Name: modeling colitis-associated cancer with azoxymethane (aom) and dextran sulfate sodium (dss)
Uploaded: 2012-09-11T13:00:00
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Diese Arbeit wurde zum Teil durch DK089016 und L30 RR030244 (MAC), CA153036 (AS) und P30-DK52574 (der Washington University Digestive Diseases Forschung Core) finanziert. AIT war ein Howard Hughes Medical Institute Medical Research Training Fellow.

Ein. Colitis-assoziierten Cancer Induction <ol><li> Beiseite Käfigen von Geschlecht und Alter abgestimmt 6-8 Wochen alten Mäusen für Versuchs-und Kontrollgruppen verwendet werden. Mäuse können individuell mit Schwanz Markierungen oder Ohr-Clips markiert werden. </li><li> Am Tag 0 Rekord Baseline Gewichten und injizieren Jede Maus intraperitoneal (IP) mit 10 mg / kg des AOM funktionierende Lösung (1 mg / ml in isotonischer Kochsalzlösung, von 10 mg / ml Stammlösung in dH2O verdünnt bei -20 ° C) . Erfahrungsge...

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	<li>Ekbom, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ulcerative+colitis+and+colorectal+cancer.+A+population-based+study.">Ulcerative colitis and colorectal cancer. A population-based study.</a> N. Engl. J. Med. 323, 1228-1233 (1990).</li><li>Terzic, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+and+colon+cancer.">Inflammation and colon cancer.</a> Gastroenterology. 138, 2101-2114 (2010).</li><li>Ullman, T. A., Itzkowitz, S. 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Behandlung von Mäusen mit AOM und DSS rasch und wirksam Modelle menschlichen ulcerosa-assoziierten Krebses. Hypothesen bezüglich erbliche Faktoren, Colitis-assoziierten Krebsarten kann leicht mit gentechnisch veränderten Mäusen studiert werden. 13, 16 Alternativ kann die pharmakologische Wirkung von Targets in ulcerosa-assoziiertem Krebs durch Verwendung Wildtyp-Mäuse können studiert werden. Während dieses Modell wird von Interessenten in der Studie von Kolontumor Entwicklu...

<table border="1"><tbody><tr><td> Name des Reagenzes </td><td> Firma </td><td> Katalog-Nummer </td><td> Kommentare </td></tr><tr><td> C57BL/6J Mäuse </td><td> Jackson Laboratory </td><td> 000664 </td><td></td></tr><tr><td> Azoxymethan (AOM) </td><td> Sigma Aldrich </td><td> A5486-100MG </td><td> Stammlösung: verdünnt auf 10 mg / ml in destilliertem Wasser bei -20 ° C als 0,5 gehalten werden - 1 ml Aliquots. Arbeitslösung: verdünnen Lager zu 1 mg / ml in isotonischer (0,9%) Kochsalzlösung </td></tr><tr><td> Dextransulfat Natrium (DSS) </td><td> TdB Consultancy </td><td> DB001 </td><td> MW 40 kDa (36-50 kDa Zubereitungen aus anderen Quellen sind akzeptabel; Das gleiche viel für einen einzigen Experiment verwendet werden) 6 </td></tr><tr><td> Coloviewminiendoscopic System </td><td> Karl Storz </td><td> Mehrere </td><td> Siehe Becker et al. Für detaillierte Erklärung der Ausrüstung und Einrichtung. 11 </td></tr><tr><td> TPP Schnelle FilterMax 500 ml Flasche-Filter, 0,22 um PES </td><td> Midwest Scientific </td><td> TP99500 </td><td> Jede Standard-Gewebekultur-Filter ist akzeptabel </td></tr><tr><td> Ethylalkohol 200 Proof ASC / USP </td><td> Pharmako-Aaper (oder andere) </td><td> 11ACS200 </td><td> Verdünnen, um 70% in destilliertem Wasser </td></tr><tr><td> Isofluran, USP </td><td> Butler Animal Health Versorgung </td><td> 4029405 </td><td> Bewegen Sie die Maus im Glas mit Gaze oder einem kleinen Tuch in Narkose eingeweicht </td></tr><tr><td> 18G Gerade Gavage Needle </td><td> Braintree Scientific </td><td> N-008 </td><td></td></tr><tr><td> Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS) </td><td> SigmaAldrich </td><td> P5493 </td><td> Auf 1x verdünnen (0,01 M) in destilliertem Wasser </td></tr><tr><td> Kalte Tray (Tissue Tek II Cold Plate) </td><td> Fisher Scientific </td><td> NC9491941 </td><td> Lagerung bei -20 ° C </td></tr><tr><td> ImageJ Software </td><td> NIH (kostenloser Download) </td><td></td><td> <a href="http://rsbweb.nih.gov/ij/" target="_blank">http://rsbweb.nih.gov/ij/</a> </td></tr><tr><td> Formaldehyd (37%) </td><td> Fisher Scientific </td><td> F79-500 </td><td> Verdünnt auf 10% in PBS </td></tr><tr><td> BD Bacto Agar </td><td> Fisher Scientific </td><td> DF0140-01-0 </td><td> Verwenden Kochplatte bis 2% ige Lösung in destilliertem Wasser zu schaffen </td></tr><tr><td> Miltex Eye Dressing Forceps </td><td> MedPlus Inc. </td><td> 18-780 </td><td></td></tr><tr><td> Miltex Augenschere </td><td> MedPlus Inc. </td><td> 18-1430 </td> &lt;td&gt; Curved Punkten verhindern Schäden an Dickdarm beim Öffnen. </td></tr><tr><td> Alcianblau 8GX (Pulver) </td><td> Sigma Aldrich </td><td> A5268 </td><td> 1 g Pulver auf 100 ml 3% ige Essigsäure (3 ml Eisessig + 97 ml destilliertem Wasser) </td></tr><tr><td> 1 ml Tuberkulin-Spritze mit angehängten 26 G x 3/8 in intradermalen Nadel Fase </td><td> BD </td><td> 305946 </td><td> Zur Injektion von AOM </td></tr></tbody></table>

