Name: depletion and reconstitution of macrophages in mice
Uploaded: 2012-08-01T13:00:00
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この作品は、消化器/カナダヘルスリサーチ/ Crohn病協会とカナダ新奨励賞の大腸炎財団のカナダの協会によってサポートされているLMSへのクローン病とカナダの大腸炎財団から &quot;研究の援助のグラントによってサポートされていました。

1。クロドロネート含有リポソームを用いたオゾンマクロファージ<ol><li>リポソームは、4℃で保存されている注射前に2時間、彼らは室温（18℃）に順応できるように冷蔵庫からクロドロネート含有リポソーム、PBS-含有リポソーム、または滅菌PBS（インジェクションコントロール）を削除します。 </li><li> 1mlのシリンジに200μlをロードする前に均一な分布を確実にするためにリポソーム8-10倍?...

<ol>
	<li>Gordon, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternative+activation+of+macrophages.">Alternative activation of macrophages.</a> Nat. Rev. Immunol. 3, 23-35 (2003).</li><li>Rescigno, M., Lopatin, U., Chieppa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interactions+among+dendritic+cells,+macrophages,+and+epithelial+cells+in+the+gut:+implications+for+immune+tolerance.">Interactions among dendritic cells, macrophages, and epithelial cells in the gut: implications for immune tolerance.</a> Curr. Opin. Immunol. 20, 669-675 (2008).</li><li>Heinsbroek, S. E., Gordon, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+macrophages+in+inflammatory+bowel+diseases.">The role of macrophages in inflammatory bowel diseases.</a> Expert Rev. Mol. Med. 11, e14 (2009).</li><li>Collins, S. M., Piche, T., Rampal, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+putative+role+of+inflammation+in+the+irritable+bowel+syndrome.">The putative role of inflammation in the irritable bowel syndrome.</a> Gut. 49, 743-745 (2001).</li><li>Maeda, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colon+cancer-derived+factors+activate+NF-kappaB+in+myeloid+cells+via+TLR2+to+link+inflammation+and+tumorigenesis.">Colon cancer-derived factors activate NF-kappaB in myeloid cells via TLR2 to link inflammation and tumorigenesis.</a> Mol. Med. Report. 4, 1083-1088 (2011).</li><li>van Rooijen, N., van Kesteren-Hendrikx, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clodronate+liposomes:+perspectives+in+research+and+therapeutics.">Clodronate liposomes: perspectives in research and therapeutics.</a> J. Liposome Res. 12, 81-94 (2002).</li><li>Hunter, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro-derived+alternatively+activated+macrophages+reduce+colonic+inflammation+in+mice.">In vitro-derived alternatively activated macrophages reduce colonic inflammation in mice.</a> Gastroenterology. 138, 1395-1405 (2010).</li><li>Weisser, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SHIP-deficient,+alternatively+activated+macrophages+protect+mice+during+DSS-induced+colitis.">SHIP-deficient, alternatively activated macrophages protect mice during DSS-induced colitis.</a> J. Leukoc. Biol. 90, 483-492 (2011).</li><li>Qualls, J. E., Kaplan, A. M., van Rooijen, N., Cohen, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+experimental+colitis+by+intestinal+mononuclear+phagocytes.">Suppression of experimental colitis by intestinal mononuclear phagocytes.</a> J. Leukoc. Biol. 80, 802-815 (2006).</li><li>Van Rooijen, N., Sanders, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liposome+mediated+depletion+of+macrophages:+mechanism+of+action,+preparation+of+liposomes+and+applications.">Liposome mediated depletion of macrophages: mechanism of action, preparation of liposomes and applications.</a> J. Immunol. Methods. 174, 83-93 (1994).</li><li>Smith, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infection+with+a+helminth+parasite+prevents+experimental+colitis+via+a+macrophage-mediated+mechanism.">Infection with a helminth parasite prevents experimental colitis via a macrophage-mediated mechanism.</a> J. Immunol. 178, 4557-4566 (2007).</li><li>van Rooijen, N., Hendrikx, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liposomes+for+specific+depletion+of+macrophages+from+organs+and+tissues.">Liposomes for specific depletion of macrophages from organs and tissues.</a> Methods Mol. Biol. 605, 189-203 (2010).</li><li>Kataoka, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+roles+of+vitreal+macrophages+and+circulating+leukocytes+in+retinal+neovascularization.">The roles of vitreal macrophages and circulating leukocytes in retinal neovascularization.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 52, 1431-1438 (2011).</li><li>Weisser, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternative+activation+of+macrophages+by+IL-4+requires+SHIP+degradation.">Alternative activation of macrophages by IL-4 requires SHIP degradation.</a> Eur. J. Immunol. 41, 1742-1753 (2011).</li><li>Cailhier, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+macrophage+ablation+demonstrates+that+resident+macrophages+initiate+acute+peritoneal+inflammation.">Conditional macrophage ablation demonstrates that resident macrophages initiate acute peritoneal inflammation.</a> J. Immunol. 174, 2336-2342 (2005).</li></ol>

