Name: depletion and reconstitution of macrophages in mice
Uploaded: 2012-08-01T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Depletion and Reconstitution of Macrophages in Mice at JoVE.com

Эта работа была поддержана &quot;Грант в помощь исследованиям&quot; от Крона и колит Фонд Канады LMS, которые поддерживают Канадская ассоциация гастроэнтерологов / Канадская ассоциация здравоохранения с Исследования / Крона и колит Фонд Канады премии следователь новый.

1. Разрушающих Макрофаги Использование клодронат содержащих липосомы <ol><li> Липосомы хранятся при температуре 4 ° C. За два часа до инъекции, удалять клодронат содержащих липосомы, содержащие PBS липосомы, или стерильной PBS (введение контроля) из холодильника, чтобы они могли привыкнуть к ?...

<ol>
	<li>Gordon, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternative+activation+of+macrophages.">Alternative activation of macrophages.</a> Nat. Rev. Immunol. 3, 23-35 (2003).</li><li>Rescigno, M., Lopatin, U., Chieppa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interactions+among+dendritic+cells,+macrophages,+and+epithelial+cells+in+the+gut:+implications+for+immune+tolerance.">Interactions among dendritic cells, macrophages, and epithelial cells in the gut: implications for immune tolerance.</a> Curr. Opin. Immunol. 20, 669-675 (2008).</li><li>Heinsbroek, S. E., Gordon, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+macrophages+in+inflammatory+bowel+diseases.">The role of macrophages in inflammatory bowel diseases.</a> Expert Rev. Mol. Med. 11, e14 (2009).</li><li>Collins, S. M., Piche, T., Rampal, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+putative+role+of+inflammation+in+the+irritable+bowel+syndrome.">The putative role of inflammation in the irritable bowel syndrome.</a> Gut. 49, 743-745 (2001).</li><li>Maeda, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colon+cancer-derived+factors+activate+NF-kappaB+in+myeloid+cells+via+TLR2+to+link+inflammation+and+tumorigenesis.">Colon cancer-derived factors activate NF-kappaB in myeloid cells via TLR2 to link inflammation and tumorigenesis.</a> Mol. Med. Report. 4, 1083-1088 (2011).</li><li>van Rooijen, N., van Kesteren-Hendrikx, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clodronate+liposomes:+perspectives+in+research+and+therapeutics.">Clodronate liposomes: perspectives in research and therapeutics.</a> J. Liposome Res. 12, 81-94 (2002).</li><li>Hunter, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro-derived+alternatively+activated+macrophages+reduce+colonic+inflammation+in+mice.">In vitro-derived alternatively activated macrophages reduce colonic inflammation in mice.</a> Gastroenterology. 138, 1395-1405 (2010).</li><li>Weisser, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SHIP-deficient,+alternatively+activated+macrophages+protect+mice+during+DSS-induced+colitis.">SHIP-deficient, alternatively activated macrophages protect mice during DSS-induced colitis.</a> J. Leukoc. Biol. 90, 483-492 (2011).</li><li>Qualls, J. E., Kaplan, A. M., van Rooijen, N., Cohen, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+experimental+colitis+by+intestinal+mononuclear+phagocytes.">Suppression of experimental colitis by intestinal mononuclear phagocytes.</a> J. Leukoc. Biol. 80, 802-815 (2006).</li><li>Van Rooijen, N., Sanders, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liposome+mediated+depletion+of+macrophages:+mechanism+of+action,+preparation+of+liposomes+and+applications.">Liposome mediated depletion of macrophages: mechanism of action, preparation of liposomes and applications.</a> J. Immunol. Methods. 174, 83-93 (1994).</li><li>Smith, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infection+with+a+helminth+parasite+prevents+experimental+colitis+via+a+macrophage-mediated+mechanism.">Infection with a helminth parasite prevents experimental colitis via a macrophage-mediated mechanism.</a> J. Immunol. 178, 4557-4566 (2007).</li><li>van Rooijen, N., Hendrikx, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liposomes+for+specific+depletion+of+macrophages+from+organs+and+tissues.">Liposomes for specific depletion of macrophages from organs and tissues.</a> Methods Mol. Biol. 605, 189-203 (2010).</li><li>Kataoka, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+roles+of+vitreal+macrophages+and+circulating+leukocytes+in+retinal+neovascularization.">The roles of vitreal macrophages and circulating leukocytes in retinal neovascularization.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 52, 1431-1438 (2011).</li><li>Weisser, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternative+activation+of+macrophages+by+IL-4+requires+SHIP+degradation.">Alternative activation of macrophages by IL-4 requires SHIP degradation.</a> Eur. J. Immunol. 41, 1742-1753 (2011).</li><li>Cailhier, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+macrophage+ablation+demonstrates+that+resident+macrophages+initiate+acute+peritoneal+inflammation.">Conditional macrophage ablation demonstrates that resident macrophages initiate acute peritoneal inflammation.</a> J. Immunol. 174, 2336-2342 (2005).</li></ol>

Макрофаги являются фагоциты, которые играют важную роль в иммунной системе. Они несут ответственность за развязывание врожденного иммунного ответа и направления приобретенного иммунного ответа. Как правило, классически активированные макрофаги активируются IFNγ или LPS и несут ответс?...

