lung+cancer.">Tobacco carcinogen NNK transporter MRP2 regulates CFTR function in lung epithelia: implications for lung cancer.</a> Cancer Lett. 292, 246-253 (2010).</li><li>Hall, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+C-terminal+motif+found+in+the+beta2-adrenergic+receptor,+P2Y1+receptor+and+cystic+fibrosis+transmembrane+conductance+regulator+determines+binding+to+the+Na+/H++exchanger+regulatory+factor+family+of+PDZ+proteins.">A C-terminal motif found in the beta2-adrenergic receptor, P2Y1 receptor and cystic fibrosis transmembrane conductance regulator determines binding to the Na+/H+ exchanger regulatory factor family of PDZ proteins.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 8496-8501 (1998).</li><li>Short, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+apical+PDZ+protein+anchors+the+cystic+fibrosis+transmembrane+conductance+regulator+to+the+cytoskeleton.">An apical PDZ protein anchors the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator to the cytoskeleton.</a> J. Biol. Chem. 273, 19797-19801 (1998).</li><li>Wang, S., Yue, H., Derin, R. B., Guggino, W. B., Li, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accessory+protein+facilitated+CFTR-CFTR+interaction,+a+molecular+mechanism+to+potentiate+the+chloride+channel+activity.">Accessory protein facilitated CFTR-CFTR interaction, a molecular mechanism to potentiate the chloride channel activity.</a> Cell. 103, 169-179 (2000).</li><li>Sun, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=E3KARP+mediates+the+association+of+ezrin+and+protein+kinase+A+with+the+cystic+fibrosis+transmembrane+conductance+regulator+in+airway+cells.">E3KARP mediates the association of ezrin and protein kinase A with the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator in airway cells.</a> J. Biol. Chem. 275, 29539-29546 (2000).</li><li>Cheng, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Golgi-associated+PDZ+domain+protein+modulates+cystic+fibrosis+transmembrane+regulator+plasma+membrane+expression.">A Golgi-associated PDZ domain protein modulates cystic fibrosis transmembrane regulator plasma membrane expression.</a> J. Biol. Chem. 277, 3520-3529 (1074).</li><li>Scott, R. O., Thelin, W. R., Milgram, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+PDZ+protein+regulates+the+activity+of+guanylyl+cyclase+C,+the+heat-stable+enterotoxin+receptor.">A novel PDZ protein regulates the activity of guanylyl cyclase C, the heat-stable enterotoxin receptor.</a> The Journal of biological chemistry. 277, 22934-22941 (1074).</li><li>Lee, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+regulation+of+cystic+fibrosis+transmembrane+conductance+regulator+by+competitive+interactions+of+molecular+adaptors.">Dynamic regulation of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator by competitive interactions of molecular adaptors.</a> The Journal of biological chemistry. 282, 10414-10422 (2007).</li><li>Gee, H. Y., Noh, S. H., Tang, B. L., Kim, K. H., Lee, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rescue+of+DeltaF508-CFTR+trafficking+via+a+GRASP-dependent+unconventional+secretion+pathway.">Rescue of DeltaF508-CFTR trafficking via a GRASP-dependent unconventional secretion pathway.</a> Cell. 146, 746-760 (2011).</li><li>Naren, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+the+study+of+intermolecular+and+intramolecular+interactions+regulating+CFTR+function.">Methods for the study of intermolecular and intramolecular interactions regulating CFTR function.</a> Met. Molecul. Med. 70, 175-186 (2002).</li><li>Li, C., Roy, K., Dandridge, K., Naren, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+assembly+of+cystic+fibrosis+transmembrane+conductance+regulator+in+plasma+membrane.">Molecular assembly of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator in plasma membrane.</a> The Journal of biological chemistry. 279, 24673-24684 (2004).</li><li>Li, C., Naren, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+CFTR+Interactome+in+the+Macromolecular+Complexes.">Analysis of CFTR Interactome in the Macromolecular Complexes.</a> Met. Molecul. Med. 741, 255-270 (2011).</li><li>Wu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+chemokine+receptor+CXCR2+macromolecular+complex+regulates+neutrophil+functions+in+inflammatory+diseases.">A chemokine receptor CXCR2 macromolecular complex regulates neutrophil functions in inflammatory diseases.</a> J. Biol. Chem. , (2011).</li></ol>

