Name: depletion and reconstitution of macrophages in mice
Uploaded: 2012-08-01T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Depletion and Reconstitution of Macrophages in Mice at JoVE.com

Dit werk werd ondersteund door een &#39;Grant ten behoeve van onderzoek&#39; van de Crohn en Colitis Foundation of Canada naar LMS, die wordt bijgestaan ​​door een Canadese Vereniging van Gastro-enterologie / Canadese Vereniging van Health Research / Crohn en Colitis Foundation of Canada New Investigator Award.

1. Aantasten Macrofagen Met behulp van Clodronaat-bevattende liposomen <ol><li> Liposomen zijn opgeslagen bij 4 ° C. Twee uur voor de injectie, verwijder clodronaat-bevattende liposomen, PBS-bevattende liposomen, of steriele PBS (injectie controle) uit de koelkast zodat ze om te acclimatiseren op kamertemperatuur (18 ° C). </li><li> Keren de buizen liposomen 8-10 maal om een ​​gelijkmatige verdeling ontstaat voor het laden 200 pi in een 1 ml spuit. Bevestig een 26 gauge naald voor aan de bovenkant van de spuit. ...

<ol>
	<li>Gordon, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternative+activation+of+macrophages.">Alternative activation of macrophages.</a> Nat. Rev. Immunol. 3, 23-35 (2003).</li><li>Rescigno, M., Lopatin, U., Chieppa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interactions+among+dendritic+cells,+macrophages,+and+epithelial+cells+in+the+gut:+implications+for+immune+tolerance.">Interactions among dendritic cells, macrophages, and epithelial cells in the gut: implications for immune tolerance.</a> Curr. Opin. Immunol. 20, 669-675 (2008).</li><li>Heinsbroek, S. E., Gordon, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+macrophages+in+inflammatory+bowel+diseases.">The role of macrophages in inflammatory bowel diseases.</a> Expert Rev. Mol. Med. 11, e14 (2009).</li><li>Collins, S. M., Piche, T., Rampal, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+putative+role+of+inflammation+in+the+irritable+bowel+syndrome.">The putative role of inflammation in the irritable bowel syndrome.</a> Gut. 49, 743-745 (2001).</li><li>Maeda, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colon+cancer-derived+factors+activate+NF-kappaB+in+myeloid+cells+via+TLR2+to+link+inflammation+and+tumorigenesis.">Colon cancer-derived factors activate NF-kappaB in myeloid cells via TLR2 to link inflammation and tumorigenesis.</a> Mol. Med. Report. 4, 1083-1088 (2011).</li><li>van Rooijen, N., van Kesteren-Hendrikx, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clodronate+liposomes:+perspectives+in+research+and+therapeutics.">Clodronate liposomes: perspectives in research and therapeutics.</a> J. Liposome Res. 12, 81-94 (2002).</li><li>Hunter, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro-derived+alternatively+activated+macrophages+reduce+colonic+inflammation+in+mice.">In vitro-derived alternatively activated macrophages reduce colonic inflammation in mice.</a> Gastroenterology. 138, 1395-1405 (2010).</li><li>Weisser, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SHIP-deficient,+alternatively+activated+macrophages+protect+mice+during+DSS-induced+colitis.">SHIP-deficient, alternatively activated macrophages protect mice during DSS-induced colitis.</a> J. Leukoc. Biol. 90, 483-492 (2011).</li><li>Qualls, J. E., Kaplan, A. M., van Rooijen, N., Cohen, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+experimental+colitis+by+intestinal+mononuclear+phagocytes.">Suppression of experimental colitis by intestinal mononuclear phagocytes.</a> J. Leukoc. Biol. 80, 802-815 (2006).</li><li>Van Rooijen, N., Sanders, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liposome+mediated+depletion+of+macrophages:+mechanism+of+action,+preparation+of+liposomes+and+applications.">Liposome mediated depletion of macrophages: mechanism of action, preparation of liposomes and applications.</a> J. Immunol. Methods. 174, 83-93 (1994).</li><li>Smith, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infection+with+a+helminth+parasite+prevents+experimental+colitis+via+a+macrophage-mediated+mechanism.">Infection with a helminth parasite prevents experimental colitis via a macrophage-mediated mechanism.</a> J. Immunol. 178, 4557-4566 (2007).</li><li>van Rooijen, N., Hendrikx, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liposomes+for+specific+depletion+of+macrophages+from+organs+and+tissues.">Liposomes for specific depletion of macrophages from organs and tissues.</a> Methods Mol. Biol. 605, 189-203 (2010).</li><li>Kataoka, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+roles+of+vitreal+macrophages+and+circulating+leukocytes+in+retinal+neovascularization.">The roles of vitreal macrophages and circulating leukocytes in retinal neovascularization.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 52, 1431-1438 (2011).</li><li>Weisser, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternative+activation+of+macrophages+by+IL-4+requires+SHIP+degradation.">Alternative activation of macrophages by IL-4 requires SHIP degradation.</a> Eur. J. Immunol. 41, 1742-1753 (2011).</li><li>Cailhier, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+macrophage+ablation+demonstrates+that+resident+macrophages+initiate+acute+peritoneal+inflammation.">Conditional macrophage ablation demonstrates that resident macrophages initiate acute peritoneal inflammation.</a> J. Immunol. 174, 2336-2342 (2005).</li></ol>