<table border="1"><tbody><tr><td> Название реагента </td><td> Компания </td><td> Номер по каталогу </td></tr><tr><td> Клодронат содержащих липосомы </td><td> <a href="http://Clodronateliposomes.org" target="_blank">Clodronateliposomes.org</a> </td><td></td></tr><tr><td> PBS-содержащих липосомы </td><td> <a href="http://Clodronateliposomes.org" target="_blank">Clodronateliposomes.org</a> </td><td></td></tr><tr><td> Стерильные PBS pH7.4 </td><td> Invitrogen </td><td> 14190 </td></tr><tr><td> IMDM </td><td> Invitrogen </td><td> 12440 </td></tr><tr><td> Эмбриональной телячьей сыворотки (FCS) </td><td> Invitrogen </td><td> 12483 </td></tr><tr><td> уксусная кислота </td><td> BDH Aristar </td><td> BDH3092-500MLP </td></tr><tr><td> Монотиоглицерин (MTG) </td><td> Сигма </td><td> 96-275 </td></tr><tr><td> Recombinant мышиных MCSF </td><td> Stemcell технологии </td><td> 02951 </td></tr><tr><td> Рекомбинантный мышиный GM-CSF </td><td> Stemcell технологии </td><td> 02935 </td></tr><tr><td> Рекомбинантный мышиный IL-3 </td><td> Stemcell технологии </td><td> 02903 </td></tr><tr><td> Рекомбинантный мышиный IFNγ </td><td> Stemcell технологии </td><td> 02746 </td></tr><tr><td> Рекомбинантный мышиный ИЛ-4 </td><td> Stemcell технологии </td><td> 02714 </td></tr><tr><td> Клеточная диссоциация буфер </td><td> Invitrogen </td><td> 13150-016 </td></tr><tr><td> Крыса anti-F4/80 антител </td><td> Абд Serotec </td><td> MCA497GA </td></tr><tr><td> Мышь против Арги антител </td><td> Лаборатории BD трансдукция </td><td> 610708 </td></tr></tbody></table> Таблица 1. Конкретные реагенты, используемые в настоящем протоколе.

depletion and reconstitution of macrophages in mice

Макрофаги являются важнейшими игроками на врожденный иммунный ответ на инфекционные проблемы или травмы, начала врожденного иммунного ответа и направления приобретенного иммунного ответа. Макрофагов дисфункция может привести к невозможности установить соответствующий иммунный ответ и, таким образом, был замешан во многих болезненных процессов, в том числе воспалительных заболеваний кишечника. Макрофаги отображение поляризованных фенотипов, которые разделены на две категории. Классически активированными макрофагами, активируются стимуляции IFNγ или ЛПС, играют важную роль в ответ на бактериальные задачей в то время как альтернативы активированные макрофаги, активированные ИЛ-4 и IL-13, участвовать в мусор очистки и тканей реконструкции и были вовлечены в разрешение фазы воспаления. В ходе воспалительной реакции в живом организме, макрофаги находятся на фоне сложной смеси проникают иммунные клетки и могут принимать участие, обостряя или resolvinг воспаления. Для определения роли макрофагов в месте, в целом модель животного, необходимо изучить влияние истощения макрофаги из сложных условиях. Чтобы задавать вопросы о роли макрофагов фенотип на месте, фенотипически определенный поляризованных макрофаги могут быть выведены бывшие естественных условиях, от аспирационной костного мозга и добавил к мышам, с или без предварительного истощения макрофагов. В протоколе, представленные здесь клодронат содержащих липосомы, против PBS вводится контроль, были использованы для разрушающих толстой макрофагов в декстран сульфата натрия (DSS), индуцированного колита у мышей. Кроме того, поляризованный макрофаги были получены бывшим естественных и переданы мышей путем внутривенной инъекции. Предостережение такого подхода является то, что клодронат содержащих липосомы, разрушающих все профессиональные фагоциты, в том числе и дендритных клеток и макрофагов, с тем чтобы обеспечить наблюдаемый эффект от истощения макрофагов конкретных, о восстановлениие фенотип приемными передачи макрофаги необходимо. Системный истощение макрофагов у мышей также может быть достигнуто путем обратного скрещивания мышей на CD11b-DTR фон, который является отличным взаимодополняющий подход. Преимущество клодронат содержащих липосомы опосредованного истощение является то, что он не требует времени и средств, участвующих в беккросс мышей и он может быть использован в мыши независимо от того, на фоне мышей (C57BL / 6, BALB / с, или смешанного происхождения ).

