Name: depletion and reconstitution of macrophages in mice
Uploaded: 2012-08-01T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Depletion and Reconstitution of Macrophages in Mice at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי &quot;מענק סיוע למחקר&quot; מ קרוהן קוליטיס קרן של קנדה LMS, אשר נתמכת על ידי האגודה הקנדית לגסטרואנטרולוגיה / הקנדי איגוד הבריאות של מחקר / קרוהן ו קוליטיס קרן פרס החוקר חדש בקנדה.

1. המקרופאגים באוזון באמצעות Clodronate המכיל ליפוזומים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ליפוזומים מאוחסנים 4 ° C. שעתיים לפני ההזרקה, הסר clodronate המכיל ליפוזומים, PBS המכיל ליפוזומים או סטרילית PBS (בקרת הזרקה) מהמקרר כדי לאפשר להם להסתגל לטמפרטורת החדר (18 מעלו?...

<ol>
	<li>Gordon, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternative+activation+of+macrophages.">Alternative activation of macrophages.</a> Nat. Rev. Immunol. 3, 23-35 (2003).</li><li>Rescigno, M., Lopatin, U., Chieppa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interactions+among+dendritic+cells,+macrophages,+and+epithelial+cells+in+the+gut:+implications+for+immune+tolerance.">Interactions among dendritic cells, macrophages, and epithelial cells in the gut: implications for immune tolerance.</a> Curr. Opin. Immunol. 20, 669-675 (2008).</li><li>Heinsbroek, S. E., Gordon, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+macrophages+in+inflammatory+bowel+diseases.">The role of macrophages in inflammatory bowel diseases.</a> Expert Rev. Mol. Med. 11, e14 (2009).</li><li>Collins, S. M., Piche, T., Rampal, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+putative+role+of+inflammation+in+the+irritable+bowel+syndrome.">The putative role of inflammation in the irritable bowel syndrome.</a> Gut. 49, 743-745 (2001).</li><li>Maeda, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colon+cancer-derived+factors+activate+NF-kappaB+in+myeloid+cells+via+TLR2+to+link+inflammation+and+tumorigenesis.">Colon cancer-derived factors activate NF-kappaB in myeloid cells via TLR2 to link inflammation and tumorigenesis.</a> Mol. Med. Report. 4, 1083-1088 (2011).</li><li>van Rooijen, N., van Kesteren-Hendrikx, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clodronate+liposomes:+perspectives+in+research+and+therapeutics.">Clodronate liposomes: perspectives in research and therapeutics.</a> J. Liposome Res. 12, 81-94 (2002).</li><li>Hunter, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro-derived+alternatively+activated+macrophages+reduce+colonic+inflammation+in+mice.">In vitro-derived alternatively activated macrophages reduce colonic inflammation in mice.</a> Gastroenterology. 138, 1395-1405 (2010).</li><li>Weisser, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SHIP-deficient,+alternatively+activated+macrophages+protect+mice+during+DSS-induced+colitis.">SHIP-deficient, alternatively activated macrophages protect mice during DSS-induced colitis.</a> J. Leukoc. Biol. 90, 483-492 (2011).</li><li>Qualls, J. E., Kaplan, A. M., van Rooijen, N., Cohen, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+experimental+colitis+by+intestinal+mononuclear+phagocytes.">Suppression of experimental colitis by intestinal mononuclear phagocytes.</a> J. Leukoc. Biol. 80, 802-815 (2006).</li><li>Van Rooijen, N., Sanders, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liposome+mediated+depletion+of+macrophages:+mechanism+of+action,+preparation+of+liposomes+and+applications.">Liposome mediated depletion of macrophages: mechanism of action, preparation of liposomes and applications.</a> J. Immunol. Methods. 174, 83-93 (1994).</li><li>Smith, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infection+with+a+helminth+parasite+prevents+experimental+colitis+via+a+macrophage-mediated+mechanism.">Infection with a helminth parasite prevents experimental colitis via a macrophage-mediated mechanism.</a> J. Immunol. 178, 4557-4566 (2007).</li><li>van Rooijen, N., Hendrikx, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liposomes+for+specific+depletion+of+macrophages+from+organs+and+tissues.">Liposomes for specific depletion of macrophages from organs and tissues.</a> Methods Mol. Biol. 605, 189-203 (2010).</li><li>Kataoka, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+roles+of+vitreal+macrophages+and+circulating+leukocytes+in+retinal+neovascularization.">The roles of vitreal macrophages and circulating leukocytes in retinal neovascularization.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 52, 1431-1438 (2011).</li><li>Weisser, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternative+activation+of+macrophages+by+IL-4+requires+SHIP+degradation.">Alternative activation of macrophages by IL-4 requires SHIP degradation.</a> Eur. J. Immunol. 41, 1742-1753 (2011).</li><li>Cailhier, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+macrophage+ablation+demonstrates+that+resident+macrophages+initiate+acute+peritoneal+inflammation.">Conditional macrophage ablation demonstrates that resident macrophages initiate acute peritoneal inflammation.</a> J. Immunol. 174, 2336-2342 (2005).</li></ol>