Macrofagen zijn fagocyterende cellen die een belangrijke rol in het immuunsysteem spelen. Zij zijn verantwoordelijk voor de inleiding van de aangeboren immuunrespons en de leiding van de verworven immuunrespons. Typisch, zijn klassiek geactiveerde macrofagen geactiveerd door IFNy of LPS en zijn verantwoordelijk voor het elimineren van pathogenen en het monteren van een ontstekingsreactie 1. Omgekeerd worden afwisselend geactiveerde macrofagen geactiveerd door IL-4 of IL-13 en een rol puin spoelen en weefselre...

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van het serum </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td></tr><tr><td> Clodronaat bevattende liposomen </td><td> <a href="http://Clodronateliposomes.org" target="_blank">Clodronateliposomes.org</a> </td><td></td></tr><tr><td> PBS bevattende liposomen </td><td> <a href="http://Clodronateliposomes.org" target="_blank">Clodronateliposomes.org</a> </td><td></td></tr><tr><td> Steriele PBS pH 7,4 </td><td> Invitrogen </td><td> 14190 </td></tr><tr><td> IMDM </td><td> Invitrogen </td><td> 12440 </td></tr><tr><td> Foetaal Kalf Serum (FKS) </td><td> Invitrogen </td><td> 12483 </td></tr><tr><td> azijnzuur </td><td> BDH ARISTAR </td><td> BDH3092-500MLP </td></tr><tr><td> Monothioglycerol (MTG) </td><td> Sigma </td><td> 96-275 </td></tr><tr><td> Recombinant muizen MCSF </td><td> StemCell Technologies </td><td> 02951 </td></tr><tr><td> Recombinant muizen GM-CSF </td><td> StemCell Technologies </td><td> 02935 </td></tr><tr><td> Recombinant muriene IL-3 </td><td> StemCell Technologies </td><td> 02903 </td></tr><tr><td> Recombinant muizen IFNy </td><td> StemCell Technologies </td><td> 02746 </td></tr><tr><td> Recombinant muriene IL-4 </td><td> StemCell Technologies </td><td> 02714 </td></tr><tr><td> Cell Dissociatie Buffer </td><td> Invitrogen </td><td> 13150-016 </td></tr><tr><td> Rat anti-F4/80 Antilichaam </td><td> Abd Serotec </td><td> MCA497GA </td></tr><tr><td> Muis anti-Argi antilichaam </td><td> BD Transduction Laboratories </td><td> 610708 </td></tr></tbody></table> Tabel 1. Reagentia in dit protocol.

depletion and reconstitution of macrophages in mice

Macrofagen zijn kritisch spelers in de aangeboren immuunrespons op infectueuze uitdaging of letsel, de inleiding van de aangeboren immuunrespons en de leiding van de verworven immuunrespons. Macrofagen disfunctie kan leiden tot een onvermogen om een ​​adequate immuunrespons en als zodanig, zijn in vele ziekteprocessen, zoals inflammatoire darmziekten. Macrofagen weer te geven gepolariseerde fenotypen die in het algemeen onderverdeeld in twee categorieën. Klassiek geactiveerde macrofagen, geactiveerd door stimulatie met IFNy of LPS, spelen een essentiële rol in reactie op bacteriële uitdaging terwijl alternatief geactiveerde macrofagen, geactiveerd door IL-4 of IL-13, deel te nemen aan puin wegvangen en weefselremodellering en zijn betrokken bij de resolutie fase van ontsteking. Tijdens een ontstekingsreactie in vivo, zijn macrofagen gevonden te midden van een complex mengsel van infiltrerende immuuncellen en kunnen deelnemen door verergeren of resolving ontsteking. De rol van macrofagen bepalen in situ in een geheel diermodel is worden onderzocht het effect van afbreken macrofagen van de complexe omgeving. Voor vragen over de rol van de macrofaag fenotype in situ te vragen, kan fenotypisch gedefinieerd gepolariseerde macrofagen worden ontleend ex vivo, uit het beenmerg zuigt en toegevoegd terug naar muizen, met of zonder voorafgaande uitputting van de macrofagen. In de hier gepresenteerde protocol clodronaat bevattende liposomen versus PBS geïnjecteerd controles werden gebruikt colon macrofagen afbreken in dextran natriumsulfaat (DSS) geïnduceerde colitis bij muizen. Daarnaast werden gepolariseerde macrofagen afgeleid ex vivo en overgedragen aan muizen door intraveneuze injectie. Een waarschuwing deze benadering is dat clodronaat bevattende liposomen afbreken alle professionele fagocyten, zowel dendritische cellen macrofagen, zodat om het effect waargenomen door depletie macrofagen specifieke reconstitutie of fenotype van adoptieve overdracht van macrofagen noodzakelijk. Systemische macrofaag depletie in muizen kunnen worden bereikt door het terugkruisen muizen op een CD11b-DTR achtergrond, hetgeen een uitstekende complementaire aanpak. Het voordeel van clodronaat bevattende liposoom-gemedieerde afbraak is dat het niet de tijd en kosten in terugkruisen muizen vereist en kan worden gebruikt bij muizen ongeacht de achtergrond van de muizen (C57BL / 6, BALB / c, of gemengd achtergrond ).