في هذا البروتوكول أثبتنا وسيلة لتجميع في المختبر والكشف عن CFTR التي تحتوي على مجمع الجزيئات يشير الى استخدام البروتين النقي (أو أجزاء بروتين) و / أو lysates خلية كما ذكرت سابقا 16-19،29،30. لتحقيق أفضل النتائج في النقاط التالية الحاسمة خلال عملية الإعداد تتطلب اهتم?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> pGEX4T-1 ناقلات </td><td> جنرال إلكتريك للرعاية الصحية </td><td> 28-9545-49 </td><td> سابقا أمرشام العلوم البيولوجية </td></tr><tr><td> pMAL-C2 ناقلات </td><td> نيو انغلاند BioLabs </td><td></td><td></td></tr><tr><td> pET30 ناقلات </td><td> EMD كيماويات </td><td> 69077-3 </td><td> سابقا Novagen </td></tr><tr><td> الجلوتاثيون الخرز الاغاروز </td><td> العلوم البيولوجية دينار بحريني </td><td> 554780 </td><td></td></tr><tr><td> أميلوز الراتنج </td><td> نيو انغلاند BioLabs </td><td> E8021S </td><td></td></tr><tr><td> الخرز تالون </td><td> Clontech </td><td> 635501 </td><td></td></tr><tr><td> انخفاض الجلوتاثيون </td><td> العلوم البيولوجية دينار بحريني </td><td> 554782 </td><td></tد&gt; </tr><tr><td> إيميدازول </td><td> الصياد </td><td> BP305-50 </td><td></td></tr><tr><td> الملتوز سكر الشعير </td><td> الصياد </td><td> BP684-500 </td><td></td></tr><tr><td> S-بروتين الاغاروز </td><td> EMD كيماويات </td><td> 69704-3 </td><td> سابقا Novagen </td></tr><tr><td> المضادة للعلم HRP </td><td> سيغما </td><td> A8592 </td><td></td></tr><tr><td> المضادة للمفتش CFTR </td><td> تفصيل </td><td> R1104 </td><td> خريطة موقع الاعتراف CFTR حاتمة في AA 722-734 </td></tr><tr><td> المضادة للمفتش MRP2 </td><td> Chemicon الدولية </td><td> MAB4148 </td><td> الآن جزء من ميليبور </td></tr></tbody></table> الجدول 2. كواشف ومعدات معينة.

