Name: depletion and reconstitution of macrophages in mice
Uploaded: 2012-08-01T13:00:00
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Ce travail a été soutenu par une «subvention à l&#39;aide de la recherche» de la maladie de Crohn et la colite Fondation du Canada pour LMS, qui est soutenu par une Association canadienne de gastroentérologie / Association canadienne de la Santé s de recherche / maladie de Crohn et la colite Fondation des Prix du Canada de nouveau chercheur.

1. Les macrophages appauvrissant la couche d&#39;Utilisation clodronate liposomes contenant <ol><li> Les liposomes sont conservés à 4 ° C. Deux heures avant l&#39;injection, retirez le clodronate contenant des liposomes, PBS contenant des liposomes, ou PBS stérile (commande d&#39;injection) du réfrigérateur afin de leur permettre de s&#39;acclimater à la température ambiante (18 ° C). </li><li> Inverser les tubes contenant des liposomes 8-10 fois pour assurer une répartition avant même de charger 200 pi dan...

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	<li>Gordon, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternative+activation+of+macrophages.">Alternative activation of macrophages.</a> Nat. Rev. Immunol. 3, 23-35 (2003).</li><li>Rescigno, M., Lopatin, U., Chieppa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interactions+among+dendritic+cells,+macrophages,+and+epithelial+cells+in+the+gut:+implications+for+immune+tolerance.">Interactions among dendritic cells, macrophages, and epithelial cells in the gut: implications for immune tolerance.</a> Curr. Opin. Immunol. 20, 669-675 (2008).</li><li>Heinsbroek, S. E., Gordon, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+macrophages+in+inflammatory+bowel+diseases.">The role of macrophages in inflammatory bowel diseases.</a> Expert Rev. Mol. Med. 11, e14 (2009).</li><li>Collins, S. M., Piche, T., Rampal, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+putative+role+of+inflammation+in+the+irritable+bowel+syndrome.">The putative role of inflammation in the irritable bowel syndrome.</a> Gut. 49, 743-745 (2001).</li><li>Maeda, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colon+cancer-derived+factors+activate+NF-kappaB+in+myeloid+cells+via+TLR2+to+link+inflammation+and+tumorigenesis.">Colon cancer-derived factors activate NF-kappaB in myeloid cells via TLR2 to link inflammation and tumorigenesis.</a> Mol. Med. Report. 4, 1083-1088 (2011).</li><li>van Rooijen, N., van Kesteren-Hendrikx, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clodronate+liposomes:+perspectives+in+research+and+therapeutics.">Clodronate liposomes: perspectives in research and therapeutics.</a> J. Liposome Res. 12, 81-94 (2002).</li><li>Hunter, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro-derived+alternatively+activated+macrophages+reduce+colonic+inflammation+in+mice.">In vitro-derived alternatively activated macrophages reduce colonic inflammation in mice.</a> Gastroenterology. 138, 1395-1405 (2010).</li><li>Weisser, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SHIP-deficient,+alternatively+activated+macrophages+protect+mice+during+DSS-induced+colitis.">SHIP-deficient, alternatively activated macrophages protect mice during DSS-induced colitis.</a> J. Leukoc. Biol. 90, 483-492 (2011).</li><li>Qualls, J. E., Kaplan, A. M., van Rooijen, N., Cohen, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+experimental+colitis+by+intestinal+mononuclear+phagocytes.">Suppression of experimental colitis by intestinal mononuclear phagocytes.</a> J. Leukoc. Biol. 80, 802-815 (2006).</li><li>Van Rooijen, N., Sanders, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liposome+mediated+depletion+of+macrophages:+mechanism+of+action,+preparation+of+liposomes+and+applications.">Liposome mediated depletion of macrophages: mechanism of action, preparation of liposomes and applications.</a> J. Immunol. Methods. 174, 83-93 (1994).</li><li>Smith, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infection+with+a+helminth+parasite+prevents+experimental+colitis+via+a+macrophage-mediated+mechanism.">Infection with a helminth parasite prevents experimental colitis via a macrophage-mediated mechanism.</a> J. Immunol. 178, 4557-4566 (2007).</li><li>van Rooijen, N., Hendrikx, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liposomes+for+specific+depletion+of+macrophages+from+organs+and+tissues.">Liposomes for specific depletion of macrophages from organs and tissues.</a> Methods Mol. Biol. 605, 189-203 (2010).</li><li>Kataoka, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+roles+of+vitreal+macrophages+and+circulating+leukocytes+in+retinal+neovascularization.">The roles of vitreal macrophages and circulating leukocytes in retinal neovascularization.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 52, 1431-1438 (2011).</li><li>Weisser, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternative+activation+of+macrophages+by+IL-4+requires+SHIP+degradation.">Alternative activation of macrophages by IL-4 requires SHIP degradation.</a> Eur. J. Immunol. 41, 1742-1753 (2011).</li><li>Cailhier, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+macrophage+ablation+demonstrates+that+resident+macrophages+initiate+acute+peritoneal+inflammation.">Conditional macrophage ablation demonstrates that resident macrophages initiate acute peritoneal inflammation.</a> J. Immunol. 174, 2336-2342 (2005).</li></ol>

