Name: depletion and reconstitution of macrophages in mice
Uploaded: 2012-08-01T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Depletion and Reconstitution of Macrophages in Mice at JoVE.com

Este trabajo fue apoyado por una &quot;subvención al Servicio de la Investigación&quot; de la enfermedad de Crohn y Colitis Foundation of Canada al LMS, que se apoya en una Asociación Canadiense de Gastroenterología / Asociación Canadiense de Investigación en Salud / enfermedad de Crohn &#39;s and Colitis Foundation Premio de Canadá, New Investigator.

1. Los macrófagos que agotan la Utilización de liposomas que contienen clodronato <ol><li> Los liposomas se almacenan a 4 ° C. Dos horas antes de la inyección, retire clodronato que contienen liposomas, los liposomas que contienen PBS o PBS estéril (inyección de control) del refrigerador para permitir que se adapte a la temperatura ambiente (18 ° C). </li><li> Invertir los tubos que contienen liposomas 8-10 veces para asegurar una distribución uniforme antes de cargar 200 l en una jeringa de 1 ml. Colocar una ...

<ol>
	<li>Gordon, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternative+activation+of+macrophages.">Alternative activation of macrophages.</a> Nat. Rev. Immunol. 3, 23-35 (2003).</li><li>Rescigno, M., Lopatin, U., Chieppa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interactions+among+dendritic+cells,+macrophages,+and+epithelial+cells+in+the+gut:+implications+for+immune+tolerance.">Interactions among dendritic cells, macrophages, and epithelial cells in the gut: implications for immune tolerance.</a> Curr. Opin. Immunol. 20, 669-675 (2008).</li><li>Heinsbroek, S. E., Gordon, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+macrophages+in+inflammatory+bowel+diseases.">The role of macrophages in inflammatory bowel diseases.</a> Expert Rev. Mol. Med. 11, e14 (2009).</li><li>Collins, S. M., Piche, T., Rampal, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+putative+role+of+inflammation+in+the+irritable+bowel+syndrome.">The putative role of inflammation in the irritable bowel syndrome.</a> Gut. 49, 743-745 (2001).</li><li>Maeda, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colon+cancer-derived+factors+activate+NF-kappaB+in+myeloid+cells+via+TLR2+to+link+inflammation+and+tumorigenesis.">Colon cancer-derived factors activate NF-kappaB in myeloid cells via TLR2 to link inflammation and tumorigenesis.</a> Mol. Med. Report. 4, 1083-1088 (2011).</li><li>van Rooijen, N., van Kesteren-Hendrikx, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clodronate+liposomes:+perspectives+in+research+and+therapeutics.">Clodronate liposomes: perspectives in research and therapeutics.</a> J. Liposome Res. 12, 81-94 (2002).</li><li>Hunter, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro-derived+alternatively+activated+macrophages+reduce+colonic+inflammation+in+mice.">In vitro-derived alternatively activated macrophages reduce colonic inflammation in mice.</a> Gastroenterology. 138, 1395-1405 (2010).</li><li>Weisser, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SHIP-deficient,+alternatively+activated+macrophages+protect+mice+during+DSS-induced+colitis.">SHIP-deficient, alternatively activated macrophages protect mice during DSS-induced colitis.</a> J. Leukoc. Biol. 90, 483-492 (2011).</li><li>Qualls, J. E., Kaplan, A. M., van Rooijen, N., Cohen, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+experimental+colitis+by+intestinal+mononuclear+phagocytes.">Suppression of experimental colitis by intestinal mononuclear phagocytes.</a> J. Leukoc. Biol. 80, 802-815 (2006).</li><li>Van Rooijen, N., Sanders, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liposome+mediated+depletion+of+macrophages:+mechanism+of+action,+preparation+of+liposomes+and+applications.">Liposome mediated depletion of macrophages: mechanism of action, preparation of liposomes and applications.</a> J. Immunol. Methods. 174, 83-93 (1994).</li><li>Smith, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infection+with+a+helminth+parasite+prevents+experimental+colitis+via+a+macrophage-mediated+mechanism.">Infection with a helminth parasite prevents experimental colitis via a macrophage-mediated mechanism.</a> J. Immunol. 178, 4557-4566 (2007).</li><li>van Rooijen, N., Hendrikx, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liposomes+for+specific+depletion+of+macrophages+from+organs+and+tissues.">Liposomes for specific depletion of macrophages from organs and tissues.</a> Methods Mol. Biol. 605, 189-203 (2010).</li><li>Kataoka, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+roles+of+vitreal+macrophages+and+circulating+leukocytes+in+retinal+neovascularization.">The roles of vitreal macrophages and circulating leukocytes in retinal neovascularization.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 52, 1431-1438 (2011).</li><li>Weisser, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternative+activation+of+macrophages+by+IL-4+requires+SHIP+degradation.">Alternative activation of macrophages by IL-4 requires SHIP degradation.</a> Eur. J. Immunol. 41, 1742-1753 (2011).</li><li>Cailhier, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+macrophage+ablation+demonstrates+that+resident+macrophages+initiate+acute+peritoneal+inflammation.">Conditional macrophage ablation demonstrates that resident macrophages initiate acute peritoneal inflammation.</a> J. Immunol. 174, 2336-2342 (2005).</li></ol>

