Name: depletion and reconstitution of macrophages in mice
Uploaded: 2012-08-01T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Depletion and Reconstitution of Macrophages in Mice at JoVE.com

Detta arbete stöds av en &quot;Grant till förmån för forskning&quot; från Crohns och kolit Foundation of Canada till LMS, som stöds av en kanadensisk Association of Gastroenterology / kanadensiska Association of Health Research / Crohns och kolit Foundation of Kanada New Investigator Award.

1. Utarmande Makrofager Använda Klodronat-innehållande liposomer <ol><li> Liposomer förvarades vid 4 ° C. Två timmar före injektion, ta bort klodronat-innehållande liposomer, PBS innehållande liposomer eller sterilt PBS (injektion kontroll) ur kylskåpet så att de kan anpassa sig till rumstemperatur (18 ° C). </li><li> Invertera rören innehållande liposomer 8-10 gånger för att säkerställa en jämn fördelning före laddning 200 pl i en 1 ml spruta. Fästa en 26 gauge nål till toppen av sprutan. </li><...

<ol>
	<li>Gordon, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternative+activation+of+macrophages.">Alternative activation of macrophages.</a> Nat. Rev. Immunol. 3, 23-35 (2003).</li><li>Rescigno, M., Lopatin, U., Chieppa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interactions+among+dendritic+cells,+macrophages,+and+epithelial+cells+in+the+gut:+implications+for+immune+tolerance.">Interactions among dendritic cells, macrophages, and epithelial cells in the gut: implications for immune tolerance.</a> Curr. Opin. Immunol. 20, 669-675 (2008).</li><li>Heinsbroek, S. E., Gordon, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+macrophages+in+inflammatory+bowel+diseases.">The role of macrophages in inflammatory bowel diseases.</a> Expert Rev. Mol. Med. 11, e14 (2009).</li><li>Collins, S. M., Piche, T., Rampal, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+putative+role+of+inflammation+in+the+irritable+bowel+syndrome.">The putative role of inflammation in the irritable bowel syndrome.</a> Gut. 49, 743-745 (2001).</li><li>Maeda, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colon+cancer-derived+factors+activate+NF-kappaB+in+myeloid+cells+via+TLR2+to+link+inflammation+and+tumorigenesis.">Colon cancer-derived factors activate NF-kappaB in myeloid cells via TLR2 to link inflammation and tumorigenesis.</a> Mol. Med. Report. 4, 1083-1088 (2011).</li><li>van Rooijen, N., van Kesteren-Hendrikx, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clodronate+liposomes:+perspectives+in+research+and+therapeutics.">Clodronate liposomes: perspectives in research and therapeutics.</a> J. Liposome Res. 12, 81-94 (2002).</li><li>Hunter, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro-derived+alternatively+activated+macrophages+reduce+colonic+inflammation+in+mice.">In vitro-derived alternatively activated macrophages reduce colonic inflammation in mice.</a> Gastroenterology. 138, 1395-1405 (2010).</li><li>Weisser, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SHIP-deficient,+alternatively+activated+macrophages+protect+mice+during+DSS-induced+colitis.">SHIP-deficient, alternatively activated macrophages protect mice during DSS-induced colitis.</a> J. Leukoc. Biol. 90, 483-492 (2011).</li><li>Qualls, J. E., Kaplan, A. M., van Rooijen, N., Cohen, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+experimental+colitis+by+intestinal+mononuclear+phagocytes.">Suppression of experimental colitis by intestinal mononuclear phagocytes.</a> J. Leukoc. Biol. 80, 802-815 (2006).</li><li>Van Rooijen, N., Sanders, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liposome+mediated+depletion+of+macrophages:+mechanism+of+action,+preparation+of+liposomes+and+applications.">Liposome mediated depletion of macrophages: mechanism of action, preparation of liposomes and applications.</a> J. Immunol. Methods. 174, 83-93 (1994).</li><li>Smith, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infection+with+a+helminth+parasite+prevents+experimental+colitis+via+a+macrophage-mediated+mechanism.">Infection with a helminth parasite prevents experimental colitis via a macrophage-mediated mechanism.</a> J. Immunol. 178, 4557-4566 (2007).</li><li>van Rooijen, N., Hendrikx, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liposomes+for+specific+depletion+of+macrophages+from+organs+and+tissues.">Liposomes for specific depletion of macrophages from organs and tissues.</a> Methods Mol. Biol. 605, 189-203 (2010).</li><li>Kataoka, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+roles+of+vitreal+macrophages+and+circulating+leukocytes+in+retinal+neovascularization.">The roles of vitreal macrophages and circulating leukocytes in retinal neovascularization.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 52, 1431-1438 (2011).</li><li>Weisser, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternative+activation+of+macrophages+by+IL-4+requires+SHIP+degradation.">Alternative activation of macrophages by IL-4 requires SHIP degradation.</a> Eur. J. Immunol. 41, 1742-1753 (2011).</li><li>Cailhier, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+macrophage+ablation+demonstrates+that+resident+macrophages+initiate+acute+peritoneal+inflammation.">Conditional macrophage ablation demonstrates that resident macrophages initiate acute peritoneal inflammation.</a> J. Immunol. 174, 2336-2342 (2005).</li></ol>