Watch this Scientific Journal Video about Depletion and Reconstitution of Macrophages in Mice at JoVE.com

Depletion and Reconstitution of Macrophages in Mice

Macrofagen spelen een centrale rol in homeostase en pathologie in vele weefsels. Het protocol hier gepresenteerde beschrijft methoden voor uitputting van macrofagen<em&gt; In vivo</em&gt;, Die voortvloeien gepolariseerde macrofagen uit het beenmerg zuigt, en adoptief overdracht van macrofagen in muizen. Deze technieken laten toe de bepaling van de rol die gepolariseerde macrofagen spelen bij gezondheid en ziekte.

Uitputting en reconstitutie van macrofagen in Muizen

Macrophages are critical players in the innate  immune response to infectious challenge or injury, initiating the innate immune  response and directing ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Depletion of Specific Cell Populations by Complement Depletion

Uitputting van specifieke celpopulaties door Complement Uitputting

The purification of immune cell populations is often required in order to study their unique functions.  In particular, molecular approaches such as ...

Study of Phagolysosome Biogenesis in Live Macrophages

Studie van fagolysosoom Biogenesis Live macrofagen

Phagocytic cells play a major role in the innate immune system by removing and eliminating invading microorganisms in their phagosomes. Phagosome ...

Use of Shigella flexneri to Study Autophagy-Cytoskeleton Interactions

Use of Shigella flexneri to Study Autophagy-Cytoskeleton Interactions

Gebruik van<em&gt; Shigella flexneri</em&gt; Naar Autophagy-cytoskelet interacties te bestuderen

Shigella flexneri is an intracellular pathogen that can escape from phagosomes to reach the cytosol, and polymerize the host actin cytoskeleton to promote ...

Proteomic Profiling of Macrophages by 2D Electrophoresis

Proteomics Profilering van macrofagen door 2D-elektroforese

The goal of the two-dimensional (2D) electrophoresis protocol described here is to show how to analyse the phenotype of human cultured macrophages. The ...

Macrophage Cholesterol Depletion and Its Effect on the Phagocytosis of Cryptococcus neoformans

Macrophage Cholesterol Depletion and Its Effect on the Phagocytosis of Cryptococcus neoformans

Macrofagen Cholesterol Uitputting en het effect daarvan op de Fagocytose van<em&gt; Cryptococcus neoformans</em

Cryptococcosis is a life-threatening infection caused by pathogenic fungi of the genus Cryptococcus. Infection occurs upon inhalation of spores, which are ...

Quantification of Cytosolic vs. Vacuolar Salmonella in Primary Macrophages by Differential Permeabilization

Quantification of Cytosolic vs. Vacuolar Salmonella in Primary Macrophages by Differential Permeabilization

Kwantificering van cytosolische vs. vacuole<em&gt; Salmonella</em&gt; In het Primair macrofagen door Differential Permeabilisatie

Intracellular bacterial pathogens can replicate in the cytosol or in specialized pathogen-containing vacuoles (PCVs). To reach the cytosol, bacteria like ...

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Isolatie van Salmonella typhimurium-met Phagosomes van Macrophages

Salmonella typhimurium is a facultative intracellular bacterium that causes gastroenteritis in humans. After invasion of the lamina propria, S. ...

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Isolatie en In Vitro cultuur van lymfkliertest en menselijke alveolaire macrofagen

Alveolar macrophages are terminally differentiated, lung-resident macrophages of prenatal origin. Alveolar macrophages are unique in their long life and ...

Flow Cytometric Measurement Of ROS Production In Macrophages In Response To Fc&#947;R Cross-linking

Flow Cytometric Measurement Of ROS Production In Macrophages In Response To FcÃƒÅ½Ã‚Â³R Cross-linking

Cytometrische Stroommeting van ROS productie In macrofagen In reactie op FcγR dwarsbinding

The oxidative or respiratory burst is used to describe the rapid consumption of oxygen and generation of reactive oxygen species (ROS) by phagocytes in ...

Quantification of Monocyte Chemotactic Activity In Vivo and Characterization of Blood Monocyte Derived Macrophages

Kwantificering van monocyten Chemotactische activiteit in vivo en karakterisering van bloed monocyten afgeleide macrofagen

Tissue homeostasis and repair are critically dependent on the recruitment of monocyte-derived macrophages. Both under- and over-recruitment of ...