Name: detection of micrornas in microglia by real-time pcr in normal cns and during neuroinflammation
Uploaded: 2012-07-23T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Detection of MicroRNAs in Microglia by Real-time PCR in Normal CNS and During Neuroinflammation at JoVE.com

وأيد العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة NS071039 R01-01A1 منحة بحثية.

1. عزل الخلايا الدبقية الصغيرة من الجهاز العصبي المركزي عادي يتم تنفيذ عزل الخلايا الدبقية الصغيرة كما وصفت سابقا مع بعض التعديلات 3. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد الأدوات اللازمة لتشريح ونضح: مقص، ...

<ol>
	<li>Tremblay, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Role+of+Microglia+in+the+Healthy+Brain.">The Role of Microglia in the Healthy Brain.</a> J. Neurosci. 31, 16064-16069 (2011).</li><li>Graeber, M. B., Li, W., Rodriguez, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+microglia+in+CNS+inflammation.">Role of microglia in CNS inflammation.</a> FEBS Lett. , (2011).</li><li>Ponomarev, E. D., Shriver, L. P., Maresz, K., Dittel, B. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglial+cell+activation+and+proliferation+precedes+the+onset+of+CNS+autoimmunity.">Microglial cell activation and proliferation precedes the onset of CNS autoimmunity.</a> J. Neurosci. Res. 81, 374-389 (2005).</li><li>Perruisseau-Carrier, C., Jurga, M., Forraz, N., McGuckin, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=miRNAs+stem+cell+reprogramming+for+neuronal+induction+and+differentiation.">miRNAs stem cell reprogramming for neuronal induction and differentiation.</a> Mol. Neurobiol. 43, 215-227 (2011).</li><li>McCoy, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+miRNAs+in+cytokine+signaling.">The role of miRNAs in cytokine signaling.</a> Front Biosci. 17, 2161-2171 (2010).</li><li>He, M., Xu, Z., Ding, T., Kuang, D. M., Zheng, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNA-155+regulates+inflammatory+cytokine+production+in+tumor-associated+macrophages+via+targeting+C/EBPbeta.">MicroRNA-155 regulates inflammatory cytokine production in tumor-associated macrophages via targeting C/EBPbeta.</a> Cell Mol. Immunol. 6, 343-352 (2009).</li><li>Ponomarev, E. D., Veremeyko, T., Barteneva, N., Krichevsky, A. M., Weiner, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNA-124+promotes+microglia+quiescence+and+suppresses+EAE+by+deactivating+macrophages+via+the+C/EBP-alpha-PU.1+pathway.">MicroRNA-124 promotes microglia quiescence and suppresses EAE by deactivating macrophages via the C/EBP-alpha-PU.1 pathway.</a> Nat. Med. 17, 64-70 (2011).</li><li>Basu, S., Campbell, H. M., Dittel, B. N., Ray, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+Specific+Cell+Population+by+Fluorescence+Activated+Cell+Sorting+(FACS).">Purification of Specific Cell Population by Fluorescence Activated Cell Sorting (FACS).</a> J. Vis. Exp. (41), e1546-3791 (2010).</li><li>Gabriely, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNA+21+promotes+glioma+invasion+by+targeting+matrix+metalloproteinase+regulators.">MicroRNA 21 promotes glioma invasion by targeting matrix metalloproteinase regulators.</a> Mol. Cell Biol. 28, 5369-5380 (2008).</li><li>Caffarelli, E., Filetici, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epigenetic+regulation+in+cancer+development.">Epigenetic regulation in cancer development.</a> Front Biosci. 17, 2682-2694 (2011).</li><li>Cardona, A. E., Huang, D., Sasse, M. E., Ransohoff, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+murine+microglial+cells+for+RNA+analysis+or+flow+cytometry.">Isolation of murine microglial cells for RNA analysis or flow cytometry.</a> Nat. Protoc. 1, 1947-1951 (2006).</li><li>Gordon, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+magnetic+separation+method+for+high-yield+isolation+of+pure+primary+microglia.">A simple magnetic separation method for high-yield isolation of pure primary microglia.</a> J. Neurosci. Methods. 194, 287-296 (2011).</li><li>Moltzahn, F., Hunkapiller, N., Mir, A. A., Imbar, T., Blelloch, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+Throughput+MicroRNA+Profiling:+Optimized+Multiplex+qRT-PCR+at+Nanoliter+Scale+on+the+Fluidigm+Dynamic+ArrayTM+IFCs.">High Throughput MicroRNA Profiling: Optimized Multiplex qRT-PCR at Nanoliter Scale on the Fluidigm Dynamic ArrayTM IFCs.</a> J. Vis. Exp. (54), e2552 (2011).</li></ol>