Makrofager är fagocytiska celler som spelar en viktig roll i immunsystemet. De är ansvariga för initiering av medfödda immunresponsen och rikta den förvärvade immunresponsen. Vanligtvis är klassiskt aktiverade makrofager aktiveras genom IFNy eller LPS och ansvarar för att eliminera patogener och montering ett inflammatoriskt svar 1. Omvänt är alternativt aktiverade makrofager, aktiverade med IL-4 eller IL-13 och spelar en roll i skräp eliminerande och omformning av vävnader under upplösningen av ...

<table border="1"><tbody><tr><td> Namnet på reagens </td><td> Företaget </td><td> Katalognummer </td></tr><tr><td> Klodronat-innehållande liposomer </td><td> <a href="http://Clodronateliposomes.org" target="_blank">Clodronateliposomes.org</a> </td><td></td></tr><tr><td> PBS-innehållande liposomer </td><td> <a href="http://Clodronateliposomes.org" target="_blank">Clodronateliposomes.org</a> </td><td></td></tr><tr><td> Steril PBS pH 7,4 </td><td> Invitrogen </td><td> 14.190 </td></tr><tr><td> IMDM </td><td> Invitrogen </td><td> 12.440 </td></tr><tr><td> Fetalt kalvserum (FCS) </td><td> Invitrogen </td><td> 12.483 </td></tr><tr><td> ättiksyra </td><td> BDH Aristar </td><td> BDH3092-500MLP </td></tr><tr><td> Monotioglycerol (MTG) </td><td> Sigma </td><td> 96-275 </td></tr><tr><td> Recombinant murin mCSF </td><td> StemCell Technologies </td><td> 02.951 </td></tr><tr><td> Rekombinant murin GM-CSF </td><td> StemCell Technologies </td><td> 02.935 </td></tr><tr><td> Rekombinant murint IL-3 </td><td> StemCell Technologies </td><td> 02.903 </td></tr><tr><td> Rekombinant murint IFN-y </td><td> StemCell Technologies </td><td> 02.746 </td></tr><tr><td> Rekombinant murint IL-4 </td><td> StemCell Technologies </td><td> 02.714 </td></tr><tr><td> Celldissociation Buffert </td><td> Invitrogen </td><td> 13150-016 </td></tr><tr><td> Rått-anti-F4/80 Antikropp </td><td> ABD Serotec </td><td> MCA497GA </td></tr><tr><td> Mus-anti-Argi Antikropp </td><td> BD Transduction Laboratories </td><td> 610.708 </td></tr></tbody></table> Tabell 1. Särskilda reagenser som används i detta protokoll.

depletion and reconstitution of macrophages in mice

Makrofager är viktiga aktörer i det medfödda immunsvaret mot infektiös utmaning eller skada, inleda det medfödda immunförsvaret och leda det förvärvade immunsvaret. Makrofag dysfunktion kan leda till oförmåga att montera en lämplig immunrespons och som sådan, har implicerats i många sjukdomsförlopp, inkluderande inflammatoriska tarmsjukdomar. Makrofager visa polariserade fenotyper som i stort sett delas in i två kategorier. Klassiskt aktiverade makrofager, aktiverade genom stimulering med IFNy eller LPS spelar en väsentlig roll i gensvar på bakteriell utmaning medan alternativt aktiverade makrofager, aktiverade med IL-4 eller IL-13, delta i skräp eliminerande och vävnadsombildning och har implicerats i lösningen fas av inflammation. Under ett inflammatoriskt svar in vivo, är makrofager mitt bland en komplex blandning av infiltrera immunceller och kan delta genom att förvärra eller resolving inflammation. För att definiera rollen av makrofager in situ i ett helt djurmodell, är det nödvändigt att undersöka effekten av förbruka makrofager från komplex miljö. Att ställa frågor om vilken roll makrofag fenotyp in situ, kan fenotypiskt definierade polariserade makrofager härledas ex vivo, från benmärgsaspirat och läggs tillbaka till möss, med eller utan föregående utarmning av makrofager. I protokollet som presenteras här klodronat-innehållande liposomer, mot PBS injicerade kontroller användes för att utarma colonic makrofager under dextran natriumsulfat (DSS)-inducerad kolit i möss. Dessutom har polariserade makrofager härledda ex vivo och överfördes till möss genom intravenös injektion. En nackdel med detta tillvägagångssätt är att klodronat-innehållande liposomer bryter alla professionella fagocyter, däribland både dendritiska celler och makrofager så att se till att effekten observerades av utarmning är makrofag-specifik, beredning of fenotyp genom adoptiv överföring av makrofager som är nödvändigt. Systemisk makrofag utarmning i möss kan också uppnås genom återkorsning möss på en CD11b-DTR bakgrund, vilket är ett utmärkt komplement. Fördelen av klodronat-innehållande liposommedierad utarmning är att den inte kräver tid och kostnad involverad i återkorsning möss och den kan användas i möss oberoende av bakgrunden till möss (C57BL / 6, Balb / c-, eller blandad bakgrund ).