Watch this Scientific Journal Video about Depletion and Reconstitution of Macrophages in Mice at JoVE.com

Depletion and Reconstitution of Macrophages in Mice

Макрофаги играют центральную роль в поддержании гомеостаза и патологии во многих тканях. Протокол, представленные здесь описываются методы истощения макрофагов<em&gt; В естественных условиях</em&gt;, Получения поляризованных макрофаги из костного мозга аспирационной и восприимчиво передачи макрофагов мышам. Эти методы позволяют определить ту роль, которую поляризованных макрофаги играют в здоровье и болезни.

Истощение и разведения макрофагов у мышей

Macrophages are critical players in the innate  immune response to infectious challenge or injury, initiating the innate immune  response and directing ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Depletion of Specific Cell Populations by Complement Depletion

Истощение конкретные клеточные популяции путем дополнения Истощение

The purification of immune cell populations is often required in order to study their unique functions.  In particular, molecular approaches such as ...

Study of Phagolysosome Biogenesis in Live Macrophages

Изучение фаголизосомы биогенеза в живых макрофагов

Phagocytic cells play a major role in the innate immune system by removing and eliminating invading microorganisms in their phagosomes. Phagosome ...

Use of Shigella flexneri to Study Autophagy-Cytoskeleton Interactions

Use of Shigella flexneri to Study Autophagy-Cytoskeleton Interactions

Использование<em&gt; Shigella flexneri</em&gt; Для изучения аутофагии-Цитоскелет взаимодействий

Shigella flexneri is an intracellular pathogen that can escape from phagosomes to reach the cytosol, and polymerize the host actin cytoskeleton to promote ...

Proteomic Profiling of Macrophages by 2D Electrophoresis

Протеомный профилирования макрофагов 2D электрофореза

The goal of the two-dimensional (2D) electrophoresis protocol described here is to show how to analyse the phenotype of human cultured macrophages. The ...

Macrophage Cholesterol Depletion and Its Effect on the Phagocytosis of Cryptococcus neoformans

Macrophage Cholesterol Depletion and Its Effect on the Phagocytosis of Cryptococcus neoformans

Макрофагов Холестерин истощение и ее влияние на фагоцитоз<em&gt; Cryptococcus neoformans</em

Cryptococcosis is a life-threatening infection caused by pathogenic fungi of the genus Cryptococcus. Infection occurs upon inhalation of spores, which are ...

Quantification of Cytosolic vs. Vacuolar Salmonella in Primary Macrophages by Differential Permeabilization

Quantification of Cytosolic vs. Vacuolar Salmonella in Primary Macrophages by Differential Permeabilization

Количественное Цитозольные против вакуолярной<em&gt; Сальмонелла</em&gt; В первичных макрофагах дифференциальной проницаемости

Intracellular bacterial pathogens can replicate in the cytosol or in specialized pathogen-containing vacuoles (PCVs). To reach the cytosol, bacteria like ...

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Изоляция Salmonella typhimurium-содержащих Phagosomes от макрофагов

Salmonella typhimurium is a facultative intracellular bacterium that causes gastroenteritis in humans. After invasion of the lamina propria, S. ...

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Изоляции и в пробирке культуры мышиных и человека альвеолярные макрофаги

Alveolar macrophages are terminally differentiated, lung-resident macrophages of prenatal origin. Alveolar macrophages are unique in their long life and ...

Flow Cytometric Measurement Of ROS Production In Macrophages In Response To Fc&#947;R Cross-linking

Flow Cytometric Measurement Of ROS Production In Macrophages In Response To FcÃƒÅ½Ã‚Â³R Cross-linking

Измерение расхода гранулярных производства рос в макрофагах в ответ на FcγR сшивки

The oxidative or respiratory burst is used to describe the rapid consumption of oxygen and generation of reactive oxygen species (ROS) by phagocytes in ...

Quantification of Monocyte Chemotactic Activity In Vivo and Characterization of Blood Monocyte Derived Macrophages

Количественная оценка моноцитной хемотаксической активности in Vivo и характеристика кровяных моноцитов, полученных макрофагами

Tissue homeostasis and repair are critically dependent on the recruitment of monocyte-derived macrophages. Both under- and over-recruitment of ...