modeling colitis-associated cancer with azoxymethane (aom) and dextran sulfate sodium (dss)

Individuen mit entzündlichen Darmerkrankungen (IBD), wie Morbus Crohn (CD) oder Colitis ulcerosa (UC) sind mit einem erhöhten Risiko der Entwicklung von Darmkrebs (CRC) über gesunden Individuen. Dieses Risiko ist proportional zur Dauer und Ausmaß der Krankheit, mit einer kumulativen Inzidenz so hoch wie 30% bei Personen mit langjähriger UC mit der weit verbreiteten Kolon Engagement. 1 Colonic Dysplasie in IBD und Colitis assoziiertem Krebs (CAC) wird angenommen, dass als Folge entwickeln von wiederholten Zyklen von Epithelzellen Verletzung und Reparatur während diese Zellen in einer chronisch entzündlichen Zytokinmilieu gebadet werden. 2 Während spontane und Colitis-assoziierten Krebserkrankungen die Qualität des Seins Adenokarzinome Aktien, wird die Reihenfolge der zugrunde liegenden molekularen Ereignisse glaubte, anders zu sein. 3 Diese Unterscheidung argumentiert, die Notwendigkeit spezifischer Tiermodelle CAC. Mehrere Mausmodellen derzeit für das Studium der CAC existieren. Dextransulfat Natriumum (DSS), ein Mittel mit direkten toxischen Wirkungen auf das Darmepithel, können im Trinkwasser an Mäuse in mehreren Zyklen, um eine chronische entzündliche Zustand erzeugen verabreicht werden. Bei ausreichender Dauer, werden einige dieser Mäuse entwickeln Tumoren. 4 Tumor Entwicklung in diesem Modell wird beschleunigt, wenn in einer pro-karzinogene verabreicht wird. Hierzu gehören Mäuse mit genetischen Mutationen in der Tumorgenese von Pathways (APC, p53, Msh2) sowie Mäuse mit genotoxischen Agentien (Azoxymethan [AOM], 1,2-Dimethylhydrazin [DMH]). 5 vorbehandelt Die Kombination von DSS mit AOM als Modell für Colitis assoziiertem Krebs hat Popularität für seine Reproduzierbarkeit, Potenz, niedriger Preis, und Benutzerfreundlichkeit gewonnen. Obwohl sie einen gemeinsamen Mechanismus haben, hat AOM sich als wirksamer und stabil in Lösung als DMH. Während Tumor-Entwicklung in anderen Modellen erfordert in der Regel mehrere Monate, entwickeln Mäuse mit AOM injiziert und anschließend mit DSS behandelt ausreichende Tumoren in einems weniger als 7-10 Wochen. 6, 7 Schließlich AOM und DSS kann bei Mäusen jeder genetischen Hintergrund (knock out, transgene, etc.) ohne Kreuzungen werden zu einer bestimmten tumorigenen Belastung verabreicht werden. Hier zeigen wir, ein Protokoll für die Entzündung angetriebenen Kolon Tumorgenese in Mäusen unter Verwendung einer einzigen Injektion von AOM gefolgt von drei Sieben-Tage-Zyklen von DSS über einen Zeitraum von 10 Wochen. Dieses Modell induziert Tumoren mit histologischen und molekularen Veränderungen stark ähneln denjenigen vorkommenden menschlichen CAC und bietet eine sehr wertvolles Modell für die Untersuchung von Onkogenese und Chemoprävention bei dieser Krankheit. 8

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Modeling Colitis-Associated Cancer with Azoxymethane AOM and Dextran Sulfate Sodium DSS

Wir demonstrieren ein Protokoll, bei dem Verabreichung des genotoxischen Agens Azoxymethan (AOM) durch drei Zyklen des pro-entzündliches Mittel Dextransulfat-Natrium (DSS) rasch und konsequent befolgt erzeugt Dickdarmtumoren in Mäusen mit morphologischen und molekularen Ähnlichkeiten mit den in menschlichen ulcerosa angesehen -assoziierten Krebserkrankungen.

Modeling Colitis-assoziierten Krebs mit Azoxymethan (AOM) und Dextransulfat Natrium (DSS)

Individuals with inflammatory bowel disease (IBD), such as Crohn's disease (CD) or ulcerative colitis (UC) are at increased risk of developing colorectal ...

Research

JoVE Journal

Medicine

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Forschung

Medizin

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