Name: modeling colitis-associated cancer with azoxymethane (aom) and dextran sulfate sodium (dss)
Uploaded: 2012-09-11T13:00:00
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Este trabajo fue financiado en parte por DK089016 y RR030244 L30 (MAC), CA153036 (AS), y P30 DK52574-(to the Core Washington University Digestive Diseases Research). AIT era un Howard Hughes Medical Institute Medical Research Fellow de Formación.

1. Colitis asociada al cáncer de inducción <ol><li> Ponga a un lado las jaulas de sexo y edad, los ratones 6-8 semanas de edad que se utilizarán para los grupos experimental y control. Los ratones pueden ser etiquetados individualmente con marcas de cola o clips de oído. </li><li> En el día 0, los pesos iniciales de registro y se inyecta por vía intraperitoneal a cada ratón (IP) con 10 mg / kg de solución AOM de trabajo (1 mg / ml en solución salina isotónica, diluido a partir de 10 mg / ml de solución madr...

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	<li>Ekbom, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ulcerative+colitis+and+colorectal+cancer.+A+population-based+study.">Ulcerative colitis and colorectal cancer. A population-based study.</a> N. Engl. J. Med. 323, 1228-1233 (1990).</li><li>Terzic, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+and+colon+cancer.">Inflammation and colon cancer.</a> Gastroenterology. 138, 2101-2114 (2010).</li><li>Ullman, T. A., Itzkowitz, S. 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Relevance to colitis-associated neoplasia in the human: a study of histopathology, B-catenin and p53 expression and the role of inflammation.</a> Carcinogenesis. 21, 757-768 (2000).</li><li>Yoshida, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+forkhead+box+M1+transcription+factor+contributes+to+the+development+and+growth+of+mouse+colorectal+cancer.">The forkhead box M1 transcription factor contributes to the development and growth of mouse colorectal cancer.</a> Gastroenterology. 132, 1420-1431 (2007).</li><li>Suzuki, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strain+differences+in+the+susceptibility+to+azoxymethane+and+dextran+sodium+sulfate-induced+colon+carcinogenesis+in+mice.">Strain differences in the susceptibility to azoxymethane and dextran sodium sulfate-induced colon carcinogenesis in mice.</a> Carcinogenesis. 27, 162-169 (2006).</li><li>Mahler, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+susceptibility+of+inbred+mouse+strains+to+dextran+sulfate+sodium-induced+colitis.">Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis.</a> Am. 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El tratamiento de ratones con OMA y DSS rápida y efectivamente los modelos humanos cáncer de colitis asociada. Hipótesis con respecto a factores hereditarios contribuyen a la colitis cánceres asociados pueden ser fácilmente estudiado con ratones genéticamente modificados. 13, 16 Alternativamente, el efecto de objetivos farmacológicos en colitis asociada a cáncer puede ser estudiada mediante el empleo de ratones de tipo salvaje. Si bien este modelo es muy valorado por los i...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nombre del reactivo </td><td> Empresa </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentarios </td></tr><tr><td> Ratones C57BL/6J </td><td> Jackson Laboratory </td><td> 000664 </td><td></td></tr><tr><td> Azoximetano (AOM) </td><td> Sigma Aldrich </td><td> A5486-100MG </td><td> Solución stock: diluido a 10 mg / ml en agua destilada que se mantuvo a -20 ° C como 0,5 a 1 ml de alícuotas. Solución de trabajo: diluir stock a 1 mg / ml en solución salina isotónica (0,9%) de solución salina </td></tr><tr><td> El dextrano sulfato de sodio (DSS) </td><td> TDB Consultoría </td><td> DB001 </td><td> MW 40 kDa (36-50 kDa preparaciones procedentes de otras fuentes son aceptables; El mismo lote se debe utilizar para un único experimento) 6 </td></tr><tr><td> Coloviewsistema miniendoscopic </td><td> Karl Storz </td><td> Múltiple </td><td> Ver Becker et al. Para la explicación detallada de los equipos y la configuración. 11 </td></tr><tr><td> TPP Rapid FilterMax 500 ml Botella-Filter, 0,22 m PES </td><td> Midwest Scientific </td><td> TP99500 </td><td> Cualquier filtro de cultivo de tejidos estándar es aceptable </td></tr><tr><td> Alcohol etílico 200 Proof ASC / USP </td><td> Fármaco-AAPER (u otro) </td><td> 11ACS200 </td><td> Diluir hasta 70% en agua destilada </td></tr><tr><td> USP isoflurano, </td><td> Mayordomo Animal Health Supply </td><td> 4029405 </td><td> Coloque el ratón en el tarro de cristal con una gasa o un paño empapado en anestésico pequeño </td></tr><tr><td> 18G Aguja Recta Gavage </td><td> Braintree Scientific </td><td> N-008 </td><td></td></tr><tr><td> Tampón fosfato salino (PBS) </td><td> SigmaAldrich </td><td> P5493 </td><td> Diluir a 1X (0,01 M) en agua destilada </td></tr><tr><td> Bandeja fría (Tissue Tek II Placa Fría) </td><td> Fisher Scientific </td><td> NC9491941 </td><td> Almacenar a -20 ° C </td></tr><tr><td> ImageJ software </td><td> NIH (descarga gratuita) </td><td></td><td> <a href="http://rsbweb.nih.gov/ij/" target="_blank">http://rsbweb.nih.gov/ij/</a> </td></tr><tr><td> Formaldehído (37%) </td><td> Fisher Scientific </td><td> F79-500 </td><td> Diluir a 10% en PBS </td></tr><tr><td> BD Bacto Agar </td><td> Fisher Scientific </td><td> DF0140-01-0 </td><td> Use placa calefactora para crear 2% de solución en agua destilada </td></tr><tr><td> Miltex Pinza Dressing Eye </td><td> MedPlus Inc. </td><td> 18-780 </td><td></td></tr><tr><td> Miltex Tijeras oculares </td><td> MedPlus Inc. </td><td> 18-1430 </td> &lt;td&gt; puntos curvos evitar daños en dos puntos durante la apertura. </td></tr><tr><td> Azul de Alcian 8GX (polvo) </td><td> Sigma Aldrich </td><td> A5268 </td><td> Añadir 1 g de polvo a 100 ml de 3% de ácido acético (3 ml de ácido acético glacial + 97 ml de agua destilada) </td></tr><tr><td> 1 ml jeringa de tuberculina con adjunto x 26 G 3/8 de aguja intradérmica bisel </td><td> BD </td><td> 305946 </td><td> Para la inyección de AOM </td></tr></tbody></table>

