Name: modeling colitis-associated cancer with azoxymethane (aom) and dextran sulfate sodium (dss)
Uploaded: 2012-09-11T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Modeling Colitis-Associated Cancer with Azoxymethane AOM and Dextran Sulfate Sodium DSS at JoVE.com

Detta arbete har finansierats delvis av DK089016 och L30 RR030244 (MAC), CA153036 (AS), och P30-DK52574 (till Washington University matsmältningssjukdomar Research Core). AIT var en Howard Hughes Medical Institute Medical Research Training Fellow.

1. Kolit-associerad cancerinduktion <ol><li> Avsätt burar av kön och åldersmatchade 6-8 veckor gamla möss som används för försök och kontrollgrupper. Möss kan individuellt märkta med svans markeringar eller klipp öra. </li><li> På dag 0, vikter spela baslinjen och injicera varje mus intraperitonealt (IP) med 10 mg / kg av AOM arbetslösning (1 mg / ml i isotonisk saltlösning, utspädd från 10 mg / ml stamlösning i dH2O hölls vid -20 ° C) . Baserat på erfarenhet kan denna dos kan justeras mellan 7-14 ...

<ol>
	<li>Ekbom, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ulcerative+colitis+and+colorectal+cancer.+A+population-based+study.">Ulcerative colitis and colorectal cancer. A population-based study.</a> N. Engl. J. Med. 323, 1228-1233 (1990).</li><li>Terzic, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+and+colon+cancer.">Inflammation and colon cancer.</a> Gastroenterology. 138, 2101-2114 (2010).</li><li>Ullman, T. A., Itzkowitz, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+inflammation+and+cancer.">Intestinal inflammation and cancer.</a> Gastroenterology. 140, 1807-1816 (2011).</li><li>Okayasu, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dysplasia+and+carcinoma+development+in+a+repeated+dextran+sulfate+sodium-induced+colitis+model.">Dysplasia and carcinoma development in a repeated dextran sulfate sodium-induced colitis model.</a> J. Gastroenterol. Hepatol. 17, 1078-1083 (2002).</li><li>Kanneganti, M., Mino-Kenudson, M., Mizoguchi, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+colitis-associated+carcinogenesis.">Animal models of colitis-associated carcinogenesis.</a> J. Biomed. Biotechnol. 342637, (2011).</li><li>Neufert, C., Becker, C., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+inducible+mouse+model+of+colon+carcinogenesis+for+the+analysis+of+sporadic+and+inflammation-driven+tumor+progression.">An inducible mouse model of colon carcinogenesis for the analysis of sporadic and inflammation-driven tumor progression.</a> Nat. Protoc. 2, 1998-2004 (2007).</li><li>Tanaka, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+inflammation-related+mouse+colon+carcinogenesis+model+induced+by+azoxymethane+and+dextran+sodium+sulfate.">A novel inflammation-related mouse colon carcinogenesis model induced by azoxymethane and dextran sodium sulfate.</a> Cancer Sci. 94, 965-973 (2003).</li><li>De Robertis, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+AOM/DSS+murine+model+for+the+study+of+colon+carcinogenesis:+From+pathways+to+diagnosis+and+therapy+studies.">The AOM/DSS murine model for the study of colon carcinogenesis: From pathways to diagnosis and therapy studies.</a> J. Carcinog. 10, 9 (2011).</li><li>Wirtz, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemically+induced+mouse+models+of+intestinal+inflammation.">Chemically induced mouse models of intestinal inflammation.</a> Nat. Protoc. 2, 541-546 (2007).</li><li>Cooper, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinicopathologic+study+of+dextran+sulfate+sodium+experimental+murine+colitis.">Clinicopathologic study of dextran sulfate sodium experimental murine colitis.</a> Lab Invest. 69, 238-249 (1993).</li><li>Becker, C., Fantini, M. C., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+resolution+colonoscopy+in+live+mice.">High resolution colonoscopy in live mice.</a> Nat. Protoc. 1, 2900-2904 (2006).