Name: generation, purification, and characterization of cell-invasive disc1 protein species
Uploaded: 2012-08-30T12:00:00
Duration: 14 min 33 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Generation, Purification, and Characterization of Cell-invasive DISC1 Protein Species at JoVE.com

وقد تم تمويل هذا العمل من قبل الخلايا العصبية، ERANET اكتشاف (BMBF 01EW1003) لCK وJPH، DFG (كو 1679/3-1؛ GRK1033) لCKVB معتمد من قبل منحة من Forschungskommission من كلية الطب في جامعة دوسلدورف.

<ol>
	<li>Millar, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disruption+of+two+novel+genes+by+a+translocation+co-segregating+with+schizophrenia.">Disruption of two novel genes by a translocation co-segregating with schizophrenia.</a> Hum. Mol. Genet. 9, 1415-1423 (2000).</li><li>St Clair, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+within+a+family+of+a+balanced+autosomal+translocation+with+major+mental+illness.">Association within a family of a balanced autosomal translocation with major mental illness.</a> Lancet. 336, 13-16 (1990).</li><li>Leliveld, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insolubility+of+disrupted-in-schizophrenia+1+disrupts+oligomer-dependent+interactions+with+nuclear+distribution+element+1+and+is+associated+with+sporadic+mental+disease.">Insolubility of disrupted-in-schizophrenia 1 disrupts oligomer-dependent interactions with nuclear distribution element 1 and is associated with sporadic mental disease.</a> J. Neurosci. 28, 3839-3845 (2008).</li><li>Leliveld, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oligomer+assembly+of+the+C-terminal+DISC1+domain+(640-854)+is+controlled+by+self-association+motifs+and+disease-associated+polymorphism+S704C.">Oligomer assembly of the C-terminal DISC1 domain (640-854) is controlled by self-association motifs and disease-associated polymorphism S704C.</a> Biochemistry. 48, 7746-7755 (2009).</li><li>Ottis, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Convergence+of+two+independent+mental+disease+genes+on+the+protein+level:+recruitment+of+dysbindin+to+cell-invasive+disrupted-in-schizophrenia+1+aggresomes.">Convergence of two independent mental disease genes on the protein level: recruitment of dysbindin to cell-invasive disrupted-in-schizophrenia 1 aggresomes.</a> Biol. Psychiatry. 70, 604-610 (2011).</li><li>Meyer-Luehmann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exogenous+induction+of+cerebral+beta-amyloidogenesis+is+governed+by+agent+and+host.">Exogenous induction of cerebral beta-amyloidogenesis is governed by agent and host.</a> Science. 313, 1781-1784 (2006).</li><li>Frost, B., Jacks, R. L., Diamond, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Propagation+of+tau+misfolding+from+the+outside+to+the+inside+of+a+cell.">Propagation of tau misfolding from the outside to the inside of a cell.</a> J. Biol. Chem. 284, 12845-12852 (2009).</li><li>Frost, B., Ollesch, J., Wille, H., Diamond, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conformational+diversity+of+wild-type+Tau+fibrils+specified+by+templated+conformation+change.">Conformational diversity of wild-type Tau fibrils specified by templated conformation change.</a> J. Biol. Chem. 284, 3546-3551 (2009).</li><li>Clavaguera, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transmission+and+spreading+of+tauopathy+in+transgenic+mouse+brain.">Transmission and spreading of tauopathy in transgenic mouse brain.</a> Nat. Cell Biol. 11, 909-913 (2009).</li><li>Desplats, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inclusion+formation+and+neuronal+cell+death+through+neuron-to-neuron+transmission+of+alpha-synuclein.">Inclusion formation and neuronal cell death through neuron-to-neuron transmission of alpha-synuclein.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 106, 13010-13015 (2009).</li><li>Ren, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytoplasmic+penetration+and+persistent+infection+of+mammalian+cells+by+polyglutamine+aggregates.">Cytoplasmic penetration and persistent infection of mammalian cells by polyglutamine aggregates.</a> Nat. Cell Biol. 11, 219-225 (2009).</li><li>Munch, C., O'Brien, J., Bertolotti, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prion-like+propagation+of+mutant+superoxide+dismutase-1+misfolding+in+neuronal+cells.">Prion-like propagation of mutant superoxide dismutase-1 misfolding in neuronal cells.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 108, 3548-3553 (2011).</li><li>Iwatsubo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+and+characterization+of+Lewy+bodies+from+the+brains+of+patients+with+diffuse+Lewy+body+disease.">Purification and characterization of Lewy bodies from the brains of patients with diffuse Lewy body disease.</a> Am. J. Pathol. 148, 1517-1529 (1996).</li><li>Meriin, A. B., Wang, Y., Sherman, M. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+aggresomes+and+other+large+aggregates.">Isolation of aggresomes and other large aggregates.</a> Curr. Protoc. Cell Biol. Chapter 3, 1-9 (2010).</li><li>Korth, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DISCopathies:+brain+disorders+related+to+dysfunctional+DISC1.">DISCopathies: brain disorders related to dysfunctional DISC1.</a> Rev. Neurosci. 20, 321-330 (2009).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

