Name: generation, purification, and characterization of cell-invasive disc1 protein species
Uploaded: 2012-08-30T12:00:00
Duration: 14 min 33 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Generation, Purification, and Characterization of Cell-invasive DISC1 Protein Species at JoVE.com

עבודה זו מומנה על ידי NEURON-Eranet גלה (BMBF 01EW1003) לCK וJPH, DFG (Ko 1679/3-1; GRK1033) לCKVB נתמך על ידי מענק של Forschungskommission של הפקולטה לרפואה באוניברסיטת דיסלדורף.

<ol>
	<li>Millar, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disruption+of+two+novel+genes+by+a+translocation+co-segregating+with+schizophrenia.">Disruption of two novel genes by a translocation co-segregating with schizophrenia.</a> Hum. Mol. Genet. 9, 1415-1423 (2000).</li><li>St Clair, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+within+a+family+of+a+balanced+autosomal+translocation+with+major+mental+illness.">Association within a family of a balanced autosomal translocation with major mental illness.</a> Lancet. 336, 13-16 (1990).</li><li>Leliveld, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insolubility+of+disrupted-in-schizophrenia+1+disrupts+oligomer-dependent+interactions+with+nuclear+distribution+element+1+and+is+associated+with+sporadic+mental+disease.">Insolubility of disrupted-in-schizophrenia 1 disrupts oligomer-dependent interactions with nuclear distribution element 1 and is associated with sporadic mental disease.</a> J. Neurosci. 28, 3839-3845 (2008).</li><li>Leliveld, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oligomer+assembly+of+the+C-terminal+DISC1+domain+(640-854)+is+controlled+by+self-association+motifs+and+disease-associated+polymorphism+S704C.">Oligomer assembly of the C-terminal DISC1 domain (640-854) is controlled by self-association motifs and disease-associated polymorphism S704C.</a> Biochemistry. 48, 7746-7755 (2009).</li><li>Ottis, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Convergence+of+two+independent+mental+disease+genes+on+the+protein+level:+recruitment+of+dysbindin+to+cell-invasive+disrupted-in-schizophrenia+1+aggresomes.">Convergence of two independent mental disease genes on the protein level: recruitment of dysbindin to cell-invasive disrupted-in-schizophrenia 1 aggresomes.</a> Biol. Psychiatry. 70, 604-610 (2011).</li><li>Meyer-Luehmann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exogenous+induction+of+cerebral+beta-amyloidogenesis+is+governed+by+agent+and+host.">Exogenous induction of cerebral beta-amyloidogenesis is governed by agent and host.</a> Science. 313, 1781-1784 (2006).</li><li>Frost, B., Jacks, R. L., Diamond, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Propagation+of+tau+misfolding+from+the+outside+to+the+inside+of+a+cell.">Propagation of tau misfolding from the outside to the inside of a cell.</a> J. Biol. Chem. 284, 12845-12852 (2009).</li><li>Frost, B., Ollesch, J., Wille, H., Diamond, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conformational+diversity+of+wild-type+Tau+fibrils+specified+by+templated+conformation+change.">Conformational diversity of wild-type Tau fibrils specified by templated conformation change.</a> J. Biol. Chem. 284, 3546-3551 (2009).</li><li>Clavaguera, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transmission+and+spreading+of+tauopathy+in+transgenic+mouse+brain.">Transmission and spreading of tauopathy in transgenic mouse brain.</a> Nat. Cell Biol. 11, 909-913 (2009).</li><li>Desplats, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inclusion+formation+and+neuronal+cell+death+through+neuron-to-neuron+transmission+of+alpha-synuclein.">Inclusion formation and neuronal cell death through neuron-to-neuron transmission of alpha-synuclein.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 106, 13010-13015 (2009).</li><li>Ren, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytoplasmic+penetration+and+persistent+infection+of+mammalian+cells+by+polyglutamine+aggregates.">Cytoplasmic penetration and persistent infection of mammalian cells by polyglutamine aggregates.</a> Nat. Cell Biol. 11, 219-225 (2009).</li><li>Munch, C., O'Brien, J., Bertolotti, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prion-like+propagation+of+mutant+superoxide+dismutase-1+misfolding+in+neuronal+cells.">Prion-like propagation of mutant superoxide dismutase-1 misfolding in neuronal cells.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 108, 3548-3553 (2011).</li><li>Iwatsubo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+and+characterization+of+Lewy+bodies+from+the+brains+of+patients+with+diffuse+Lewy+body+disease.">Purification and characterization of Lewy bodies from the brains of patients with diffuse Lewy body disease.</a> Am. J. Pathol. 148, 1517-1529 (1996).</li><li>Meriin, A. B., Wang, Y., Sherman, M. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+aggresomes+and+other+large+aggregates.">Isolation of aggresomes and other large aggregates.</a> Curr. Protoc. Cell Biol. Chapter 3, 1-9 (2010).</li><li>Korth, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DISCopathies:+brain+disorders+related+to+dysfunctional+DISC1.">DISCopathies: brain disorders related to dysfunctional DISC1.</a> Rev. Neurosci. 20, 321-330 (2009).</li></ol>

אין ניגודי האינטרסים הכריזו.