</li><li>Becker, C., Fantini, M. C., Wirtz, S., Nikolaev, A., Kiesslich, R., Lehr, H. A., Galle, P. R., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+colitis+and+colon+cancer+development+in+mice+using+high+resolution+chromoendoscopy.">In vivo imaging of colitis and colon cancer development in mice using high resolution chromoendoscopy.</a> Gut. 54, 950-954 (2005).</li><li>Shaker, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epimorphin+deletion+protects+mice+from+inflammation-induced+colon+carcinogenesis+and+alters+stem+cell+niche+myofibroblast+secretion.">Epimorphin deletion protects mice from inflammation-induced colon carcinogenesis and alters stem cell niche myofibroblast secretion.</a> J. Clin. Invest. 120, 2081-2093 (2010).</li><li>Boivin, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathology+of+mouse+models+of+intestinal+cancer:+consensus+report+and+recommendations.">Pathology of mouse models of intestinal cancer: consensus report and recommendations.</a> Gastroenterology. 124, 762-777 (2003).</li><li>Cooper, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dysplasia+and+cancer+in+the+dextran+sulfate+sodium+mouse+colitis+model.+Relevance+to+colitis-associated+neoplasia+in+the+human:+a+study+of+histopathology,+B-catenin+and+p53+expression+and+the+role+of+inflammation.">Dysplasia and cancer in the dextran sulfate sodium mouse colitis model. Relevance to colitis-associated neoplasia in the human: a study of histopathology, B-catenin and p53 expression and the role of inflammation.</a> Carcinogenesis. 21, 757-768 (2000).</li><li>Yoshida, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+forkhead+box+M1+transcription+factor+contributes+to+the+development+and+growth+of+mouse+colorectal+cancer.">The forkhead box M1 transcription factor contributes to the development and growth of mouse colorectal cancer.</a> Gastroenterology. 132, 1420-1431 (2007).</li><li>Suzuki, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strain+differences+in+the+susceptibility+to+azoxymethane+and+dextran+sodium+sulfate-induced+colon+carcinogenesis+in+mice.">Strain differences in the susceptibility to azoxymethane and dextran sodium sulfate-induced colon carcinogenesis in mice.</a> Carcinogenesis. 27, 162-169 (2006).</li><li>Mahler, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+susceptibility+of+inbred+mouse+strains+to+dextran+sulfate+sodium-induced+colitis.">Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis.</a> Am. J. Physiol. 274, 544-551 (1998).</li><li>Nambiar, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preliminary+analysis+of+azoxymethane+induced+colon+tumors+in+inbred+mice+commonly+used+as+transgenic/knockout+progenitors.">Preliminary analysis of azoxymethane induced colon tumors in inbred mice commonly used as transgenic/knockout progenitors.</a> Int. J. Oncol. 22, 145-150 (2003).</li><li>Tanaka, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colorectal+carcinogenesis:+Review+of+human+and+experimental+animal+studies.">Colorectal carcinogenesis: Review of human and experimental animal studies.</a> J Carcinog. 8, (2009).</li><li>Ciorba, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+IDO-1+by+immunostimulatory+DNA+limits+severity+of+experimental+colitis.">Induction of IDO-1 by immunostimulatory DNA limits severity of experimental colitis.</a> J. Immunol. 184, 3907-3916 (2010).</li><li>Kerr, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dextran+sodium+sulfate+inhibition+of+real-time+polymerase+chain+reaction+amplification:+A+poly-A+purification+solution.">Dextran sodium sulfate inhibition of real-time polymerase chain reaction amplification: A poly-A purification solution.</a> Inflamm. Bowel Dis. 18, 344-348 (2012).</li><li>Tang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=is+required+for+resection-induced+changes+in+apoptosis,+proliferation,+and+members+of+the+extrinsic+cell+death+pathways.">is required for resection-induced changes in apoptosis, proliferation, and members of the extrinsic cell death pathways.</a> Gastroenterology. 126, 220-230 (2004).</li></ol>