في هذه الدراسة وصفنا عملية تنقية mRFP/eGFP-DISC1 aggresomes من الخلايا العصبية خط بالنقل، إعداد ووضع العلامات من نوع البروتين المؤتلف DISC1 وتطبيقها في الخلية الغزو تجارب الخلايا المتلقية في التجارب المختبرية والحية. وقد تم تطوير عملية تنقية aggresomes mRFP/eGFP-DISC1 الأصلية من البروتوكولات لعزل ليوي الجسم مثل الهياكل وأكبر المجاميع 13 و 14، ولكن تعديل لتجنب استخدام المنظفات وتقليل خطر إيجابية كاذبة الخلية الغزو التي قد تحدث بسبب اختراق الغشاء المنظفات الميسرة. يمكن للمرء تحسين محتملة في المستقبل يكون في لزيادة نقاء aggresomes من صوتنة إلى الأغشية منفصلة تماما المتبقية والهيكل الخلوي من aggresomes. بواسطة نقاء العام زيادة، وعدد من الأحداث التي سجلت إجمالي غزو لأماه aggresomes كبيرةيمكن زيادة Y 5. وينبغي النظر في ما إذا كان تعريف محدود من السكروز لدينا 3-المرحلة اقترح كافية لaggresomes الأنواع الأخرى البروتين لابد من اختبارها، وبهذا المعنى البروتوكول المذكورة هنا كنقطة انطلاق لتعظيم الاستفادة الفردية. أثبتت aggresomes المنقى أن تكون قوية جدا في أيدينا، غسل خطوات إضافية (بدون المنظفات) للقضاء على آثار من السكروز لم تقلل كثيرا من العائد الكلي. في منشور السابقة صفنا هذا التجميع قليل وحدات من DISC1 يعتمد على المجالات multimerization متميزة في محطة سي 4 (الشكل 4). اخترنا هذا الجزء لالمؤتلف التعبير القابلة للذوبان في E. القولونية وتنقية لاحقة وني NTA. لرصد وmultimerization لمقارنة الغزو في الخلية مع خلية البروتين الغازية مثل وصف α-synuclein، وصفت ونحن DISC1 (598-785) مع صبغة الفلورسنت DyLight594، ومقارنة لهاخلية الغزو مع أن المسمى بنفس القدر من α-synuclein. وزادت بشكل كبير من الخلايا الغازية من جزء DISC1 المؤتلف مقارنة بما كان عليه من طول، الوطنية الكاملة DISC1 aggresomes، من المحتمل بسبب صغر حجمها ونقاوة أعلى من ذلك بكثير. مرة أخرى، يبدو أن نقاء تلعب دورا حاسما في الغزو الخلية. في مثالنا جند aggresomes الغازية القابلة للذوبان البروتين نديد هدف خط الخلية التي أعرب recombinantly في ذوبان، وشكل خلية فرقت أي. التعبير عن بروتين الفلورية (مثل GFP أو RFP) في المتلقي خط الخلية هي ميزة لأنها تسمح للcolocalization من aggresomes الغازية والبروتينات المؤتلف ضمن المستفيدة الحد الخليوي عبر Z-كومة التصوير. aggresomes DISC1 الخلايا الغازية وشظايا multimeric أعرب وتنقيته من E. يمكن أن تكون الإشريكية السمة المميزة لأمراض البروتين المتصلة بتكوين DISC1، DISC1opathies 15. اطلاق النار المتاعب: aggresome العائد المنخفض بعد التدرج تنقية السكروز: التدرج السكروز التي أدخلت في هذا البروتوكول يعمل بشكل جيد مع aggresomes (FL) eGFP/mRFP-DISC1. قد تتكون من البروتينات Aggresomes أخرى تكون ذات أبعاد متغيرة ولذلك يجب أن يكون الأمثل للتركيز السكروز من قبل مستخدمين آخرين. عدم كفاية البروتين المؤتلف تنقية: وينبغي على كل الملوثات البكتيرية في عملية تنقية البروتين المؤتلف يكون المسمى في خطوات لاحقة من البروتوكول. لتجنب التلوث، تشغيل البروتين على SDS-PAGE وتؤكد أن البروتين المؤتلف هو لا يقل عن 95٪ نقية من تلطيخ مع Coomassie أزرق. لضمان أعلى مستويات الجودة والإنتاجية، وبروتوكول يجب أن يكون الأمثل لكل فرد البروتين. انخفاض العلامات EFficiency من البروتينات المؤتلف: فإن أي التلوث التي تحتوي على مجموعات حرة SH-تقليل كفاءة وضع العلامات من البروتين. ولذلك، غسيل الكلى واسعة وني NTA تنقية القائمة على إلزامي.