مؤخرا اعطيت اهتماما كبيرا لدى الخلايا الدبقية الصغيرة وإشراك هذه الخلايا في العديد من الأمراض المرتبطة neuroinflammation وتنكس عصبي. وبالإضافة إلى ذلك، نما دور microRNAs في تمايز الخلايا المناعية والسرطان بشكل كبير خلال السنوات القليلة الماضية 5،10. وذكرت ونحن في السابق دو...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> 1X PBS </td><td> GIBCO </td><td> 14190 </td><td> ويمكن أن تكون مستعدة من المكونات الجافة في درجة الحموضة، ومختبر: 7،2-7،4 </td></tr><tr><td> 10X PBS </td><td> الحرارية العلمية </td><td> SH30258.02 </td><td> ويمكن أن تكون مستعدة من المكونات الجافة في درجة الحموضة، ومختبر: 7،2-7،4 </td></tr><tr><td> DMEM؛ FBS </td><td> GBCO </td><td> 11965، 10438 </td><td></td></tr><tr><td> miRVana عدة </td><td> إينفيتروجن </td><td> AM1561 </td><td></td></tr><tr><td> Percoll </td><td> سيغما </td><td> P4937-500 مل </td><td> يتم تحضير 100 مل من Percoll 100٪ عن طريق خلط 10 مل من برنامج تلفزيوني 10X و 90 مل من Percoll من سيجما. 50 مل من Percoll 70٪أعدت عن طريق خلط من 35 مل من Percoll 100٪ و 15 مل من DMEM يتم تحضير 50 ​​مل من Percoll 40٪ بحلول 20 مل خلط Percoll 100٪ و 30 مل من برنامج تلفزيوني 1X </td></tr><tr><td> موج 35-55 الببتيد </td><td> AnaSpec المؤتمر الوطني العراقي </td><td> 60130-5 </td><td></td></tr><tr><td> CFA </td><td> DIFCO </td><td> 263810 </td><td></td></tr><tr><td> السعال الديكي السمية </td><td> سيغما </td><td> P7208 </td><td></td></tr><tr><td> FCR حجب الأضداد </td><td> العلوم البيولوجية دينار بحريني </td><td> 553142 </td><td> استنساخ 2.4G2 </td></tr><tr><td> مكافحة CD11b - خريطة موقع PE </td><td> العلوم البيولوجية دينار بحريني </td><td> 553311 </td><td> يمكن استخدامها مع fluorophores مختلفة (على سبيل المثال AF488) </td></tr><tr><td> مكافحة CD45-APC-Cy7 MABS </td><td> Biolegend </td><td> 103116 </td><td> يمكن استخدامها مع fluorophores مختلفة (مثل APC) </td></tr><tr><td> Paraformaldehyde (16٪) </td><td> شركة EMS </td><td> 15710 </td><td> تمييع 01:15 في برنامج تلفزيوني 1X </td></tr><tr><td> 15٪ TBE-اليوريا جل </td><td> الحياة تكنولوجيز </td><td> EC68855BOX </td><td></td></tr><tr><td> TaqMan النسخ العكسي MicroRNA كيت </td><td> الحياة تكنولوجيز المحدودة </td><td> 4366596 </td><td></td></tr><tr><td> TaqMan PCR العالمي ماستر ميكس </td><td> الحياة تكنولوجيز المحدودة </td><td> 4304437 </td><td></td></tr><tr><td> فحوصات MicroRNA TaqMan MMU-مير 124a </td><td> الحياة تكنولوجيز المحدودة </td><td> 4427975 رقم 001182 </td><td></td></tr><tr><td> فحوصات MicroRNA TaqMan snoRNA-55 </td><td> الحياة تكنولوجيز المحدودة </td><td> 4427975 رقم 001228 </td><td></td></tr><tr><td> Nuclease خالية من المياه </td><td> الحياة تكنولوجيز المحدودة </td><td> AM9937 </td><td> Nuclease خالية من المياه </td></tr><tr><td> 384 لوحة واضحة تماما رد فعل بصري </tد&gt; <td> الحياة تكنولوجيز </td><td> 4309849 </td><td> يمكن أن تكون بديلا مع لوحات أخرى (مثل لوحة 96 أيضا) في مختلف الصكوك PCR في الوقت الحقيقي </td></tr><tr><td> الخالط Dounce (15 مل) </td><td> ويتون منتجات العلم. </td><td> 358044 </td><td> تفلون / زجاج </td></tr><tr><td> 40 خلية النايلون μ مصفاة </td><td> صقر </td><td> 352340 </td><td></td></tr><tr><td> كبير الطرد المركزي </td><td> Sorval </td><td> RT 6000B </td><td> الدوار قطرها 18.5 سم </td></tr><tr><td> صغير الطرد المركزي </td><td> إيبندورف </td><td> 5415 R </td><td> الدوار قطرها 6.5 سم </td></tr><tr><td> في الوقت الحقيقي PCR الصك </td><td> الحياة تكنولوجيز </td><td> AB 7900 HT </td><td> يمكن أن تكون بديلا مع غيرها من الصكوك </td></tr><tr><td> تدفق عداد الكريات </td><td> دينار بحريني Biosciencess </td><td> LSR الثاني </td><td> يمكن أن تكون بديلا مع غيرها من الصكوك </TD&gt; </tr><tr><td> FACS </td><td> العلوم البيولوجية دينار بحريني </td><td> FACSAria </td><td> يمكن أن تكون بديلا مع غيرها من الصكوك </td></tr><tr><td> Nanodrop طيفي </td><td> الحرارية العلمية </td><td> Nanodrop 1000 </td><td></td></tr></tbody></table>