マクロファージは、免疫システムにおいて重要な役割を果たしている貪食細胞である。彼らは、自然免疫応答を開始し、後天性免疫応答を誘導する責任があります。一般的に、古典的活性化マクロファージは、IFNγまたはLPSによって活性化され、病原体を排除し、炎症反応1をマウントするための責任がありますされています。逆に、代わりに活性化マクロファージはIL-4あるいはIL-13?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td></tr><tr><td>クロドロネート含有リポソーム</td><td> <a href="http://Clodronateliposomes.org" target="_blank">Clodronateliposomes.org</a> </td><td></td></tr><tr><td> PBS-含有リポソーム</td><td> <a href="http://Clodronateliposomes.org" target="_blank">Clodronateliposomes.org</a> </td><td></td></tr><tr><td>滅菌したPBS pH7.4の</td><td>インビトロジェン</td><td> 14190 </td></tr><tr><td> IMDM </td><td>インビトロジェン</td><td> 12440 </td></tr><tr><td>ウシ胎児血清（FCS） </td><td>インビトロジェン</td><td> 12483 </td></tr><tr><td>酢酸</td><td> BDH Aristar </td><td> BDH3092-500MLP </td></tr><tr><td>モノチオグリセロール（MTG） </td><td>シグマ</td><td> 96から275 </td></tr><tr><td> RecombinantマウスMCSF </td><td> Stemcellテクノロジーズ</td><td> 02951 </td></tr><tr><td>組換えマウスGM-CSF </td><td> Stemcellテクノロジーズ</td><td> 02935 </td></tr><tr><td>組換えマウスIL-3 </td><td> Stemcellテクノロジーズ</td><td> 02903 </td></tr><tr><td>組換えマウスIFNγ </td><td> Stemcellテクノロジーズ</td><td> 02746 </td></tr><tr><td>組換えマウスIL-4 </td><td> Stemcellテクノロジーズ</td><td> 02714 </td></tr><tr><td>細胞解離バッファー</td><td>インビトロジェン</td><td> 13150-016 </td></tr><tr><td>ラットanti-F4/80抗体</td><td> ABD Serotec </td><td> MCA497GA </td></tr><tr><td>マウス抗argiは抗体</td><td> BD伝達研究所</td><td> 610708 </td></tr></tbody></table> 表1は、このプロトコルで使用される特定の試薬 ​​が含まれています。

depletion and reconstitution of macrophages in mice

マクロファージは自然免疫応答を開始し、後天性免疫応答を誘導、伝染性の課題やけがに対する自然免疫応答において重要なプレーヤーである。マクロファージ機能障害は、適切な免疫応答をマウントすることができないにつながることができ、そのように、炎症性腸疾患を含む多くの病気のプロセスに関与されています。マクロファージは、次の2つのカテゴリに大別されている偏光の表現型を表示します。古典的活性化マクロファージは、IFNγまたはLPS刺激によって活性化され、解像度で交互に活性化マクロファージのに対し、IL-4あるいはIL-13によって活性化され、掃気破片や組織リモデリングに参加し、関与している細菌のチャレンジへの応答に重要な役割を果たす炎症の段階。 in vivoでの炎症反応時には、マクロファージが免疫細胞の浸潤の複雑な混合物の中で発見されており、悪化またはresolvinで参加することができますgの炎症。全体の動物モデルにおけるin situでのマクロファージの役割を定義するためには、複雑な環境からマクロファージを枯渇の影響を検討する必要がある。 in situでマクロファージ表現型の役割についての質問をし、表現型が定義された偏光マクロファージは骨髄穿刺液から、ex vivoで誘導することができるとマクロファージの事前の枯渇であるかどうかにかかわらず、マウスに戻って追加しました。プロトコルでクロドロネート含有リポソームここで紹介するのに対し、PBS注入されたコントロールは、デキストラン硫酸ナトリウム（DSS）誘発マウスにおける大腸炎の間に大腸マクロファージを枯渇させるために使用された。さらに、偏光マクロファージはex vivoで誘導され、静脈内注射によりマウスに転送されます。このアプローチには注意点がクロドロネート含有リポソームは枯渇によって観測された効果はマクロファージ特異的、再Oであることを確認するため、樹状細胞やマクロファージの両方を含むすべてのプロの食を枯渇させることです。マクロファージの移入によってfの表現型が必要です。マウスの全身のマクロファージの枯渇は、優れた補完的なアプローチであるCD11bを-DTR背景に戻し交配マウスによって達成することができる。クロドロネート含有リポソーム媒介枯渇の利点は、戻し交配マウスに必要な時間と費用を必要とせず、それは関係なく、マウス（C57BL / 6、BALB / c、または混合背景の背景のマウスで使用することができることです。 。）