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> كاشف اسم </td><td> شركة </td><td> كتالوج رقم </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> RPMI 1640 </td><td> إينفيتروجن </td><td> 11875-093 </td><td> متوسطة تعتمد على المضيف خط الخلية. وينبغي تحديد الخلية المتلقية الأمثل خط من قبل المستخدم. </td></tr><tr><td> DMEM/F-12 </td><td> إينفيتروجن </td><td> 11320-033 </td><td> متوسطة تعتمد على المتلقي خط الخلية. وينبغي تحديد الخلية المتلقية الأمثل خط من قبل المستخدم. </td></tr><tr><td> PBS </td><td> إينفيتروجن </td><td> 14190-250 </td><td></td></tr><tr><td> Metafectene </td><td> Biontex </td><td> T020-1.0 </td><td> قد الكواشف ترنسفكأيشن أخرى تعمل كذلك، ولكن لم يتم اختبار مع بروتوكول لدينا. </td></tr><tr><td> ني NTA الاغاروز </td><td> QIAGEN </td><td> 30210 &lt;/ TD&gt; <td> وقد أجريت التجارب مع الاغاروز Ni_NTA من QIAGEN، ينبغي العمل موردين آخرين أيضا. </td></tr><tr><td> الدناز I </td><td> روش </td><td> 04716728001 </td><td> ليست هناك حاجة لريبونوكلياز مجانا الدناز في عملية تنقية aggresomes. </td></tr><tr><td> سكر القصب </td><td> سيغما الدريخ </td><td> S0389 </td><td></td></tr><tr><td> OPTI-MEM </td><td> إينفيتروجن </td><td> 31985-062 </td><td> مصل خالية المتوسطة تعمل كذلك </td></tr><tr><td> البنسلين / الستربتوميسين </td><td> إينفيتروجن </td><td> 15140122 </td><td> ملحق SH-SY5Y والمتوسطة جبهة التحرير الوطني </td></tr><tr><td> غير الضرورية الأحماض الأمينية (NEAA) </td><td> سيغما الدريخ </td><td> M7145 </td><td> ملحق SH-SY5Y المتوسطة </td></tr><tr><td> التريبان الأزرق 0.4٪ </td><td> سيغما الدريخ </td><td> T8154 </td><td> كاشف السامة </td></tr><tr><td> DyLight 594 ماleimide </td><td> الحرارية فيشر العلمية </td><td> 46608 </td><td> تخفيض السيستين صبغ رد الفعل لتشكيل السندات أثير ثيولي مستقرة. كما تتوفر بألوان أخرى. </td></tr><tr><td> إطالة الذهب مع دابي </td><td> إينفيتروجن </td><td> P36935 </td><td> أعطى هذا السائل مرس antifade نتائج متفوقة في أيدينا. </td></tr><tr><td> البروتيني المانع كوكتيل </td><td> روش </td><td> 11873580001 </td><td> حل الجدول 1 في 500 ميكرولتر O 2 H لحل 100X. </td></tr><tr><td> الاصطناعية A-synuclein </td><td> سيجما </td><td> S7820 </td><td> Refold كما هو موضح في النص. </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> جدول الكواشف محددة. </td></tr><tr><td> Precellys 24 </td><td> بيرتن تكنولوجيا </td><td> 03119.200.RD000 </td><td> نحن لم نجرب متجانسة الميكانيكية الأخرىغير هذا nizers. طريقة أخرى