Name: multi-parameter measurement of the permeability transition pore opening in isolated mouse heart mitochondria
Uploaded: 2012-09-07T12:00:00
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1. 마우스 심장에서 미토콘드리아의 절연 <ol><li> 마음이 미토콘드리아 분리하려면, 마취 및 지역 기관 동물 케어 및 사용위원회의 승인을 절차에 따라 쥐를 희생. </li></ol> 참고 : 미토콘드리아 격리 프로토콜의 모든 단계가 얼음에서 수행해야합니다. 얼음 차가운 버퍼 및 사전 차가운 페트리 요리, 팔콘 튜브 및 Eppendorf 튜브를 사용하십시오. 프로토콜에 주어진 ?...

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	<li>Kroemer, G., Galluzzi, L., Brenner, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+Membrane+Permeabilization+in+Cell+Death.">Mitochondrial Membrane Permeabilization in Cell Death.</a> Physiol. Rev. 87, 99-163 (2007).</li><li>Elrod, J., Wong, R., Mishra, S., Vagnozzi, R. J., Sakthievel, B., Goonasekera, S. A., Karch, J., Gabel, S., Farber, J., Force, T., Brown, J. H., Murphy, E., Molkentin, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclophilin+D+controls+mitochondrial+pore-dependent+Ca2++exchange,+metabolic+flexibility,+and+propensity+for+heart+failure+in+mice.">Cyclophilin D controls mitochondrial pore-dependent Ca2+ exchange, metabolic flexibility, and propensity for heart failure in mice.</a> J. Clin. Invest. 120, 3680-3687 (2010).</li><li>Hom, J. R., Quintanilla, R. A., Hoffman, D. L., de Mesy Bentley, K. L., Molkentin, J. D., Sheu, S. S., Porter, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+permeability+transition+pore+controls+cardiac+mitochondrial+maturation+and+myocyte.">The permeability transition pore controls cardiac mitochondrial maturation and myocyte.</a> 21, 469-478 (2011).</li><li>Halestrap, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+is+the+mitochondrial+permeability+transition+pore.">What is the mitochondrial permeability transition pore.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 46, 821-831 (2009).</li><li>Wei, A. C., Liu, T., Cortassa, S., Winslow, R. L., O'Rourke, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+Ca2++influx+and+efflux+rates+in+guinea+pig+cardiac+mitochondria:+low+and+high+affinity+effects+of+cyclosporine+A.">Mitochondrial Ca2+ influx and efflux rates in guinea pig cardiac mitochondria: low and high affinity effects of cyclosporine A.</a> Biochim. Biophys. Acta. 1813, 1373-1381 (2011).</li><li>Saks, V. A., Kuznetsov, A. V., Kupriyanov, V. V., Miceli, M. V., Jacobus, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Creatine+kinase+of+rat+heart+mitochondria.+The+demonstration+of+functional+coupling+to+oxidative+phosphorylation+in+an+inner+membrane-matrix+preparation.">Creatine kinase of rat heart mitochondria. The demonstration of functional coupling to oxidative phosphorylation in an inner membrane-matrix preparation.</a> J. Biol. Chem. 260, 7757-7764 (1985).</li><li>Boehm, E. A., Jones, B. E., Radda, G. K., Veech, R. L., Clarke, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+uncoupling+proteins+and+decreased+efficiency+in+palmitate-perfused+hyperthyroid+rat+heart.">Increased uncoupling proteins and decreased efficiency in palmitate-perfused hyperthyroid rat heart.</a> AJP - Heart. 280, 977-983 (2001).</li><li>Fontaine, E., Eriksson, O., Ichas, F., Bernardi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+the+Permeability+Transition+Pore+in+Skeletal+Muscle+Mitochondria.">Regulation of the Permeability Transition Pore in Skeletal Muscle Mitochondria.</a> J. Biol. Chem. 273, 12662-12668 (1998).</li><li>Berman, S. B., Watkins, S. C., Hastings, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+biochemical+and+ultrastructural+comparison+of+mitochondrial+permeability+transition+in+isolated+brain+and+liver+mitochondria:+evidence+for+reduced+sensitivity+of+brain+mitochondria.">Quantitative biochemical and ultrastructural comparison of mitochondrial permeability transition in isolated brain and liver mitochondria: evidence for reduced sensitivity of brain mitochondria.</a> Exp. Neurol. 164, 415-425 (2000).</li><li>Panov, A., Dikalov, S., Shalbuyeva, N., Hemendinger, R., Greenamyre, J. T., Rosenfeld, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Species-+and+tissue-specific+relationships+between+mitochondrial+permeability+transition+and+generation+of+ROS+in+brain+and+liver+mitochondria+of+rats+and+mice.">Species- and tissue-specific relationships between mitochondrial permeability transition and generation of ROS in brain and liver mitochondria of rats and mice.</a> Am. J. Physiol. Cell Physiol. 292, 708-718 (2007).</li><li>Frezza, C., Cipolat, S., Scorrano, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organelle+isolation:+functional+mitochondria+from+mouse+liver,+muscle+and+cultured+filroblasts.">Organelle isolation: functional mitochondria from mouse liver, muscle and cultured filroblasts.</a> Nature Protocols. 2, 287-295 (2007).</li><li>Pallotti, F., Lenaz, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+subfractionation+of+mitochondria+from+animal+cells+and+tissue+culture+lines.">Isolation and subfractionation of mitochondria from animal cells and tissue culture lines.</a> Methods Cell Biol. 80, 3-44 (2007).</li></ol>