in vitro analysis of pdz-dependent cftr macromolecular signaling complexes

الكيسي تصرف عبر الغشاء منظم التليف (CFTR)، وهي قناة كلوريد تقع في المقام الأول على الأغشية قمية من الخلايا الظهارية، يلعب دورا حاسما في توازن السوائل بطريق الظهارة 1-3. وقد تورط CFTR في اثنين من أهم الأمراض: التليف الكيسي (CF) (4) وإفرازي الإسهال 5. في قوات التحالف، ويتم تقليل توليف أو النشاط الوظيفي للقناة الكلور CFTR. هذا الاضطراب يصيب حوالي 1 في 2500 القوقازيين في الولايات المتحدة 6. كما تم الإفراط في النشاط CFTR المتورطين في حالات السموم التي يسببها الاسهال إفرازي (على سبيل المثال، بواسطة بكتيريا الكوليرا والحرارة كولاي معوي مستقر) الذي يحفز المخيم أو إنتاج المركب في القناة الهضمية 7. تراكم الأدلة تشير إلى وجود تفاعلات المادية والوظيفية بين CFTR وعدد متزايد من البروتينات الأخرى، بما في ذلك شركات النقل، والقنوات الأيونية، والمستقبلات، كاينيسات، phosphatases، إشارةوقد تبين أن الجزيئات جي، وعناصر هيكل الخلية، وهذه التفاعلات بين CFTR وبروتينات لها ملزم للمشاركة حاسمة في تنظيم CFTR بوساطة نقل أيون بطريق الظهارة في المختبر، وأيضا في الجسم الحي 8-19. في هذا البروتوكول، ونحن نركز فقط على الطرق التي تساعد في دراسة التفاعلات بين ذيل CFTR محطة الكربوكسيل، التي تمتلك عزر بروتين ملزمة [يشار إلى PSD95/Dlg1/ZO-1 (PDZ) عزر]، و وأشار مجموعة من البروتينات سقالة، والتي تحتوي على وحدة نمطية محددة وملزمة لمثل المجالات PDZ. حتى الآن، تم الإبلاغ عن عدة بروتينات مختلفة PDZ سقالة لربط محطة الذيل الكربوكسيل من CFTR مع الانتماءات المختلفة، مثل NHERF1، NHERF2، PDZK1، PDZK2، CAL (CFTR المرتبطة يجند)، Shank2، وغراسب 20-27. وعزر PDZ ضمن CFTR معترف بها من قبل البروتينات سقالة PDZ هو آخر أربعة الأحماض الأمينية في محطة C (أي، 1477، DTRL-1480 في CFTR الإنسان) 20. ومن المثير للاهتمام،يمكن CFTR ربط أكثر من واحد PDZ نطاق كل من NHERFs وPDZK1، وإن كان ذلك بدرجات متفاوتة من الانتماءات 22. وقد تبين أن هذا multivalency فيما يتعلق ملزم CFTR أن تكون ذات أهمية وظيفية، مما يوحي بأن PDZ البروتينات سقالة قد تسهل تشكيل الجزيئات CFTR يشير مجمعات لإشارات محددة / انتقائي وفعال في الخلايا 16-18. وقد وضعت فحوصات الكيمياء الحيوية متعددة لدراسة CFTR، التي تنطوي على تفاعلات البروتين، مثل مناعي المشترك، فحص المنسدلة، زوج من الحكمة فحص ملزم، اللونية الزوج الحكيم فحص ملزمة، وفحص الجزيئات المعقدة الجمعية 16-19،28،29 . هنا نركز على الإجراءات التفصيلية لتجميع عزر التي تعتمد على PDZ CFTR المحتوية على الجزيئات المعقدة في المختبر، والذي يستخدم على نطاق واسع من قبل مختبر لدينا لدراسة البروتين البروتين أو المجال نطاق التفاعلات التي تنطوي على CFTR 16-19،28،29.

Watch this Scientific Journal Video about In Vitro Analysis of PDZ-dependent CFTR Macromolecular Signaling Complexes at JoVE.com

In Vitro Analysis of PDZ-dependent CFTR Macromolecular Signaling Complexes

وقد أبلغ الكيسي تصرف عبر الغشاء منظم التليف (CFTR)، وقناة كلوريد الظهارية، للتفاعل مع مختلف البروتينات وتنظيم العمليات الخلوية الهامة، من بينها قد تم PDZ CFTR عزر بوساطة التفاعلات موثقة توثيقا جيدا. يصف هذا بروتوكول طرق التي قمنا بتطويرها لتجميع الجزيئات CFTR PDZ التي تعتمد على إشارات معقدة<em&gt; في المختبر</em&gt;.

في تحليل المختبر من PDZ التي تعتمد على المجمعات ضخم الجزيئات CFTR اشارة

Cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR), a chloride channel located primarily at the apical membranes of epithelial cells, plays a ...

Research

JoVE Journal

Biology

In Vitro Analysis of PDZ-dependent CFTR Macromolecular Signaling Complexes

Analysis of Schwann-astrocyte Interactions Using In Vitro Assays

Analysis of Schwann-astrocyte Interactions Using In Vitro Assays

تحليل شفان نجمية طريق التفاعلات في المختبر فحوصات

Schwann cells are one of the commonly used cells in repair strategies following spinal cord injuries. Schwann cells are capable of supporting axonal ...