قد المنظفات تجانس العمل الحر أيضا، ولكن لم يتم اختبارها لهذا البروتوكول. </td></tr><tr><td> 5301 المكثف (speedvac) </td><td> إيبندورف </td><td> 5301 000.210 </td><td> اللازمة إلا إذا البروتين يجب أن تتركز. </td></tr><tr><td> LSM 510 و Apotome2 Axiovision </td><td> زايس </td><td> انظر كتالوج مصنعين </td><td> كل المجاهر تؤوي القدرة على أداء Z-كومة التصوير. هذا هو شرط أساسي لتقييم الصلبة والخطيرة لأحداث الغزو. </td></tr><tr><td> المواد البلاستيكية خلية ثقافة </td><td> نونك </td><td> أطباق 10 سم # 172958، 24 لوحات جيدة # 142475 </td><td> قد استخدام المواد البلاستيكية المختلفة تؤثر على تفاعل البروتينات المؤتلف أو aggresomes والأسطح البلاستيكية. نحن لم تختبر مواد أخرى غير تلك الموصوفة هنا. </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> جدول المواد والمعدات الخاصة. </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td><table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> عدد </td><td> اسم العازلة </td><td> محتوى </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> 1. </td><td> البكتيرية النمو المتوسط </td><td> 16 G / L Bacto تريبتون، 10 Bacto الخميرة ز / لتر استخراج، 5 غرام / لتر كلوريد الصوديوم، 5 ملم أرجينين، حمض الهيدروكلوريك، 5MM MGSO4، 100 ميكروغرام / مل carbencillin، ميكروغرام / 35 مل الكلورامفينيكول </td><td> تنمو البكتيريا إلى OD 600: 0،6-0،8 لحث على التعبير مع IPTG مم 1. </td></tr><tr><td> 2. </td><td> البكتيرية إعادة تعليق العازلة </td><td> 50 ملي تريس، حمض الهيدروكلوريك درجة الحموضة 8.0، 5 ملم EDTA، 2 مم PMSF، 1٪ TX-100، 250 ميكروغرام / مل الليزوزيم، 20 ملم MgCl 2 و 400 مل الدناز I U/50 </td><td> Resupend بيليه البكتيرية من 1 L اوفهrnight الثقافة في 50 مل العازلة إعادة تعليق. </td></tr><tr><td> 3. </td><td> استخراج البروتين المخزن المؤقت </td><td> 50 ملي تريس درجة الحموضة 8.0، 5 ملم إيميدازول، 500 ملي مول كلوريد الصوديوم، 8 M اليوريا و 10 ملي ب-ME </td><td></td></tr><tr><td> 4. </td><td> ني NTA العازلة غسل العمود </td><td> 50 ملي تريس درجة الحموضة 8.0، 5 ملم إيميدازول، 500 ملي مول كلوريد الصوديوم، 8 M اليوريا و 10 ملي ب-ME، 12 مم إيميدازول </td><td> وأضاف تعديل العازلة مع استخراج إيميدازول 12 ملم. </td></tr><tr><td> 5. </td><td> ني NTA العازلة العمود شطف </td><td> 50 ملي تريس، 500 ملي مول كلوريد الصوديوم، 300 مم إيميدازول، 8 M اليوريا، 1 ملم PMSF، 5 ملي EDTA وملي 10 B-ME </td><td> يحتوي المخزن المؤقت شطف ب 10 ملي-ME الذي مدال في وقت لاحق. </td></tr><tr><td> 6. </td><td> PBS </td><td> 8 ز / لتر كلوريد الصوديوم، 0.2 غرام / لتر بوكل، 1.44 غ / ل نا 2 HPO 4، 0،24 غرام / لتر KH 2 PO 4، التكيف مع درجة الحموضة 7.4 </td><td></td></tr><tr><td>7. </td><td> وضع العلامات الفاصلة </td><td> PBS تحتوي على 5 ملي TCEP </td><td></td></tr><tr><td colspan="4"> الجدول من وصفات. </td></tr></tbody></table></td></tr></tbody></table>