במחקר זה אנו מתארים טיהור mRFP/eGFP-DISC1 aggresomes מקו transfected נוירובלסטומה תא, ההכנה ותיוג של DISC1 מיני חלבון רקומביננטי והיישום שלהם בניסויי תא פלישה של תאי נמען במבחנת in vivo. טיהור mRFP/eGFP-DISC1 aggresomes ילידים פותחה מתוך פרוטוקולים לבודד מבנים לוי גוף דמויים ואגרגטים גדולים 13, 14, אבל שונה כדי להימנע מהשימוש בחומרי ניקוי וכדי למזער את הסיכון של תא פלישה חיובית כוזב שעלולה להתרחש עקב חדירת חומר ניקוי קרום הקל. שיפור עתיד אפשרי אחד יכול להיות בהמשך להגדיל את הטוהר של aggresomes ידי sonication ללחלוטין קרומים שנותרו נפרדים וcytoskeleton מaggresomes. על ידי טוהר כולל גובר, מספר אירועי פלישה כלל שנרשם לaggresomes ma גדולy להיות מוגבר 5. אם בהגדרה המצומצמת של סוכרוז הציע 3-השלב די לaggresomes של מיני חלבון אחרים יש להיבדק, במובן זה הפרוטוקול המתואר כאן צריך להיחשב כנקודה מוצאת לקידום פרט. את aggresomes המטוהר הוכיח להיות די חזק בידות שלנו, שלבי כביסה נוספים (ללא חומרי ניקוי) לחסל את העקבות של סוכרוז לא להפחית באופן משמעותי את התשואה הכוללת. בפרסום קודם שתארנו שהרכבת oligomer של DISC1 תלויה בתחומי multimerization נפרדים בתחנה הסופית של C-4 (איור 4). בחרנו קטע זה לביטוי רקומביננטי המסיס בE. coli ושלאחר מכן וטיהור Ni-נ.ת. ע. כדי לפקח multimerization ולהשוות את הפולשנות התא שלה עם חלבון תאר תא פולשנית כמו α-סינוקלאין, אנחנו מתויגים DISC1 (598-785) עם צבע פלואורסצנטי DyLight594, ולעומתהתא הפולשנות עם זה של תווית באופן שווה α-סינוקלאין. תא הפולשנות של DISC1 בר רקומביננטי הייתה גדל באופן דרמטי בהשוואה לזה של ילידי אורך מלא DISC1 aggresomes, כנראה עקב גודל קטן יותר וטוהר גבוה בהרבה. שוב, טוהר נראה לשחק תפקיד מכריע בתא הפולשנות. בדוגמא שלנו את aggresomes פולשניים גייס חלבון מסיס homologue של קו תא היעד שהתבטא recombinantly בצורה מסיסה, כלומר תא מפוזר-. הביטוי של חלבון פלואורסצנטי (למשל GFP או RFP) בשורת תאי הנמען הוא יתרון שכן הוא מאפשר colocalization של aggresomes פולשניים וחלבונים רקומביננטיים בתוך מגבלת תא הנמען באמצעות הדמית Z-מחסנית. aggresomes DISC1 תאים פולשניים ושברי multimeric הביעו ומטוהר מE. חיידק יכול להיות תכונה מגדירה של מחלות קונפורמציה חלבון הנוגעים לDISC1, DISC1opathies 15. צרות קליעה: תשואה נמוכה aggresome לאחר טיהור שיפוע סוכרוז: שיפוע סוכרוז הציג בפרוטוקול זה עובד היטב עם aggresomes eGFP/mRFP-DISC1 (פלורידה). Aggresomes המורכב של חלבונים אחרים עשויה להיות מידות משתנות ולכן ריכוזי סוכרוז צריכים להיות מותאמים על ידי משתמשים אחרים. טיהור בלתי מספקת של חלבון רקומביננטי: כל זיהום חיידקים בתהליך הטיהור של חלבון רקומביננטי גם להיות מתויג בשלבים מאוחרים יותר של הפרוטוקול. כדי להימנע מזיהומים, להפעיל את החלבון על SDS-PAGE ולוודא כי חלבון רקומביננטי הוא לפחות 95% טהור ע&quot;י השאיר עם Coomassie הכחול. כדי להבטיח איכות ואת התשואה הגבוהה ביותר, בפרוטוקול יש להיות מותאם לכל חלבון בודד. נמוך התיוג EFficiency של חלבונים רקומביננטיים: כל זיהומים שמכילים קבוצות SH חופשיות יקטנו תיוג יעיל של החלבון. לכן, דיאליזה נרחבת וטיהור מבוססת Ni-נ.