מקרופאגים הם תאים phagocytic כי לשחק תפקיד חשוב במערכת החיסונית. הם אחראים ליזום את התגובה החיסונית המולדת ולכוון את התגובה החיסונית הנרכשת. בדרך כלל, מקרופאגים מופעל קלאסי מופעלים על ידי IFNγ או LPS ואחראים על סילוק פתוגנים גובר תגובה דלקתית 1. לעומת זאת, מקרופאגים מופ...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td></tr><tr><td> Clodronate המכיל ליפוזומים </td><td> <a href="http://Clodronateliposomes.org" target="_blank">Clodronateliposomes.org</a> </td><td></td></tr><tr><td> PBS המכיל ליפוזומים </td><td> <a href="http://Clodronateliposomes.org" target="_blank">Clodronateliposomes.org</a> </td><td></td></tr><tr><td> סטרילית PBS pH7.4 </td><td> Invitrogen </td><td> 14190 </td></tr><tr><td> IMDM </td><td> Invitrogen </td><td> 12440 </td></tr><tr><td> העובר עגל סרום (FCS) </td><td> Invitrogen </td><td> 12483 </td></tr><tr><td> חומצה אצטית </td><td> BDH Aristar </td><td> BDH3092-500MLP </td></tr><tr><td> Monothioglycerol (MTG) </td><td> סיגמא </td><td> 96-275 </td></tr><tr><td> Recombinant Murine MCSF </td><td> Stemcell טכנולוגיות </td><td> 02951 </td></tr><tr><td> רקומביננטי Murine GM-CSF </td><td> Stemcell טכנולוגיות </td><td> 02935 </td></tr><tr><td> רקומביננטי Murine IL-3 </td><td> Stemcell טכנולוגיות </td><td> 02903 </td></tr><tr><td> רקומביננטי Murine IFNγ </td><td> Stemcell טכנולוגיות </td><td> 02746 </td></tr><tr><td> רקומביננטי IL-4 Murine </td><td> Stemcell טכנולוגיות </td><td> 02714 </td></tr><tr><td> תא דיסוציאציה מאגר </td><td> Invitrogen </td><td> 13150-016 </td></tr><tr><td> להלשין anti-F4/80 נוגדן </td><td> עבד Serotec </td><td> MCA497GA </td></tr><tr><td> עכבר נגד ArgI נוגדן </td><td> BD מעבדות התמרה </td><td> 610708 </td></tr></tbody></table> טבלה 1. ריאגנטים המסוים של פרוטוקול זה.

depletion and reconstitution of macrophages in mice

מקרופאגים הם שחקנים קריטיים בתגובה החיסון המולדת לאתגר פגיעה זיהומית או, שיזם את התגובה החיסונית המולדת ולכוון את התגובה החיסונית הנרכשת. מקרופאג תפקוד יכול להוביל לחוסר יכולת לעלות תגובה חיסונית מתאימה, וככזה, היה מעורב בתהליכים מחלות רבות, כולל מחלות מעי דלקתיות. מקרופאגים להציג פנוטיפים מקוטב כי המחולקים באופן כללי לשני סוגים. מקרופאגים מופעל קלאסי, מופעל על ידי גירוי עם IFNγ או LPS, לשחק תפקיד חיוני בתגובה לאתגר חיידקי בעוד מקרופאגים מופעל לחילופין, מופעלים על ידי IL-4 או IL-13, להשתתף פסולת הדחה שיפוץ רקמות היו מעורבים בהחלטה השלב של דלקת. במהלך התגובה הדלקתית in vivo, מקרופאגים נמצאים בתוך תערובת מורכבת של חדירת תאים חיסוניים ועשוי להשתתף ידי העצמת או resolvinגרם לדלקת. כדי להגדיר את התפקיד של מקרופאגים באתרו במודל חיה שלמה, יש צורך לבחון את ההשפעה של ומכלה מקרופאגים מהסביבה מורכב. לשאול שאלות על תפקידו של הפנוטיפ מקרופאג באתרו, מקרופאגים מקוטב מוגדרים phenotypically ניתן לגזור vivo לשעבר, החל aspirates מח עצם והוסיף בחזרה עכברים, עם או בלי דלדול מראש של מקרופאגים. בפרוטוקול שהוצג clodronate המכיל ליפוזומים, לעומת שולטת PBS מוזרק, שימשו כדי לרוקן מקרופאגים הגס במהלך נתרן גופרתי dextran (DSS) הנגרמת קוליטיס בעכברים. בנוסף, מקרופאגים מקוטב נגזרו vivo לשעבר והועבר עכברים על ידי הזרקה תוך ורידית. הערת אזהרה על גישה זו היא כי clodronate המכיל ליפוזומים לרוקן את כל phagocytes מקצועיים, כולל שני תאים דנדריטים ומקרופגים כך כדי להבטיח את האפקט שנצפה על ידי דלדול הוא מקרופאג ספציפי, הכינון מחדש Oפנוטיפ F על ידי העברת המאמצת של מקרופאגים הכרחי. דלדול מקרופאג מערכתית בעכברים יכול גם להיות מושגת על ידי עכברים backcrossing על רקע CD11b-DTR, שהיא גישה משלימה מצוינת. היתרון של clodronate המכיל דלדול liposome בתיווך הוא שהיא אינה דורשת את הזמן ואת חשבון מעורב עכברים backcrossing והוא ניתן להשתמש בעכברים ללא קשר לרקע של העכברים (C57BL / 6, BALB / c, או רקע מעורב ).

