Name: depletion and reconstitution of macrophages in mice
Uploaded: 2012-08-01T13:00:00
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Diese Arbeit wurde durch ein &#39;Grant in Aid of Research &quot;von der Crohn-und Colitis Foundation of Kanada zu LMS, die von einer kanadischen Gesellschaft für Gastroenterologie / kanadische Verband der Gesundheitsforschung / Morbus Crohn und Colitis Foundation of Kanada New Investigator Award unterstützt wird unterstützt.

1. Depleting Makrophagen mit Clodronat-haltige Liposomen <ol><li> Liposomen werden bei 4 ° C gelagert Zwei Stunden vor der Injektion, zu entfernen Clodronat-haltigen Liposomen, PBS-enthaltenden Liposomen oder sterilem PBS (Einspritzsteuerung) aus dem Kühlschrank, damit sie auf Raumtemperatur (18 ° C) zu gewöhnen. </li><li> Kehren Sie die Röhrchen mit Liposomen 8-10 mal um eine gleichmäßige Verteilung vor dem Einlegen in 200 pl einer 1 ml Spritze zu gewährleisten. Befestigen Sie eine 26-Gauge-Nadel an die Spitz...

<ol>
	<li>Gordon, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternative+activation+of+macrophages.">Alternative activation of macrophages.</a> Nat. Rev. Immunol. 3, 23-35 (2003).</li><li>Rescigno, M., Lopatin, U., Chieppa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interactions+among+dendritic+cells,+macrophages,+and+epithelial+cells+in+the+gut:+implications+for+immune+tolerance.">Interactions among dendritic cells, macrophages, and epithelial cells in the gut: implications for immune tolerance.</a> Curr. Opin. Immunol. 20, 669-675 (2008).</li><li>Heinsbroek, S. 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Makrophagen sind Phagozyten, die eine wichtige Rolle im Immunsystem spielen. Sie sind verantwortlich für die Initiierung der angeborenen Immunantwort und die Leitung der erworbenen Immunantwort. Typischerweise werden klassisch aktivierten Makrophagen durch IFN oder LPS aktiviert und sind für die Beseitigung von Pathogenen und zum Montieren eines Entzündungsreaktion 1. Umgekehrt werden alternativ aktivierten Makrophagen durch IL-4 oder IL-13 aktiviert und spielen eine Rolle in Schutt und Scavenging Gewebeum...

<table border="1"><tbody><tr><td> Name des Reagenzes </td><td> Firma </td><td> Katalog-Nummer </td></tr><tr><td> Clodronat-haltige Liposomen </td><td> <a href="http://Clodronateliposomes.org" target="_blank">Clodronateliposomes.org</a> </td><td></td></tr><tr><td> PBS-haltigen Liposomen </td><td> <a href="http://Clodronateliposomes.org" target="_blank">Clodronateliposomes.org</a> </td><td></td></tr><tr><td> Sterilem PBS pH-Wert 7,4 </td><td> Invitrogen </td><td> 14190 </td></tr><tr><td> IMDM </td><td> Invitrogen </td><td> 12440 </td></tr><tr><td> Fötalem Kälberserum (FCS) </td><td> Invitrogen </td><td> 12483 </td></tr><tr><td> Essigsäure </td><td> BDH Aristar </td><td> BDH3092-500MLP </td></tr><tr><td> Monothioglycerol (MTG) </td><td> Sigma </td><td> 96-275 </td></tr><tr><td> Recombtionsabhängig murinen MCSF </td><td> StemCell Technologies </td><td> 02951 </td></tr><tr><td> Rekombinantes murines GM-CSF </td><td> StemCell Technologies </td><td> 02935 </td></tr><tr><td> Rekombinantes Mäuse-IL-3 </td><td> StemCell Technologies </td><td> 02903 </td></tr><tr><td> Rekombinantes murines IFN </td><td> StemCell Technologies </td><td> 02746 </td></tr><tr><td> Rekombinantes murines IL-4 </td><td> StemCell Technologies </td><td> 02714 </td></tr><tr><td> Zelldissoziation Buffer </td><td> Invitrogen </td><td> 13150-016 </td></tr><tr><td> Ratten-Antikörper anti-F4/80 </td><td> AbD Serotec </td><td> MCA497GA </td></tr><tr><td> Maus-Antikörper anti-Argi </td><td> BD Transduction Laboratories </td><td> 610708 </td></tr></tbody></table> Tabelle 1. Spezifische Reagenzien in diesem Protokoll verwendet.