여기에 제시된 프로토콜 미토콘드리아 격리 된 마음 (그림 1과 그림 4)에 투과 전환 기공 오픈을 평가하는 데 필요한 실험 단계를 설명 마우스 마음이 미토콘드리아 분리를위한 절차를, 그들의 무결성과 기능을 보장 호흡기 컨트롤은 mitochondrial 매개 변수는 동안 모니터 mtPTP 영업 및 측정을 위해 사용 된 염료, spectrofluorometric 장비의 설정까지, 그리고 mtPTP 개구의 특성. 이 프로토콜에서...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td></tr><tr><td> 트립신 </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> T3030 </td></tr><tr><td> 트립신 억제제 (콩) </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> T9128 </td></tr><tr><td> 나트륨 hydrosulfite </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> 71,699 </td></tr><tr><td> Rotenone </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> R8875 </td></tr><tr><td> 시토크롬 C </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> C7752 </td></tr><tr><td> Alamethicin </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> A4665 </td></tr><tr><td> CCCP </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> C2759 </td></tr><tr><td> 시클로 스포린 </td><td> Calbiochem </td><td> 239835 </td></tr><tr><td> Fura FF </td><td> Invitrogen </td><td> F14180 </td></tr><tr> &lt;TD&gt; JC-1 </td><td> Invitrogen </td><td> T3168 </td></tr><tr><td> 조직 분쇄기 테플론 유봉 15 ML과 포터 - Elvehjem </td><td> 휘튼 산업 </td><td></td></tr><tr><td> 오버 헤드 교반기 </td><td> 휘튼 산업 </td><td> 903475 </td></tr><tr><td> Oxytherm (온도 조절 산소 전극) </td><td> Hansatech 악기 </td><td></td></tr><tr><td> QuantaMaster 80 듀얼 방출 spectrofluorometer </td><td> 광자 기술 인터내셔널 </td><td></td></tr></tbody></table>

multi-parameter measurement of the permeability transition pore opening in isolated mouse heart mitochondria