Los macrófagos son células fagocíticas que juegan un papel importante en el sistema inmunológico. Ellos son los responsables de iniciar la respuesta inmune innata y la dirección de la respuesta inmune adquirida. Típicamente, los macrófagos activados clásicamente son activados por IFN o LPS y son responsables de la eliminación de patógenos y montaje de una respuesta inflamatoria 1. A la inversa, los macrófagos activados alternativamente se activan por la IL-4 o IL-13 y jugar un papel en los desechos...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nombre del reactivo </td><td> Empresa </td><td> Número de catálogo </td></tr><tr><td> Que contienen clodronato-liposomas </td><td> <a href="http://Clodronateliposomes.org" target="_blank">Clodronateliposomes.org</a> </td><td></td></tr><tr><td> PBS que contienen liposomas </td><td> <a href="http://Clodronateliposomes.org" target="_blank">Clodronateliposomes.org</a> </td><td></td></tr><tr><td> PBS estéril pH 7,4 </td><td> Invitrogen </td><td> 14190 </td></tr><tr><td> IMDM </td><td> Invitrogen </td><td> 12440 </td></tr><tr><td> Suero fetal bovino (FCS) </td><td> Invitrogen </td><td> 12483 </td></tr><tr><td> ácido acético </td><td> BDH Aristar </td><td> BDH3092-500MLP </td></tr><tr><td> Monotioglicerol (MTG) </td><td> Sigma </td><td> 96-275 </td></tr><tr><td> RECOMBnante murino MCSF </td><td> StemCell Tecnologías </td><td> 02951 </td></tr><tr><td> Recombinante GM-CSF murino </td><td> StemCell Tecnologías </td><td> 02935 </td></tr><tr><td> Recombinante IL-3 murina </td><td> StemCell Tecnologías </td><td> 02903 </td></tr><tr><td> Recombinante murino IFN </td><td> StemCell Tecnologías </td><td> 02746 </td></tr><tr><td> Recombinante de IL-4 murino </td><td> StemCell Tecnologías </td><td> 02714 </td></tr><tr><td> Disociación celular buffer </td><td> Invitrogen </td><td> 13150-016 </td></tr><tr><td> Rata anti-F4/80 anticuerpos </td><td> AbD Serotec </td><td> MCA497GA </td></tr><tr><td> Mouse anti-anticuerpos Argi </td><td> BD Transduction Laboratories </td><td> 610708 </td></tr></tbody></table> Tabla 1. Reactivos específicos utilizados en este protocolo.

depletion and reconstitution of macrophages in mice

Los macrófagos son participantes cruciales en la respuesta inmune innata a cualquier reto infeccioso o lesión, iniciando la respuesta inmune innata y la dirección de la respuesta inmune adquirida. La disfunción de macrófagos puede conducir a la incapacidad de montar una respuesta inmune adecuada y, como tal, ha sido implicado en muchos procesos patológicos, incluyendo las enfermedades inflamatorias del intestino. Los macrófagos muestran fenotipos polarizadas que se dividen en dos categorías. Macrófagos activados Clásicamente, activada por la estimulación con LPS o IFN, desempeñan un papel esencial en la respuesta a la exposición a las bacterias, mientras que los macrófagos activados alternativamente, activada por IL-4 o IL-13, participar en los residuos de barrido y la remodelación tisular y han sido implicados en la resolución fase de la inflamación. Durante una respuesta inflamatoria in vivo, los macrófagos se encuentran en medio de una mezcla compleja de la infiltración de células inmunes y puede participar por exacerbar o resolvinag inflamación. Para definir la función de los macrófagos in situ en un modelo animal completo, es necesario examinar el efecto de agotamiento de los macrófagos del entorno complejo. Para hacer preguntas sobre el papel de fenotipo de macrófagos in situ, fenotípicamente definidos los macrófagos polarizados se pueden derivar ex vivo, a partir de aspirados de médula ósea y se añade de nuevo a los ratones, con o sin el agotamiento previo de los macrófagos. En el protocolo presentado aquí clodronato liposomas que contienen, en comparación con los controles de PBS inyectados, se utilizaron para agotar los macrófagos colon durante dextrano sulfato de sodio (DSS)-colitis inducida en ratones. Además, los macrófagos polarizados se obtuvieron ex vivo y se transfiere a los ratones por inyección intravenosa. Una advertencia de este enfoque es que los liposomas que contienen clodronato agotan todos los fagocitos profesionales, incluyendo tanto las células dendríticas y los macrófagos para asegurar el efecto observado por el agotamiento de los macrófagos es específica, la reconstitución ofenotipo f por transferencia adoptiva de los macrófagos es necesario. Agotamiento macrófagos sistémica en ratones también se puede lograr por retrocruzamiento ratones sobre un fondo CD11b-DTR, que es un enfoque complementario excelente. La ventaja de clodronato contiene mediada por liposomas agotamiento es que no requiere el tiempo y los gastos implicados en ratones retrocruzamiento y que puede ser utilizado en ratones con independencia del fondo de los ratones (C57BL / 6, BALB / c, o fondo mixto ).