Watch this Scientific Journal Video about Depletion and Reconstitution of Macrophages in Mice at JoVE.com

Depletion and Reconstitution of Macrophages in Mice

מקרופאגים לשחק תפקיד מרכזי הומאוסטזיס והפתולוגיה ברקמות רבות. הפרוטוקול המובא כאן מתאר שיטות ומכלה מקרופאגים<em&gt; In vivo</em&gt;, הנובעת מקרופאגים מקוטב aspirates מח עצם, adoptively העברת מקרופאגים לעכברים. טכניקות אלו מאפשרים קביעת התפקיד מקרופאגים מקוטב לשחק בריאות ומחלות.

דלדול המשאבים ואת הכינון מחדש של מקרופאגים בעכברים

Macrophages are critical players in the innate  immune response to infectious challenge or injury, initiating the innate immune  response and directing ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Depletion of Specific Cell Populations by Complement Depletion

דלדול של אוכלוסיות תאים ספציפיים על ידי דלדול משלים

The purification of immune cell populations is often required in order to study their unique functions.  In particular, molecular approaches such as ...

Study of Phagolysosome Biogenesis in Live Macrophages

חקר Phagolysosome Biogenesis בהמקרופאגים בשידור חי

Phagocytic cells play a major role in the innate immune system by removing and eliminating invading microorganisms in their phagosomes. Phagosome ...

Use of Shigella flexneri to Study Autophagy-Cytoskeleton Interactions

Use of Shigella flexneri to Study Autophagy-Cytoskeleton Interactions

שימוש של<em&gt; Flexneri Shigella</em&gt; כדי לחקור אינטראקציות Autophagy-נוגדנים

Shigella flexneri is an intracellular pathogen that can escape from phagosomes to reach the cytosol, and polymerize the host actin cytoskeleton to promote ...

Proteomic Profiling of Macrophages by 2D Electrophoresis

Proteomic פרופיל של המקרופאגים על ידי 2D אלקטרופורזה

The goal of the two-dimensional (2D) electrophoresis protocol described here is to show how to analyse the phenotype of human cultured macrophages. The ...

Macrophage Cholesterol Depletion and Its Effect on the Phagocytosis of Cryptococcus neoformans

Macrophage Cholesterol Depletion and Its Effect on the Phagocytosis of Cryptococcus neoformans

כולסטרול מקרופאג דלדול והשפעתו על phagocytosis של<em&gt; Neoformans קריפטוקוקוס</em

Cryptococcosis is a life-threatening infection caused by pathogenic fungi of the genus Cryptococcus. Infection occurs upon inhalation of spores, which are ...

Quantification of Cytosolic vs. Vacuolar Salmonella in Primary Macrophages by Differential Permeabilization

Quantification of Cytosolic vs. Vacuolar Salmonella in Primary Macrophages by Differential Permeabilization

כימות של Cytosolic לעומת vacuolar<em&gt; סלמונלה</em&gt; ביסודי המקרופאגים על ידי דיפרנציאל permeabilization

Intracellular bacterial pathogens can replicate in the cytosol or in specialized pathogen-containing vacuoles (PCVs). To reach the cytosol, bacteria like ...

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

בידוד של סלמונלה typhimurium-המכיל Phagosomes של מקרופאגים

Salmonella typhimurium is a facultative intracellular bacterium that causes gastroenteritis in humans. After invasion of the lamina propria, S. ...

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

בידוד והתרבות במבחנה של מקרופאגים מכתשי מאתר ואנושי

Alveolar macrophages are terminally differentiated, lung-resident macrophages of prenatal origin. Alveolar macrophages are unique in their long life and ...

Flow Cytometric Measurement Of ROS Production In Macrophages In Response To Fc&#947;R Cross-linking

Flow Cytometric Measurement Of ROS Production In Macrophages In Response To FcÃƒÅ½Ã‚Â³R Cross-linking

מדידת Cytometric ROS הייצור ב מקרופאגים בתגובה FcγR cross-linking

The oxidative or respiratory burst is used to describe the rapid consumption of oxygen and generation of reactive oxygen species (ROS) by phagocytes in ...

Quantification of Monocyte Chemotactic Activity In Vivo and Characterization of Blood Monocyte Derived Macrophages

הכמת של פעילות כימוכתית מונוציט בVivo ואפיון מקרופאגים הנגזרים מונוציט

Tissue homeostasis and repair are critically dependent on the recruitment of monocyte-derived macrophages. Both under- and over-recruitment of ...