depletion and reconstitution of macrophages in mice

Makrophagen sind wichtige Akteure der angeborenen Immunantwort auf infektiöse Herausforderung oder Verletzungen, Initiierung der angeborenen Immunantwort und die Leitung der erworbenen Immunantwort. Macrophage Dysfunktion kann zu einer Unfähigkeit führen, um eine geeignete Immunantwort und als solche ist in vielen Krankheitsprozessen, einschließlich entzündlicher Darmerkrankungen beteiligt ist. Makrophagen zeigen polarisiert Phänotypen, die grob in zwei Kategorien unterteilt sind. Klassisch aktivierten Makrophagen, aktiviert durch Stimulation mit IFN-oder LPS, spielen eine wesentliche Rolle in Reaktion auf bakterielle Herausforderung während alternativ aktivierten Makrophagen, aktiviert durch IL-4 oder IL-13, in Schutt und Scavenging Gewebeumbildung teilnehmen und wurden in der Auflösung in Verbindung gebracht Phase der Entzündung. Während einer Entzündungsreaktion in vivo werden Makrophagen unter einem komplexen Gemisch von infiltrierenden Immunzellen und kann durch Verschärfung oder Resolvin Teilnahmeg Entzündung. Um die Rolle von Makrophagen in situ definiert in einem ganzen Tier-Modell ist es notwendig, die Wirkung der Erschöpfung Makrophagen aus dem komplexen Umgebung zu untersuchen. Um Fragen über die Rolle von Makrophagen-Phänotyp in situ fragen, können phänotypisch definierten polarisierte Makrophagen ex vivo abgeleitet werden, aus Knochenmarkaspirate und wieder hinzugefügt, um Mäuse, mit oder ohne vorherige Depletion von Makrophagen. In der hier dargestellten Protokoll Clodronat-haltigen Liposomen, gegen PBS injiziert Kontrollen wurden verwendet, um Kolon Makrophagen während Dextran Natriumsulfat (DSS)-induzierte Colitis bei Mäusen führen. Darüber hinaus wurden polarisierte Makrophagen ex vivo abgeleitet und in Mäusen durch intravenöse Injektion. Ein Vorbehalt bei diesem Ansatz ist, dass Clodronat-haltige Liposomen führen alle professionellen Phagozyten, einschließlich der beiden dendritischen Zellen und Makrophagen so zu gewährleisten, die Wirkung durch eine Verarmung zu beobachten ist Makrophagen-spezifische, Rekonstitution of Phänotyp durch adoptiven Transfer von Makrophagen erforderlich ist. Systemische Makrophagen-Depletion bei Mäusen auch durch Rückkreuzung Mäusen auf eine CD11b-DTR Hintergrund erreicht werden kann, ist das eine ausgezeichnete Ergänzung. Der Vorteil von Clodronat-haltigen Liposomen-vermittelte Abreicherung ist, dass es nicht erforderlich, die Zeit und Kosten bei Rückkreuzung Mäusen beteiligt und es kann in Mäusen verwendet, unabhängig von dem Hintergrund der Mäuse (C57BL / 6, BALB / c oder gemischte Hintergund ).

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Depletion and Reconstitution of Macrophages in Mice

Makrophagen spielen eine zentrale Rolle bei der Homöostase und Pathologie in vielen Geweben. Das Protokoll beschreibt hier vorgestellte Verfahren zur Abreicherung von Makrophagen<em&gt; In-vivo-</em&gt;, Ableiten polarisierte Makrophagen aus Knochenmarkaspirate und adoptiv Übertragung Makrophagen in Mäusen. Diese Techniken erlauben die Bestimmung der Rolle, die polarisierte Makrophagen spielen in Gesundheit und Krankheit.

Depletion und Rekonstitution von Makrophagen in Mäuse

Macrophages are critical players in the innate  immune response to infectious challenge or injury, initiating the innate immune  response and directing ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Depletion of Specific Cell Populations by Complement Depletion

Depletion spezifischer Zellpopulationen durch Ergänzung Depletion

The purification of immune cell populations is often required in order to study their unique functions.  In particular, molecular approaches such as ...

Forschung

Immunologie und Infektion

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Studium der Biogenese Phagolysosom im Live-Makrophagen

Phagocytic cells play a major role in the innate immune system by removing and eliminating invading microorganisms in their phagosomes. Phagosome ...

Use of Shigella flexneri to Study Autophagy-Cytoskeleton Interactions

Use of Shigella flexneri to Study Autophagy-Cytoskeleton Interactions

Verwendung von<em&gt; Shigella flexneri</em&gt; Zum Autophagie-Zytoskelett Interaktionen zu untersuchen

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Proteomik von Makrophagen durch 2D-Elektrophorese

The goal of the two-dimensional (2D) electrophoresis protocol described here is to show how to analyse the phenotype of human cultured macrophages. The ...

Macrophage Cholesterol Depletion and Its Effect on the Phagocytosis of Cryptococcus neoformans

Macrophage Cholesterol Depletion and Its Effect on the Phagocytosis of Cryptococcus neoformans

Makrophagen-Cholesterin Depletion und Auswirkungen auf die Phagozytose<em&gt; Cryptococcus neoformans</em

Cryptococcosis is a life-threatening infection caused by pathogenic fungi of the genus Cryptococcus. Infection occurs upon inhalation of spores, which are ...

Quantification of Cytosolic vs. Vacuolar Salmonella in Primary Macrophages by Differential Permeabilization

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Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Isolation und In-vitro- Kultur von murinen und menschlichen alveoläre Makrophagen

Alveolar macrophages are terminally differentiated, lung-resident macrophages of prenatal origin. Alveolar macrophages are unique in their long life and ...

Flow Cytometric Measurement Of ROS Production In Macrophages In Response To Fc&#947;R Cross-linking

Flow Cytometric Measurement Of ROS Production In Macrophages In Response To FcÃƒÅ½Ã‚Â³R Cross-linking

Durchflusszytometrischen Durchflussmessung von ROS-Produktion In Makrophagen als Reaktion auf FcγR Vernetzung

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Quantifizierung der monozytenchemotaktischen Aktivität in Vivo und Charakterisierung von Blutmonozyten abgeleiteten Makrophagen

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