Detection of Signaling Effector-Complexes Downstream of BMP4 Using in situ PLA, a Proximity Ligation Assay

Detection of Signaling Effector-Complexes Downstream of BMP4 Using in situ PLA, a Proximity Ligation Assay

كشف اشارة المستجيب - مجمعات التكرير والتسويق لاستخدام BMP4 في الموقع جيش التحرير الشعبى الصينى ، وربط الفحص القرب

BMPs are responsible for a wide range of developmental and biological effects. BMP receptors activate (phosphorylate) the Smad1/5/8 effectors, which then, ...

Rapid Genetic Analysis of Epithelial-Mesenchymal Signaling During Hair Regeneration

تحليل سريع لالوراثية طلائي-الوسيطة اشارة خلال تجديد الشعر

Hair follicle morphogenesis, a complex process requiring interaction between epithelia-derived keratinocytes and the underlying mesenchyme, is an ...

A High-content Imaging Workflow to Study Grb2 Signaling Complexes by Expression Cloning

سير عمل التصوير عالي المحتوى لدراسة Grb2 مجمعات اشارة عن طريق الاستنساخ التعبير

Signal  transduction by growth factor receptors is essential for cells to maintain  proliferation and differentiation and requires tight control. Signal  ...

Mechanical Stimulation-induced Calcium Wave Propagation in Cell Monolayers: The Example of Bovine Corneal Endothelial Cells

تحفيز الميكانيكية التي يسببها الكالسيوم انتشار الموجات في الخلية monolayers: مثال من الأبقار الخلايا البطانية القرنية

Intercellular communication is essential for the coordination of physiological processes between cells in a variety of organs and tissues, including the ...

Metabolic Labeling and Membrane Fractionation for Comparative Proteomic Analysis of Arabidopsis thaliana Suspension Cell Cultures

Metabolic Labeling and Membrane Fractionation for Comparative Proteomic Analysis of Arabidopsis thaliana Suspension Cell Cultures

الأيضية وصفها وغشاء التقطير للالمقارن تحليل البروتين من<em&gt; نبات الأرابيدوبسيس thaliana</em&gt; الثقافات تعليق خلية

Plasma membrane microdomains are features based on the physical properties of the lipid and sterol environment and have particular roles in signaling ...

Isolation and Culture of Adult Mouse Cardiomyocytes for Cell Signaling and in vitro Cardiac Hypertrophy

Isolation and Culture of Adult Mouse Cardiomyocytes for Cell Signaling and in vitro Cardiac Hypertrophy

العزلة وثقافة الكبار ماوس العضلية للاشارة الخليوي و<em&gt; في المختبر</em&gt; تضخم القلب

Technological advances have made genetically modified mice, including transgenic and gene knockout mice, an essential tool in many research fields. Adult ...

Measurement of Metabolic Rate in Drosophila using Respirometry

Measurement of Metabolic Rate in Drosophila using Respirometry

قياس معدل الأيض في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; باستخدام قياس التنفس

Metabolic disorders are a frequent problem affecting human health. Therefore, understanding the mechanisms that regulate metabolism is a crucial ...

In Vitro Reconstitution of Light-harvesting Complexes of Plants and Green Algae

In Vitro Reconstitution of Light-harvesting Complexes of Plants and Green Algae

في المختبر إعادة تشكيل مجمعات خفيفة حصاد النباتات والطحالب الخضراء

In plants and green algae, light is captured by the light-harvesting complexes (LHCs), a family of integral membrane proteins that coordinate chlorophylls ...

Functional Reconstitution and Channel Activity Measurements of Purified Wildtype and Mutant CFTR Protein

إعادة إعماره الوظيفية وآخر قناة قياسات تنقية Wildtype والمسخ CFTR البروتين

The Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator (CFTR) is a unique channel-forming member of the ATP Binding Cassette (ABC) superfamily of ...