mitochondrial 투과 전환 기공 (mtPTP)는 1.5 kDa보다 작은 분자 질량과 용질을 운송 할 수있는 내부 mitochondrial 막에 형성되지 않은 특정 채널입니다. 기공의 결정적인 분자 ID가 토론에서 아​​직 시간이 남아 있기는하지만, 그러한 cyclophilin D, VDAC 및 ANT와 같은 단백질이 형성 mtPTP에 기여하고 있습니다. 세포 죽음의 mtPTP 개방의 참여 잘 하나를 설립하는 동안 증거를 축적하면 mtPTP는 mitochondrial 칼슘 2 + 항상성 2, bioenergetics 및 산화 환원 3 신호를하는 동안 physiologic 역할을 제공했음을 나타냅니다. mtPTP 영업은 매트릭스 카 2로 실행됩니다 +하지만, 그 활동에는 산화 스트레스, 아데닌 뉴클레오티드 고갈, 파이의 높은 농도, mitochondrial 막 탈분극 또는 uncoupling, 4 장쇄 지방산과 같은 여러 가지 다른 요인에 의해 조절 될 수 있습니다. 체외, mtPTP에서 개방 ACH 할 수 있습니다칼슘 2 +의 외인성 추가 (칼슘 유지 용량)를 통해 mitochondrial 매트릭스 내부에 칼슘 2 + 농도를 증가시켜 재 현 할 수없는 뛰 어. 카 2 미토콘드리아 내부 + 수준의 특정 임계 값에 도달하면, mtPTP가 열리고 카 2 용이 + 릴리스 양자의 동기 힘의 손실, 막 잠재적 인 붕괴와 궁극적으로의 파열로 연결 mitochondrial 매트릭스 볼륨 (붓기)의 증가 외부 mitochondrial 막과 세포 기관 기능의 돌이킬 수없는 손실. 여기 미토콘드리아 절연 마우스 중심부에 mtPTP 개구의 포괄적 인 특성을 허용 fluorometric 분석을 설명합니다. mitochondrial 칼슘 2 + 취급합니다 (칼슘 2로 분석 매체에서 + 농도를 측정 이해와 릴리스), mitochondrial 막 잠재력, 그리고 mitocho : 검정은 mtPTP을 여는가 발생했을 때 변경 아르 세 mitochondrial 매개 변수의 동시 측정을 포함ndrial 볼륨입니다. 카 2 고용 염료는 검정 매체와 mitochondrial 막 잠재력에 + 측정 Fura FF, 막 impermeant, CA 2 +, 그리고 JC-1, 양이온의 존재에 여기 파장의 변화를 겪 ratiometric 표시입니다 각각 낮은 및 높은 막전위에서 녹색 단량체 또는 빨간색 응집체를 형성 ratiometric 표시. mitochondrial 볼륨의 변화는 mitochondrial 정지에 의해 빛이 분산을 기록에 의해 측정됩니다. 높은 품질, 기능 미토콘드리아는 mtPTP 여는 분석에 필요한 때문에, 우리는 그대로 높은 커플 링 기능 절연 심장 미토콘드리아 확보하는 데 필요한 단계를 설명합니다.

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Multi-parameter Measurement of the Permeability Transition Pore Opening in Isolated Mouse Heart Mitochondria

미토콘드리아 절연 마우스 중심부에 mitochondrial 투과 전환 기공 개구의 측정을위한 spectrofluorometric 프로토콜이 여기에 제공됩니다. 검정은 미토콘드리아 칼슘의 동시 측정을 포함<sup&gt; 2 +</sup&gt; 처리, mitochondrial 막 잠재력과 mitochondrial 볼륨입니다. 미토콘드리아 높은 품질과 기능 마음을 얻기위한 절차도 설명되어 있습니다.

미토콘드리아 절연 마우스 중심부에 투과율 전환 기공 영업의 다중 매개 변수 측정

The mitochondrial permeability transition pore (mtPTP) is a non specific channel that forms in the inner mitochondrial membrane to transport solutes with ...

Research

JoVE Journal

Biology

Preparation of Highly Coupled Rat Heart Mitochondria

Mitochondria 높은 결합 랫 마음의 준비

The function of mitochondria in generation of cellular ATP in the process of oxidative phosphorylation is widely recognised. During the past decades there ...

연구

생물학

Confocal Imaging of Single Mitochondrial Superoxide Flashes in Intact Heart or In Vivo

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단일 미토콘드리아 과산화물 온전한 마음에 점멸 또는 공 촛점 이미징<em&gt; 생체</em

Mitochondrion is a critical intracellular organelle responsible for energy production and intracellular signaling in eukaryotic systems. Mitochondrial ...

Quantifying Single Microvessel Permeability in Isolated Blood-perfused Rat Lung Preparation

고립 된 혈액 관류 쥐 폐 준비에 단일 미세 혈관 투과성의 양을

The isolated blood-perfused lung preparation is widely used to visualize and define signaling in single microvessels. By coupling this preparation with ...

Measuring the Osmotic Water Permeability Coefficient (Pf) of Spherical Cells: Isolated Plant Protoplasts as an Example

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삼투 물 투수 계수 (P 측정<sub&gt; F</sub&gt;) 구형 세포 : 예를 들어 식물 절연 원형질체

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높은 처리량 마이크로 호흡 측정을위한 마우스 골격근의 최소 수량에서 미토콘드리아의 분리

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