Les macrophages sont des cellules phagocytaires qui jouent un rôle important dans le système immunitaire. Ils sont responsables pour initier la réponse immunitaire innée et de diriger la réponse immunitaire acquise. En règle générale, les macrophages activés classique sont activés par IFNy ou LPS et sont responsables de l&#39;élimination des pathogènes et le montage d&#39;une réponse inflammatoire 1. A l&#39;inverse, les macrophages activés alternativement sont activés par l&#39;IL-4 ou d&#39;I...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom du réactif </td><td> Entreprise </td><td> Numéro de catalogue </td></tr><tr><td> Clodronate contenant des liposomes </td><td> <a href="http://Clodronateliposomes.org" target="_blank">Clodronateliposomes.org</a> </td><td></td></tr><tr><td> PBS contenant des liposomes </td><td> <a href="http://Clodronateliposomes.org" target="_blank">Clodronateliposomes.org</a> </td><td></td></tr><tr><td> PBS stérile pH 7,4 </td><td> Invitrogen </td><td> 14190 </td></tr><tr><td> IMDM </td><td> Invitrogen </td><td> 12440 </td></tr><tr><td> Sérum de veau foetal (FCS) </td><td> Invitrogen </td><td> 12483 </td></tr><tr><td> l&#39;acide acétique </td><td> BDH Aristar </td><td> BDH3092-500MLP </td></tr><tr><td> Monothioglycérol (MTG) </td><td> Sigma </td><td> 96-275 </td></tr><tr><td> Recombinant murin MCSF </td><td> StemCell Technologies </td><td> 02951 </td></tr><tr><td> Recombinant GM-CSF murin </td><td> StemCell Technologies </td><td> 02935 </td></tr><tr><td> Recombinant IL-3 murine </td><td> StemCell Technologies </td><td> 02903 </td></tr><tr><td> Recombinant murin IFNy </td><td> StemCell Technologies </td><td> 02746 </td></tr><tr><td> Recombinant IL-4 murine </td><td> StemCell Technologies </td><td> 02714 </td></tr><tr><td> Cellule tampon de dissociation </td><td> Invitrogen </td><td> 13150-016 </td></tr><tr><td> Rat anti-F4/80 Anticorps </td><td> AbD Serotec </td><td> MCA497GA </td></tr><tr><td> Souris anti-Argi Anticorps </td><td> Transduction Laboratories BD </td><td> 610708 </td></tr></tbody></table> Tableau 1. Réactifs spécifiques utilisés dans ce protocole.