generation, purification, and characterization of cell-invasive disc1 protein species

وينظر تجميع البروتين باعتباره السمة المميزة العامة المزمن، وظروف الدماغ التنكسية مثل، على سبيل المثال، في أمراض الاعصاب مرض الزهايمر (Aβ، تاو)، ومرض باركنسون (α-synuclein)، مرض هنتنغتون (polyglutamine، huntingtin)، وغيرها. ويعتقد تجميع البروتين لتحدث نتيجة لاضطراب proteostasis، أي عدم التوازن بين الناشئة وتدهور البروتينات تتجمع. من المذكرة، تم العثور على البروتينات نفس تجميعها في أشكال متفرقة من هذه الأمراض التي هي متحولة في المتغيرات النادرة من أشكال العائلية. الفصام هو حالة مزمنة الدماغ التقدمية التي في كثير من الحالات يسير جنبا إلى جنب مع العجز المعرفي دائمة لا رجعة فيها. في نهج مرشح الجينات، ونحن التحقيق ما إذا كان يمكن العثور على تعطل في والفصام 1 (DISC1)، استنساخ الجين في أسرة الاسكتلندي مع الربط للأمراض العقلية المزمنة 1 و 2، وغير قابلة للذوبان المجاميع في المخن من حالات متفرقة من الفصام 3. باستخدام CC SMRI، حددنا في ما يقرب من 20٪ من الحالات ولكن ليس مع CMD الضوابط العادية أو المرضى الذين يعانون من أمراض الاعصاب تفاعلية مناعية DISC1 sarkosyl غير قابلة للذوبان بعد تجزئة البيوكيميائية. كشفت دراسات لاحقة في المختبر أن تأثر الميل تجميع DISC1 من تعدد الأشكال من الأمراض المرتبطة بها S704C 4، والتي ولدت DISC1 aggresomes في المختبر كانت الخلية الغازية 5، على غرار ما كان قد تعرض لAβ 6، تاو 7-9، α synuclein-10، polyglutamine 11، أو المجاميع SOD1 12. دفعت هذه النتائج لنا أن أقترح أن ما لا يقل عن مجموعة فرعية من الحالات مع CMD، مع تلك DISC1 المجمعة قد تكون اضطرابات البروتين بتكوين. نحن هنا وصف الطريقة التي تولد DISC1 aggresomes في خلايا الثدييات، تنقية لهم على التدرج السكروز واستخدامها لخلية الغزو ستوديوفاق. وبالمثل، نحن تصف كيفية إنشاء multimeric حصريا محطة C-DISC1 جزء، والتسمية وتطهيره للدراسات الغزو الخلية. باستخدام multimers المؤتلف من DISC1 نحقق مماثلة الغزو خلية أما جزء α-synuclein الاصطناعية المسمى بالمثل. نعرض أيضا أن يتم أخذ هذه القطعة حتى عندما تم حقنها في الجسم الحي stereotactically في الدماغ من الحيوانات المتلقية.