ת. ע הוא חובה.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגים </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> RPMI 1640 </td><td> Invitrogen </td><td> 11875-093 </td><td> בינוני תלוי בקו התא המארח. שורת תאי הנמען האופטימלית צריכה להיקבע על ידי המשתמש. </td></tr><tr><td> DMEM/F-12 </td><td> Invitrogen </td><td> 11320-033 </td><td> בינוני תלוי בקו תא הנמען. שורת תאי הנמען האופטימלית צריכה להיקבע על ידי המשתמש. </td></tr><tr><td> PBS </td><td> Invitrogen </td><td> 14190-250 </td><td></td></tr><tr><td> Metafectene </td><td> Biontex </td><td> T020-1.0 </td><td> ריאגנטים transfection אחרים יכולים לעבוד גם כן, אבל לא נבדקו בפרוטוקול שלנו. </td></tr><tr><td> Ni-נ.ת. ע agarose </td><td> Qiagen </td><td> 30210 &lt;/ Td&gt; <td> הניסויים נעשו עם Ni_NTA agarose מQiagen, ספקים אחרים צריכים לעבוד גם כן. </td></tr><tr><td> אני DNase </td><td> רוש </td><td> 04716728001 </td><td> אין צורך בRNase החופשי DNase בתהליך של טיהור aggresomes. </td></tr><tr><td> סוכרוז </td><td> סיגמה אולדריץ </td><td> S0389 </td><td></td></tr><tr><td> Opti-ממ </td><td> Invitrogen </td><td> 31985-062 </td><td> מדיום סרום ללא עובד כמו גם </td></tr><tr><td> פניצילין / סטרפטומיצין </td><td> Invitrogen </td><td> 15140122 </td><td> תוספת לSH-SY5Y וNLF הבינוני </td></tr><tr><td> שאינן חיונית, חומצות אמינו (NEAA) </td><td> סיגמה אולדריץ </td><td> M7145 </td><td> תוספת למדיום SH-SY5Y </td></tr><tr><td> Trypan הכחול 0.4% </td><td> סיגמה אולדריץ </td><td> T8154 </td><td> ריאגנט רעיל </td></tr><tr><td> DyLight 594 מאleimide </td><td> תרם פישר סיינטיפיק </td><td> 46608 </td><td> הקטין לצבוע תגובתי ציסטאין ליצור קשרי thioether יציבים. זמין גם בצבעים אחרים. </td></tr><tr><td> להאריך את הזהב עם DAPI </td><td> Invitrogen </td><td> P36935 </td><td> mountant הנוזל antifade זה נתן תוצאות טובות יותר בידות שלנו. </td></tr><tr><td> קוקטייל מעכב פרוטאז </td><td> רוש </td><td> 11873580001 </td><td> ממס טבלה 1 מתוך 500 H 2 O μl לפתרון 100X. </td></tr><tr><td> סינטטי-סינוקלאין </td><td> סיגמא </td><td> S7820 </td><td> לקפל כפי שמתואר בטקסט. </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> טבלה של חומרים כימיים ספציפי. </td></tr><tr><td> 24 Precellys </td><td> טכנולוגיות רטין </td><td> 03119.200.RD000 </td><td> אנחנו עדיין לא נבחנו homoge מכאני אחרnizers אחר מזה. שיטת homogenization חופשיה אחרת דטרגנט יכול לעבוד גם כן, אבל לא נבדקה לפרוטוקול זה. </td></tr><tr><td> 5301 מרוכזים (speedvac) </td><td> אפנדורף </td><td> 5301 000.210 </td><td> הכרחי רק אם חלבון צריך להיות מרוכז. </td></tr><tr><td> LSM 510 וAxioVision Apotome2 </td><td> Zeiss </td><td> ראה קטלוג יצרנים </td><td> שני מיקרוסקופי נמל היכולת לבצע הדמית Z-מחסנית. זו היא תנאי הכרחית להערכה מוצקה ורצינית של אירועי