Watch this Scientific Journal Video about Depletion and Reconstitution of Macrophages in Mice at JoVE.com

Depletion and Reconstitution of Macrophages in Mice

Los macrófagos juegan un papel central en la homeostasis y la patología en muchos tejidos. El protocolo presentado aquí se describen métodos para agotar los macrófagos<em&gt; En vivo</em&gt;, Que derivan de los macrófagos polarizados aspirados de médula ósea, y la transferencia adoptiva macrófagos en ratones. Estas técnicas permiten determinar el papel que los macrófagos polarizados desempeñan en la salud y la enfermedad.

El agotamiento y la reconstitución de los macrófagos en ratones

Macrophages are critical players in the innate  immune response to infectious challenge or injury, initiating the innate immune  response and directing ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Depletion of Specific Cell Populations by Complement Depletion

El agotamiento de las poblaciones de células específicas por el agotamiento del complemento

The purification of immune cell populations is often required in order to study their unique functions.  In particular, molecular approaches such as ...

Investigación

Inmunología e Infección

Study of Phagolysosome Biogenesis in Live Macrophages

Estudio de fagolisosoma Biogénesis en macrófagos en directo

Phagocytic cells play a major role in the innate immune system by removing and eliminating invading microorganisms in their phagosomes. Phagosome ...

Use of Shigella flexneri to Study Autophagy-Cytoskeleton Interactions

Use of Shigella flexneri to Study Autophagy-Cytoskeleton Interactions

El uso de<em&gt; Flexneri Shigella</em&gt; Para estudiar las interacciones Autophagy Citoesqueleto

Shigella flexneri is an intracellular pathogen that can escape from phagosomes to reach the cytosol, and polymerize the host actin cytoskeleton to promote ...

Proteomic Profiling of Macrophages by 2D Electrophoresis

Proteómico de perfiles de los macrófagos por electroforesis 2D

The goal of the two-dimensional (2D) electrophoresis protocol described here is to show how to analyse the phenotype of human cultured macrophages. The ...

Macrophage Cholesterol Depletion and Its Effect on the Phagocytosis of Cryptococcus neoformans

Macrophage Cholesterol Depletion and Its Effect on the Phagocytosis of Cryptococcus neoformans

El colesterol de los macrófagos agotamiento y su efecto sobre la fagocitosis de<em&gt; Cryptococcus neoformans</em

Cryptococcosis is a life-threatening infection caused by pathogenic fungi of the genus Cryptococcus. Infection occurs upon inhalation of spores, which are ...

Quantification of Cytosolic vs. Vacuolar Salmonella in Primary Macrophages by Differential Permeabilization

Quantification of Cytosolic vs. Vacuolar Salmonella in Primary Macrophages by Differential Permeabilization

Cuantificación de Citosólica vs. Vacuolar<em&gt; Salmonella</em&gt; En macrófagos primarios por permeabilización diferencial

Intracellular bacterial pathogens can replicate in the cytosol or in specialized pathogen-containing vacuoles (PCVs). To reach the cytosol, bacteria like ...

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Aislamiento de Salmonella typhimurium-que contienen fagosomas de los macrófagos

Salmonella typhimurium is a facultative intracellular bacterium that causes gastroenteritis in humans. After invasion of the lamina propria, S. ...

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Aislamiento y cultivo In Vitro de los macrófagos alveolares murinos y humanos

Alveolar macrophages are terminally differentiated, lung-resident macrophages of prenatal origin. Alveolar macrophages are unique in their long life and ...

Flow Cytometric Measurement Of ROS Production In Macrophages In Response To Fc&#947;R Cross-linking

Flow Cytometric Measurement Of ROS Production In Macrophages In Response To FcÃƒÅ½Ã‚Â³R Cross-linking

Medición de Cytometric del flujo de producción de ROS en los macrófagos en respuesta a Cross-linking FcγR

The oxidative or respiratory burst is used to describe the rapid consumption of oxygen and generation of reactive oxygen species (ROS) by phagocytes in ...

Quantification of Monocyte Chemotactic Activity In Vivo and Characterization of Blood Monocyte Derived Macrophages

Cuantificación de la actividad quimiotáctica monocitos en Vivo y caracterización de los macrófagos derivados de monocitos sanguíneos

Tissue homeostasis and repair are critically dependent on the recruitment of monocyte-derived macrophages. Both under- and over-recruitment of ...