detection of micrornas in microglia by real-time pcr in normal cns and during neuroinflammation

الخلايا الدبقية الصغيرة هي خلايا من سلالة الدم النخاعي الموجودة في الجهاز العصبي المركزي (CNS) 1. هذه الخلايا تلعب دورا هاما في أمراض العديد من الأمراض المرتبطة neuroinflammation مثل التصلب المتعدد (MS) 2. الخلايا الدبقية الصغيرة في الجهاز العصبي المركزي العادية التعبير عن بلعم علامة CD11b ويحمل النمط الظاهري يستريح بالإعراب عن مستويات منخفضة من علامات تفعيل مثل CD45. خلال أحداث مرضية في الجهاز العصبي المركزي، تصبح الخلايا الدبقية الصغيرة تفعيلها على النحو الذي يحدده upregulation من CD45 وعلامات أخرى 3. ليست هي العوامل التي تؤثر على الخلايا الدبقية الصغيرة النمط الظاهري وظائف في الجهاز العصبي المركزي مدروسة. MicroRNAs (miRNAs) هي عائلة متزايد من الجزيئات المحمية (~ 22 النيوكليوتيدات طويلة) التي تشارك في العديد من العمليات الفيزيولوجية الطبيعية مثل نمو الخلايا والتمايز (4) والأمراض مثل التهاب 5. MiRNAs downregulate التعبير عن جينات معينة مستهدفة من قبل متواليات مكمل ملزم للالأشعة تحت الحمراء mRNAs وتلعب دورا مهما في تنشيط خلايا المناعة الفطرية بما في ذلك الضامة (6) والخلايا الدبقية الصغيرة 7. من أجل التحقيق ميرنا بوساطة المسارات التي تحدد النمط الظاهري دبقية صغيرة، وظيفة بيولوجية، وعلى التمييز بين الخلايا الدبقية الصغيرة من أنواع أخرى من الضامة، فإنه من المهم إجراء تقييم كمي للتعبير عن microRNAs خاصة في مجموعات فرعية مختلفة من الجهاز العصبي المركزي الخلايا الدبقية الصغيرة المقيمة. الطرق الشائعة لقياس التعبير عن miRNAs في الجهاز العصبي المركزي وتشمل PCR الكمي من الأنسجة العصبية كله وتهجين موضعية. ومع ذلك، PCR الكمي من جناسة الأنسجة كله لا يسمح بتقييم التعبير عن ميرنا في الخلايا الدبقية الصغيرة، التي لا تمثل سوى 5-15٪ من خلايا الأنسجة العصبية. التهجين في الموقع يسمح بتقييم التعبير microRNA في أنواع معينة من الخلايا في المقاطع الأنسجة، ولكن هذه الطريقة ليست كمية تماما. نحن في هذا التقرير وصفا لكمية وSENSمكنته طريقة للكشف عن ميرنا من قبل في الوقت الحقيقي PCR في الخلايا الدبقية الصغيرة المعزولة من الجهاز العصبي المركزي أو العادي خلال neuroinflammation باستخدام التهاب الدماغ والنخاع الذاتية التجريبية (EAE)، نموذج الفأر لمرض التصلب العصبي المتعدد. والطريقة الموصوفة أن تكون مفيدة لقياس مستوى من التعبير عن microRNAs في الخلايا الدبقية الصغيرة في الجهاز العصبي المركزي أو العادي خلال neuroinflammation المرتبطة بأمراض مختلفة بما في ذلك مرض التصلب العصبي المتعدد والسكتة الدماغية وإصابات الصدمة، ومرض الزهايمر وأورام المخ.