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Depletion and Reconstitution of Macrophages in Mice

マクロファージは、多くの組織の恒常性と病理学の中心的な役割を果たしています。ここで紹介するプロトコルは、マクロファージを枯渇させるための方法について説明します<emin vivoでの&gt;</em&gt;、骨髄穿刺液から偏マクロファージを導出し、養子マウスにマクロファージを転送する。これらの技術は偏光マクロファージは、健康と疾患に果たす役割を決定することができます。

マウスのマクロファージの枯渇と再構成

Macrophages are critical players in the innate  immune response to infectious challenge or injury, initiating the innate immune  response and directing ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Depletion of Specific Cell Populations by Complement Depletion

補体の枯渇により特定の細胞集団の枯渇

The purification of immune cell populations is often required in order to study their unique functions.  In particular, molecular approaches such as ...

Study of Phagolysosome Biogenesis in Live Macrophages

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Phagocytic cells play a major role in the innate immune system by removing and eliminating invading microorganisms in their phagosomes. Phagosome ...

Use of Shigella flexneri to Study Autophagy-Cytoskeleton Interactions

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使用<em&gt;フレクスナー赤痢菌</em&gt;オートファジー細胞骨格の相互作用を研究するために

Shigella flexneri is an intracellular pathogen that can escape from phagosomes to reach the cytosol, and polymerize the host actin cytoskeleton to promote ...

Proteomic Profiling of Macrophages by 2D Electrophoresis

2D電気泳動によるマクロファージのプロテオームプロファイリング

The goal of the two-dimensional (2D) electrophoresis protocol described here is to show how to analyse the phenotype of human cultured macrophages. The ...

Macrophage Cholesterol Depletion and Its Effect on the Phagocytosis of Cryptococcus neoformans

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マクロファージコレステロール枯渇との食作用への影響<em&gt;クリプトコックス·ネオフォルマンス</em

Cryptococcosis is a life-threatening infection caused by pathogenic fungi of the genus Cryptococcus. Infection occurs upon inhalation of spores, which are ...

Quantification of Cytosolic vs. Vacuolar Salmonella in Primary Macrophages by Differential Permeabilization

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液胞対細胞質の定量化<em&gt;サルモネラ</em&gt;差動透過化初代マクロファージで

Intracellular bacterial pathogens can replicate in the cytosol or in specialized pathogen-containing vacuoles (PCVs). To reach the cytosol, bacteria like ...

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

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サルモネラの分離-大食細胞のファゴゾームを含む

Salmonella typhimurium is a facultative intracellular bacterium that causes gastroenteritis in humans. After invasion of the lamina propria, S. ...

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

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離とマウスとヒトの肺胞マクロファージの体外培養

Alveolar macrophages are terminally differentiated, lung-resident macrophages of prenatal origin. Alveolar macrophages are unique in their long life and ...

Flow Cytometric Measurement Of ROS Production In Macrophages In Response To Fc&#947;R Cross-linking

Flow Cytometric Measurement Of ROS Production In Macrophages In Response To FcÃƒÅ½Ã‚Â³R Cross-linking

FcγR 架橋への応答におけるマクロファージの活性酸素産生の流れフローサイト メーターによる測定

The oxidative or respiratory burst is used to describe the rapid consumption of oxygen and generation of reactive oxygen species (ROS) by phagocytes in ...

Quantification of Monocyte Chemotactic Activity In Vivo and Characterization of Blood Monocyte Derived Macrophages

生体内における単球血球活性の定量化と血液単球由来マクロファージの特性化

Tissue homeostasis and repair are critically dependent on the recruitment of monocyte-derived macrophages. Both under- and over-recruitment of ...