modeling colitis-associated cancer with azoxymethane (aom) and dextran sulfate sodium (dss)

Los individuos con enfermedad inflamatoria intestinal (EII), tales como la enfermedad de Crohn (CD) o colitis ulcerativa (UC) están en mayor riesgo de desarrollar cáncer colorrectal (CRC) sobre los individuos sanos. Este riesgo es proporcional a la duración y extensión de la enfermedad, con una incidencia acumulada de hasta un 30% en los individuos con larga UC con afectación colónica generalizada. 1 displasia de colon en la EII y la colitis asociada a cáncer (CAC) se cree que se desarrollan como resultado de ciclos repetidos de lesión de la célula epitelial y la reparación, mientras que estas células se bañan en un medio de citoquinas inflamatoria crónica. 2 Mientras que los cánceres espontáneos y la colitis asociada a compartir la calidad de los adenocarcinomas siendo, la secuencia de eventos moleculares subyacentes se cree que es diferente. 3 Esta distinción argumenta la necesidad de modelos animales específicos del CAC. Varios modelos de ratón existen en la actualidad para el estudio de CAC. Sulfato de dextrano sodium (DSS), un agente con efectos tóxicos directos sobre el epitelio del colon, puede ser administrado en el agua potable a los ratones en varios ciclos para crear un estado inflamatorio crónico. Con una duración suficiente, algunos de estos ratones desarrollan tumores. 4 desarrollo tumoral se aceleró en este modelo si se administra en un entorno pro-cancerígenos. Estos incluyen ratones con mutaciones genéticas en las vías de tumorigénesis (APC, p53, MSH2), así como ratones tratados previamente con agentes genotóxicos (azoximetano [OMA], 1,2-dimetilhidracina [DMH]). 5 La combinación de DSS con OMA como un modelo de colitis asociada a cáncer ha ganado popularidad por su reproducibilidad, potencia, bajo precio y facilidad de uso. Aunque tienen un mecanismo compartido, AOM se ha encontrado para ser más potentes y estables en solución que la DMH. Mientras que el desarrollo de tumores en otros modelos generalmente requiere varios meses, los ratones inyectados con AOM y posteriormente tratado con DSS desarrollar tumores adecuados en uns poco como 7-10 semanas. 6, 7 Finalmente, AOM y DSS se puede administrar a ratones de cualquier fondo genético (knock out, transgénicos, etc) sin cruzamiento para una cepa específica tumorigénico. Aquí, demostramos un protocolo para la inflamación impulsada por la tumorigénesis de colon en ratones utilizando una única inyección de AOM seguido de tres de siete días ciclos de DSS durante un período de semanas 10. Este modelo induce tumores con cambios histológicos y moleculares muy parecidas a las que ocurren en humanos CAC y proporciona un modelo muy valioso para el estudio de la oncogénesis y la quimioprevención en esta enfermedad. 8

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Modeling Colitis-Associated Cancer with Azoxymethane AOM and Dextran Sulfate Sodium DSS

Se demuestra un protocolo en el que la administración del agente genotóxico azoximetano (AOM), seguido por tres ciclos de la sódico pro-inflamatoria agente sulfato de dextrano (DSS) rápida y consistente genera tumores de colon en ratones con similitudes morfológicas y moleculares a las que se observan en la colitis humana asociada a cáncer.

Modelado Colitis asociada a cáncer con azoximetano (AOM) y Sodio sulfato de dextrano (DSS)

Individuals with inflammatory bowel disease (IBD), such as Crohn's disease (CD) or ulcerative colitis (UC) are at increased risk of developing colorectal ...

Research

JoVE Journal

Medicine

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