Watch this Scientific Journal Video about Detection of MicroRNAs in Microglia by Real-time PCR in Normal CNS and During Neuroinflammation at JoVE.com 

Detection of MicroRNAs in Microglia by Real-time PCR in Normal CNS and During Neuroinflammation (Video) | JoVE 

الخلايا الدبقية الصغيرة يقيمون الضامة التي تقدم في السطر الأول من مراقبة الدفاع والمناعة في الجهاز العصبي المركزي. MicroRNAs هي جزيئات التنظيمية التي تلعب دورا هاما في العمليات الفسيولوجية بما في ذلك العديد من التنشيط وتمايز الضامة. في هذه المقالة، نحن تصف طريقة لقياس microRNAs في الخلايا الدبقية الصغيرة.

الكشف عن MicroRNAs في الخلايا الدبقية الصغيرة من قبل في الوقت الحقيقي PCR في الجهاز العصبي المركزي للمعلمين وأثناء Neuroinflammation

Microglia are cells of the myeloid lineage that reside in the central nervous system (CNS)1. These cells play an important role in pathologies of many ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Detection of MicroRNAs in Microglia by Real-time PCR in Normal CNS and During Neuroinflammation

Real-time Imaging of Heterotypic Platelet-neutrophil Interactions on the Activated Endothelium During Vascular Inflammation and Thrombus Formation in Live Mice

Real-time Imaging of Heterotypic Platelet-neutrophil Interactions on the Activated Endothelium During Vascular Inflammation and Thrombus Formation in Live Mice (Video) | JoVE 

في الوقت الحقيقي التصوير من التفاعلات صفائح الدم، العدلات غيروي على البطانة الوعائية التهاب المنشط خلال تشكيل خثرة في والفئران الحية

Interaction of activated platelets and leukocytes (mainly neutrophils) on the activated endothelium mediates thrombosis and vascular inflammation.1,2 ...

Culturing Microglia from the Neonatal and Adult Central Nervous System

Culturing Microglia from the Neonatal and Adult Central Nervous System (Video) | JoVE 

الخلايا الدبقية الصغيرة زراعة من الجهاز العصبي المركزي حديثي الولادة والكبار

Microglia are the resident macrophage-like cells of the central nervous system (CNS) and, as such, have critically important roles in physiological and ...

Real-time Imaging of Endothelial Cell-cell Junctions During Neutrophil Transmigration Under Physiological Flow

Real-time Imaging of Endothelial Cell-cell Junctions During Neutrophil Transmigration Under Physiological Flow Video (Video) | JoVE

التصوير في الوقت الحقيقي من غشائي المفارق خلايا العدلات خلية أثناء التهجير تحت الفسيولوجية تدفق

During inflammation, leukocytes leave the circulation and cross the endothelium to fight invading pathogens in underlying tissues. This process is known ...