Behandling av möss med AOM och DSS snabbt och effektivt modeller humant kolit-förbunden cancer. Hypoteser om ärftliga faktorer som bidrar till kolit-associerade cancerformer kan enkelt studeras med genetiskt manipulerade möss. 13, 16 Alternativt kan effekten av farmakologiska mål i kolit-förbunden cancer studeras genom användning vildtypsmöss. Även denna modell värderas högt av dem som är intresserade att studera kolon tumörutveckling vid fastställandet av inflammati...

<table border="1"><tbody><tr><td> Namnet av reagenset </td><td> Företag </td><td> Katalognummer </td><td> Kommentarer </td></tr><tr><td> C57BL/6J-möss </td><td> Jackson Laboratory </td><td> 000.664 </td><td></td></tr><tr><td> Azoxymethane (AOM) </td><td> Sigma Aldrich </td><td> A5486-100mg </td><td> Stamlösning: späd till 10 mg / ml i destillerat vatten för att hållas vid -20 ° C som 0,5 till 1 ml alikvoter. Arbetslösning: späd lager till 1 mg / ml i isoton (0,9%) koksaltlösning </td></tr><tr><td> Dextransulfat Natrium (DSS) </td><td> TdB Consultancy </td><td> DB001 </td><td> MW 40 kDa (36-50 kDa preparat från andra källor är godtagbara, samma parti bör användas för ett enda experiment) 6 </td></tr><tr><td> Coloviewminiendoscopic systemet </td><td> Karl Storz </td><td> Flera </td><td> Se Becker et al. För detaljerad förklaring av utrustning och installation. 11 </td></tr><tr><td> TPP Snabb FilterMax 500 ml flaska-filter, 0,22 um PES </td><td> Midwest Scientific </td><td> TP99500 </td><td> Någon standard vävnadsodling filter är acceptabelt </td></tr><tr><td> Etylalkohol 200 Proof ASC / USP </td><td> Farmakoterapeutisk AAPER (eller andra) </td><td> 11ACS200 </td><td> Späd till 70% i destillerat vatten </td></tr><tr><td> Isofluran, USP </td><td> Butler djurhälsa Supply </td><td> 4029405 </td><td> Placera musen i glasburk med gasbinda eller en liten trasa indränkt i narkos </td></tr><tr><td> 18G Rak sondmatning nål </td><td> Braintree Scientific </td><td> N-008 </td><td></td></tr><tr><td> Fosfatbuffrad saltlösning (PBS) </td><td> SigmaAldrich </td><td> P5493 </td><td> Späd till 1X (0,01 M) i destillerat vatten </td></tr><tr><td> Kall fack (Tissue Tek II Cold Plate) </td><td> Fisher Scientific </td><td> NC9491941 </td><td> Förvara vid -20 ° C </td></tr><tr><td> ImageJ programvara </td><td> NIH (gratis nedladdning) </td><td></td><td> <a href="http://rsbweb.nih.gov/ij/" target="_blank">http://rsbweb.nih.gov/ij/</a> </td></tr><tr><td> Formaldehyd (37%) </td><td> Fisher Scientific </td><td> F79-500 </td><td> Späd till 10% i PBS </td></tr><tr><td> BD Bacto Agar </td><td> Fisher Scientific </td><td> DF0140-01-0 </td><td> Använd värmeplatta för att skapa 2% lösning i destillerat vatten </td></tr><tr><td> Miltex Eye Dressing Tång </td><td> MedPlus Inc. </td><td> 18-780 </td><td></td></tr><tr><td> Miltex Eye Sax </td><td> MedPlus Inc. </td><td> 18-1430 </td> &lt;td&gt; kurvpunkter förhindra skador på tjocktarmen vid öppning. </td></tr><tr><td> Alcian Blue 8GX (pulver) </td><td> Sigma Aldrich </td><td> A5268 </td><td> Tillsätt 1 g pulver till 100 ml 3% ättiksyra (3 ml isättika + 97 ml destillerat vatten) </td></tr><tr><td> 1 ml tuberkulinspruta med bifogade 26 G x 3/8 i intradermal koniska nål </td><td> BD </td><td> 305.946 </td><td> För injektion av AOM </td></tr></tbody></table>

modeling colitis-associated cancer with azoxymethane (aom) and dextran sulfate sodium (dss)

Individer med inflammatorisk tarmsjukdom (IBD), såsom Crohns sjukdom (CD) eller ulcerös kolit (UC) är en ökad risk att utveckla kolorektal cancer (CRC) över friska individer. Denna risk är proportionell mot längd och graden av sjukdom, med en kumulativ incidens så hög som 30% hos personer med långvariga UC med omfattande kolon engagemang. 1 Kolon dysplasi i IBD och kolit associerad cancer (CAC) tros utvecklas som en följd av upprepade cykler av epitelial cellskada och reparation medan dessa celler badade i en kronisk inflammatorisk cytokin miljö. 2 Medan spontana och kolit-associerade cancerformer delar egenskapen att vara adenokarcinom, är sekvensen av underliggande molekylära händelser tros vara annorlunda. 3 Detta distinktion hävdar behovet av särskilda djurmodeller av cert. Flera musmodeller finns för närvarande för att studera CAC. Dextransulfat Sodium (DSS), en agent med direkta toxiska effekter på kolon epitel kan administreras i dricksvatten till möss i flera cykler för att skapa ett kroniskt inflammatoriskt tillstånd. Med tillräcklig tid kommer en del av dessa möss utvecklar tumörer. 4 tumör utveckling påskyndas i denna modell om det administreras i en pro-cancerframkallande inställning. Dessa inkluderar möss med genetiska mutationer i tumorigenes vägar (APC, p53, Msh2), liksom möss som förbehandlats med genotoxiska medel (azoxymethane [AOM], 1,2-dimetylhydrazin [DMH]). 5 Kombinationen av DSS med AOM som en modell för kolit associerad cancer har vunnit popularitet för sin reproducerbarhet, styrka, lågt pris och användarvänlighet. Även om de har en gemensam mekanism, har AOM befunnits vara mer potent och stabil i lösning än DMH. Medan tumörutveckling i andra modeller kräver i allmänhet flera månader, möss som injicerats med AOM och därefter behandlas med DSS utveckla lämpliga tumörer is lite som 7-10 veckor. 6, 7 Slutligen, AOM och DSS kan administreras till möss av varje genetisk bakgrund (knock out, transgena, osv) utan korsning till en specifik tumörframkallande stam. Här visar vi ett protokoll för inflammation driven kolon tumorigenes i möss med användning av en enda injektion av AOM följt av tre sju dagars cykler av DSS under en 10 veckors period. Denna modell inducerar tumörer med histologiska och molekylära förändringar som nära påminner förekommer i human Cert och ger en mycket värdefull modell för studier av onkogenes och chemoprevention i denna sjukdom. 8