Watch this Scientific Journal Video about Depletion and Reconstitution of Macrophages in Mice at JoVE.com

Depletion and Reconstitution of Macrophages in Mice

Makrofager spelar en central roll i homeostas och patologi i många vävnader. Protokollet presenteras här beskriver metoder för förbruka makrofager<em&gt; In vivo</em&gt; Härrör polariserade makrofager från benmärg aspirat och adoptivt överföra makrofager i möss. Dessa tekniker kan bestämma den roll som polariserade makrofager spelar i hälsa och sjukdom.

Utarmning och Beredning av makrofager i möss

Macrophages are critical players in the innate  immune response to infectious challenge or injury, initiating the innate immune  response and directing ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Depletion of Specific Cell Populations by Complement Depletion

Utarmning av specifika cellpopulationer med Komplettera Utarmning

The purification of immune cell populations is often required in order to study their unique functions.  In particular, molecular approaches such as ...

Study of Phagolysosome Biogenesis in Live Macrophages

Studie av Phagolysosome biogenes i Live Makrofager

Phagocytic cells play a major role in the innate immune system by removing and eliminating invading microorganisms in their phagosomes. Phagosome ...

Use of Shigella flexneri to Study Autophagy-Cytoskeleton Interactions

Use of Shigella flexneri to Study Autophagy-Cytoskeleton Interactions

Användning av<em&gt; Shigella flexneri</em&gt; Att studera autophagy-Cytoskeleton interaktioner

Shigella flexneri is an intracellular pathogen that can escape from phagosomes to reach the cytosol, and polymerize the host actin cytoskeleton to promote ...

Proteomic Profiling of Macrophages by 2D Electrophoresis

Proteomik Profilering av makrofager från 2D elektrofores

The goal of the two-dimensional (2D) electrophoresis protocol described here is to show how to analyse the phenotype of human cultured macrophages. The ...

Macrophage Cholesterol Depletion and Its Effect on the Phagocytosis of Cryptococcus neoformans

Macrophage Cholesterol Depletion and Its Effect on the Phagocytosis of Cryptococcus neoformans

Makrofag Kolesterol Utarmning och dess effekt på Fagocytos av<em&gt; Cryptococcus neoformans</em

Cryptococcosis is a life-threatening infection caused by pathogenic fungi of the genus Cryptococcus. Infection occurs upon inhalation of spores, which are ...

Quantification of Cytosolic vs. Vacuolar Salmonella in Primary Macrophages by Differential Permeabilization

Quantification of Cytosolic vs. Vacuolar Salmonella in Primary Macrophages by Differential Permeabilization

Kvantifiering av cytosoliska vs. vakuolär<em&gt; Salmonella</em&gt; I primära makrofager genom Differential Permeabilization

Intracellular bacterial pathogens can replicate in the cytosol or in specialized pathogen-containing vacuoles (PCVs). To reach the cytosol, bacteria like ...

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Isolering av Salmonella typhimurium-innehållande Phagosomes från makrofager

Salmonella typhimurium is a facultative intracellular bacterium that causes gastroenteritis in humans. After invasion of the lamina propria, S. ...

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Isolering och In Vitro kultur av murina och mänskliga alveolära makrofager

Alveolar macrophages are terminally differentiated, lung-resident macrophages of prenatal origin. Alveolar macrophages are unique in their long life and ...

Flow Cytometric Measurement Of ROS Production In Macrophages In Response To Fc&#947;R Cross-linking

Flow Cytometric Measurement Of ROS Production In Macrophages In Response To FcÃƒÅ½Ã‚Â³R Cross-linking

Flödescytometrisk flödesmätning av ROS produktion i makrofager som svar på FcγR Cross-linking

The oxidative or respiratory burst is used to describe the rapid consumption of oxygen and generation of reactive oxygen species (ROS) by phagocytes in ...

Quantification of Monocyte Chemotactic Activity In Vivo and Characterization of Blood Monocyte Derived Macrophages

Kvantifiering av Monocytisk Chemotaktisk aktivitet in vivo och karakterisering av Blodmonocyte härledda makrofager

Tissue homeostasis and repair are critically dependent on the recruitment of monocyte-derived macrophages. Both under- and over-recruitment of ...