depletion and reconstitution of macrophages in mice

Les macrophages sont des acteurs essentiels dans la réponse immunitaire innée au défi infectieuse ou d&#39;une blessure, les initiateurs de la réponse immunitaire innée et de diriger la réponse immunitaire acquise. Macrophage dysfonctionnement peut conduire à une incapacité de monter une réponse immunitaire appropriée et en tant que telle, a été impliqué dans de nombreux processus pathologiques, y compris les maladies inflammatoires de l&#39;intestin. Les macrophages afficher phénotypes polarisés qui sont largement divisés en deux catégories. Macrophages activés Classiquement, activées par la stimulation avec IFNy ou LPS, jouent un rôle essentiel dans la réponse au défi alors que les macrophages bactérienne alternativement activés, activée par l&#39;IL-4 ou d&#39;IL-13, participer à des débris de balayage et le remodelage des tissus et ont été impliqués dans la résolution la phase de l&#39;inflammation. Lors d&#39;une réponse inflammatoire in vivo, les macrophages se trouvent au milieu d&#39;un mélange complexe d&#39;infiltrer les cellules immunitaires et peuvent participer en exacerbant ou résolvinel&#39;inflammation g. Pour définir le rôle des macrophages in situ dans un modèle animal entier, il est nécessaire d&#39;examiner l&#39;effet de l&#39;épuisement des macrophages à l&#39;environnement complexe. Pour poser des questions sur le rôle du phénotype des macrophages in situ, phénotypiquement définis macrophages polarisés peuvent être dérivées ex vivo, à partir de ponctions de moelle osseuse et rajoutées à la souris, avec ou sans l&#39;épuisement préalable des macrophages. Dans le protocole présenté ici clodronate liposomes contenant, par rapport aux témoins injectés PBS, ont été utilisés pour épuiser les macrophages du côlon au cours du sulfate de sodium dextran (DSS) de colite induite chez la souris. En outre, les macrophages ont été polarisées dérivée ex vivo et transféré à des souris par injection intraveineuse. Une mise en garde de cette approche est que les liposomes contenant du clodronate épuiser toutes les phagocytes professionnels, y compris les deux cellules dendritiques et les macrophages afin d&#39;assurer l&#39;effet observé par l&#39;épuisement est macrophages spécifique, la reconstitution ophénotype f par transfert adoptif de macrophages est nécessaire. L&#39;épuisement des macrophages systémique chez la souris peut également être obtenu par rétrocroisement souris sur un fond CD11b-DTR, qui est une excellente approche complémentaire. L&#39;avantage du clodronate liposome contenant médiée par l&#39;épuisement, c&#39;est qu&#39;il ne nécessite pas le temps et les frais engagés pour les souris et rétrocroisement il peut être utilisé chez la souris indépendamment de l&#39;origine des souris (C57BL / 6, BALB / c, ou d&#39;origine mixte ).

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Depletion and Reconstitution of Macrophages in Mice

Les macrophages jouent un rôle central dans l&#39;homéostasie et de la pathologie dans de nombreux tissus. Le protocole présenté ici décrit des méthodes pour épuiser les macrophages<em&gt; In vivo</em&gt;, Dérivant macrophages polarisés de ponctions de moelle osseuse, et le transfert adoptif des macrophages à des souris. Ces techniques permettent de déterminer le rôle que les macrophages polarisés jouer dans la santé et la maladie.

L&#39;épuisement et la reconstitution des macrophages chez la souris

Macrophages are critical players in the innate  immune response to infectious challenge or injury, initiating the innate immune  response and directing ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Depletion of Specific Cell Populations by Complement Depletion

Appauvrissement des populations de cellules spécifiques par l&#39;épuisement Complément

The purification of immune cell populations is often required in order to study their unique functions.  In particular, molecular approaches such as ...

Recherche

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Étude de phagolysosome biogenèse dans les macrophages en direct

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Utilisation d&#39;<em&gt; Shigella flexneri</em&gt; Pour étudier les interactions de l&#39;autophagie cytosquelette

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