Watch this Scientific Journal Video about Generation, Purification, and Characterization of Cell-invasive DISC1 Protein Species at JoVE.com

Generation, Purification, and Characterization of Cell-invasive DISC1 Protein Species

الجيل، وتنقية الخلايا غزو، السيتوبلازمية داخل الخلايا كامل طول البروتين aggresomes DISC1 من مزارع الخلايا لو، multimeric المسمى المؤتلف جزء من البروتين في DISC1<em&gt; E. القولونية</em&gt; موصوفة. ويرد الغزو الخلية لخلايا المتلقي في خلية ثقافة والخلايا العصبية لل<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; بعد التلقيح الدماغ stereotactical.

جيل وتنقية، وتوصيف الأنواع الغازية خلية البروتين DISC1

Protein aggregation is seen as a general hallmark of chronic, degenerative brain conditions like, for example, in the neurodegenerative diseases ...

Research

JoVE Journal

Biology

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

تلطيخ من البروتينات في الهلام مع Coomassie G - 250 دون عضوي حمض الخليك والمذيبات

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

Purification of the M. magneticum Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamA&Delta;41

Purification of the M. magneticum Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamAÃƒÅ½Ã¢â‚¬Â41

تنقية م. magneticum سلالة AMB - 1 بروتين المرتبطين Magnetosome MamAΔ41

Magnetotactic bacteria comprise a diverse group of aquatic microorganisms that are able to orientate themselves along geomagnetic fields. This behavior is ...

A Noninvasive Hair Sampling Technique to Obtain High Quality DNA from Elusive Small Mammals

عينات الشعر نونينفاسيفي تقنيات الحمض النووي للحصول على ارتفاع الجودة من الثدييات الصغيرة المراوغ

Noninvasive genetic sampling approaches are becoming increasingly important to study wildlife populations. A number of studies have reported using ...

Automated Hydrophobic Interaction Chromatography Column Selection for Use in Protein Purification

آلية التفاعل اللوني مسعور اختيار عمود للاستخدام في تنقية البروتين

In contrast to other chromatographic methods for purifying proteins (e.g. gel filtration, affinity, and ion exchange), hydrophobic interaction ...

Purification of Hsp104, a Protein Disaggregase

تنقية Hsp104 ، وهو بروتين Disaggregase

Hsp104 is a hexameric AAA+ protein1 from yeast, which couples ATP hydrolysis to protein disaggregation2-10 (Fig. 1). This activity imparts two key ...

Identification of Protein Interacting Partners Using Tandem Affinity Purification

تحديد الشركاء البروتين عن طريق التفاعل جنبا الى جنب الانجذاب تنقية

A critical and often limiting step in understanding the function of host and viral proteins is the identification of interacting cellular or viral protein ...

Identification and Characterization of Protein Glycosylation using Specific Endo- and Exoglycosidases

تحديد وتوصيف ارتباط بالغليكوزيل باستخدام بروتين معين إندو وexoglycosidases

Glycosylation, the addition of covalently linked sugars, is a major post-translational modification of proteins that can significantly affect processes ...

Protein Purification-free Method of Binding Affinity Determination by Microscale Thermophoresis

البروتين طريقة خالية من تنقية تجليد تحديد الانجذاب من قبل Thermophoresis الميكروسكيل

Quantitative characterization of protein  interactions is essential in practically any field of life sciences,  particularly drug discovery. Most of ...

Detecting, Visualizing and Quantitating the Generation of Reactive Oxygen Species in an Amoeba Model System

كشف، تصور وQuantitating الجيل من أنواع الاكسجين التفاعلية في النظام النموذجي الاميبا

Reactive oxygen species (ROS) comprise a range of reactive and short-lived, oxygen-containing molecules, which are dynamically interconverted or ...

Identifying Protein-protein Interaction in Drosophila Adult Heads by Tandem Affinity Purification (TAP)

Identifying Protein-protein Interaction in Drosophila Adult Heads by Tandem Affinity Purification TAP

تحديد البروتين البروتين التفاعل في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; رؤساء الكبار حسب جنبا الى جنب الانجذاب تنقية (وات)

Genetic screens conducted using Drosophila melanogaster (fruit fly) have made numerous milestone discoveries in the advance of biological sciences. ...