Real-time Imaging of Myeloid Cells Dynamics in ApcMin/+ Intestinal Tumors by Spinning Disk Confocal Microscopy

Real-time Imaging of Myeloid Cells Dynamics in ApcMin/+ Intestinal Tumors by Spinning Disk Confocal Microscopy Video (Video) | JoVE

التصوير في الوقت الحقيقي من خلايا الدم النخاعي في ديناميات<em&gt; APC<sup&gt; مين / +</sup</em&gt; الأورام المعوية التي كتبها غزل القرص متحد البؤر المجهر

Myeloid cells are the most abundant immune cells within tumors and have been shown to promote tumor progression. Modern intravital imaging techniques ...

Simultaneous Quantification of T-Cell Receptor Excision Circles (TRECs) and K-Deleting Recombination Excision Circles (KRECs) by Real-time PCR

Simultaneous Quantification of T-Cell Receptor Excision Circles TRECs and K-Deleting Recombination Excision Circles KRECs by Real-time PCR Video (Video) | JoVE

الكمي في وقت واحد T-خلية الدوائر مستقبلات الختان (TRECs) والدوائر K-حذف إعادة التركيب الختان (KRECs) من قبل في الوقت الحقيقي PCR

T-cell receptor excision circles (TRECs) and K-deleting recombination excision circles (KRECs) are circularized DNA elements formed during recombination ...

High-throughput Quantitative Real-time RT-PCR Assay for Determining Expression Profiles of Types I and III Interferon Subtypes

High-throughput Quantitative Real-time RT-PCR Assay for Determining Expression Profiles of Types I and III Interferon Subtypes Video (Video) | JoVE

عالية الإنتاجية الكمي في الوقت الحقيقي RT-PCR الفحص لتحديد ملامح التعبير من أنواع الأول والثالث الانترفيرون الأنواع الفرعية

Described in this report is a qRT-PCR assay for the analysis of seventeen human IFN subtypes in a 384-well plate format that incorporates highly specific ...

Imaging Neutrophils and Monocytes in Mesenteric Veins by Intravital Microscopy on Anaesthetized Mice in Real Time

Imaging Neutrophils and Monocytes in Mesenteric Veins by Intravital Microscopy on Anaesthetized Mice in Real Time Video (Video) | JoVE

التصوير العدلات وحيدات في مساريقي الأوردة التي كتبها حيوي داخلي المجهري على الفئران مخدرة في الوقت الحقيقي

Efficient immune response is dependent on rapid mobilization of blood leukocytes to the site of infection or injury. Investigating leukocyte migration in ...

Genotyping of Staphylococcus aureus by Ribosomal Spacer PCR (RS-PCR)

Genotyping of Staphylococcus aureus by Ribosomal Spacer PCR RS-PCR Video (Video) | JoVE

التنميط الجيني ل<em&gt; المكورات العنقودية الذهبية</em&gt; من جانب خاص بالريبوسوم فاصل PCR (RS-PCR)

The ribosomal spacer PCR (RS-PCR) is a highly resolving and robust genotyping method for S. aureus that allows a high throughput at moderate costs and is, ...

High-throughput Detection of Respiratory Pathogens in Animal Specimens by Nanoscale PCR

High-throughput Detection of Respiratory Pathogens in Animal Specimens by Nanoscale PCR Video (Video) | JoVE

كشف الإنتاجية العالية للجهاز التنفسي مسببات الأمراض في العينات الحيوانية التي كتبها النانو PCR

Nanoliter scale real-time PCR uses spatial multiplexing to allow multiple assays to be run in parallel on a single plate without the typical drawbacks of ...

Real-time Quaking-induced Conversion Assay for Detection of CWD Prions in Fecal Material

Real-time Quaking-induced Conversion Assay for Detection of CWD Prions in Fecal Material Video (Video) | JoVE

في الوقت الحقيقي مهتز الناجمة عن تحويل الفحص للكشف عن البريونات CWD في المواد البرازية

The RT-QuIC technique is a sensitive in vitro cell-free prion amplification assay based mainly on the seeded misfolding and aggregation of recombinant ...