Watch this Scientific Journal Video about Modeling Colitis-Associated Cancer with Azoxymethane AOM and Dextran Sulfate Sodium DSS at JoVE.com

Modeling Colitis-Associated Cancer with Azoxymethane AOM and Dextran Sulfate Sodium DSS

Vi visar ett protokoll där administrering av genotoxiska agens azoxymethane (AOM) följt av tre cykler av pro-inflammatoriska medlet dextransulfat natrium (DSS) snabbt och konsekvent genererar kolontumörer i möss med morfologiska och molekylära likheter med de som ses i mänsklig kolit -associerad cancer.

Modellering Kolit-associerad cancer med Azoxymethane (AOM) och dextransulfat Natrium (DSS)

Individuals with inflammatory bowel disease (IBD), such as Crohn's disease (CD) or ulcerative colitis (UC) are at increased risk of developing colorectal ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Modeling Colitis-Associated Cancer with Azoxymethane (AOM) and Dextran Sulfate Sodium (DSS)

Modeling Stroke in Mice - Middle Cerebral Artery Occlusion with the Filament Model

Modellering stroke hos möss - Middle Cerebral artärocklusion med glödlamporna modell

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are ...

Modeling and Imaging 3-Dimensional Collective Cell Invasion

Modellering och Imaging 3-dimensionell Kollektiv Cell Invasion

A defining characteristic of cancer malignancy is invasion and metastasis 1. In some cancers (e.g. glioma 2), local invasion into surrounding healthy ...

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

Heterotypisk Tredimensionell<em&gt; In Vitro</em&gt; Modellering av Stromal-Epithelial interaktioner Under äggstockscancer Inledande och progression

Epithelial ovarian cancers (EOCs) are the leading cause of death from gynecological malignancy in Western societies. Despite advances in surgical ...

Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

Näthinneavlossning modell i gnagare genom subretinal Injektion av natriumhyaluronat

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the ...

Modeling Spontaneous Metastatic Renal Cell Carcinoma (mRCC) in Mice Following Nephrectomy

Modeling Spontaneous Metastatic Renal Cell Carcinoma mRCC in Mice Following Nephrectomy

Modellering Spontan metastaserad njurcellscancer (MRCC) i möss efter Nefrektomi

One of the key challenges to improved testing of new experimental therapeutics in renal cell carcinoma (RCC) is the development of models that faithfully ...

Working with Human Tissues for Translational Cancer Research

Arbeta med mänskliga vävnader för translationell cancerforskning

Medical research for human benefit is greatly impeded by the necessity for human tissues and subjects. However, upon obtaining consent for human ...

Modeling Encephalopathy of Prematurity Using Prenatal Hypoxia-ischemia with Intra-amniotic Lipopolysaccharide in Rats

Modellering encefalopati hos prematura Använda Prenatal Hypoxi-ischemi med Intra-fostervatten Lipopolysackarid hos råttor

Encephalopathy of prematurity (EoP) is a term that encompasses the central nervous system (CNS) abnormalities associated with preterm birth. To best ...

Modeling the Early Steps of Ovarian Cancer Dissemination in an Organotypic Culture of the Human Peritoneal Cavity

Modellering de tidiga stegen av äggstockscancer Spridning i en Organotypic Kultur av den mänskliga Peritoneal Cavity

The pattern of ovarian cancer metastasis is markedly different from that of most other epithelial tumors, because it rarely spreads hematogenously. ...

Modeling Chemotherapy Resistant Leukemia In Vitro

Modeling Chemotherapy Resistant Leukemia In Vitro

Modellering Chemotherapy Resistent Leukemi<em&gt; In Vitro</em

It is well established that the bone marrow microenvironment provides a unique site of sanctuary for hematopoietic diseases that both initiate and ...

Modeling and Simulations of Olfactory Drug Delivery with Passive and Active Controls of Nasally Inhaled Pharmaceutical Aerosols

Modellering och Simulering av Olfactory Drug Delivery med passiva och aktiva kontroller av nasalt inhalerat Pharmaceutical Aerosoler

There are many advantages of direct nose-to-brain drug delivery in the treatment of neurological disorders. However, its application is limited by the ...