פלישה. </td></tr><tr><td> חומר פלסטי תרבית תאים </td><td> Nunc </td><td> 10 מנות סנטימטר # 172958, צלחות 24 # 142475 גם </td><td> השימוש בחומר פלסטי אחר עשוי להשפיע על האינטראקציה של חלבונים רקומביננטיים או aggresomes ואת משטחי הפלסטיק. אנחנו עדיין לא נבחנו חומרים אחרים מאלו שתוארו כאן. </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> טבלה של חומרים וציוד ספציפיים. </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td><table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> מספר </td><td> שם מאגר </td><td> תוכן </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> 1. </td><td> מדיום גידול חיידקים </td><td> 16 ג&#39;/ ליטר Bacto Tryptone, תמצית 10 גרם / ליטר Bacto שמרים, 5 גרם / ליטר NaCl, 5 מ&quot;מ ארגינין-HCl, MGSO4 5mm, 100 מיקרוגרם / המ&quot;ל carbencillin, 35 מיקרוגרם / המ&quot;ל chloramphenicol </td><td> לגדול חיידקים לOD 600: 0.6-0.8 לגרום ביטוי עם IPTG 1 מ&quot;מ. </td></tr><tr><td> 2. </td><td> חיץ resuspension קטריאלי </td><td> 50 המ&quot;מ TRIS-HCl pH 8.0, 5 המ&quot;מ EDTA, 2 המ&quot;מ PMSF, 1% TX-100, 250 מיקרוגרם / המ&quot;ל Lysozyme, 20 מ&quot;מ MgCl 2 ו 400 המ&quot;ל DNase U/50 </td><td> Resupend גלולת חיידקים מ1 הליטר oveתרבות rnight במאגר resuspension מ&quot;ל 50. </td></tr><tr><td> 3. </td><td> חיץ מיצוי חלבון </td><td> 50 mM טריס pH 8.0, 5 המ&quot;מ imidazole, 500 המ&quot;מ NaCl, אוריאת ז 8 ו 10 מ&quot;מ ב-ME </td><td></td></tr><tr><td> 4. </td><td> חיץ לשטוף עמודת Ni-נ.ת. ע </td><td> 50 mM טריס pH 8.0, 5 המ&quot;מ imidazole, 500 המ&quot;מ NaCl, אוריאת ז 8 ו 10 מ&quot;מ ב-ME, 12 המ&quot;מ imidazole </td><td> חיץ חילוץ שונה עם 12 המ&quot;מ imidazole הוסיף. </td></tr><tr><td> 5. </td><td> חיץ elution עמודת Ni-נ.ת. ע </td><td> 50 mM טריס, 500 mM NaCl, 300 המ&quot;מ imidazole, ז 8 אוריאה, 1 המ&quot;מ PMSF, 5 מ&quot;מ ו10 mM EDTA ב-ME </td><td> חיץ elution מכיל 10 mM ב-ME, הדיאליזה בהמשך. </td></tr><tr><td> 6. </td><td> PBS </td><td> 8 גרם / הליטר NaCl, 0.2 גר &#39;/ ליטר KCl, 1.44 גר&#39; / ליטר Na 2 HPO 4, 0.24 ג&#39;/ ליטר KH 2 PO 4, להסתגל לpH 7.4 </td><td></td></tr><tr><td>7. </td><td> תיוג חיץ </td><td> PBS המכיל TCEP 5 מ&quot;מ </td><td></td></tr><tr><td colspan="4"> טבלה של מתכונים. </td></tr></tbody></table></td></tr></tbody></table>

generation, purification, and characterization of cell-invasive disc1 protein species

צבירת חלבון נתפסה כסימן היכר כללי של תנאי מוח כרוניים, ניווניות כמו, למשל, במחלות ניווניות מחלת אלצהיימר (Aβ, טאו), מחלת פרקינסון (α-סינוקלאין), מחלת הנטינגטון (polyglutamine, huntingtin), ואחרים. צבירת חלבון היא חשבה להתרחש עקב proteostasis המופרע, כלומר חוסר האיזון בין נובע ופירוק חלבוני misfolded. מן ראוי לציין כי את אותם החלבונים נמצאים מצטברים בצורות ספורדיות של מחלות אלו שמוטציה בגרסות נדירות של צורות משפחתיות. סכיזופרניה היא מחלה כרונית פרוגרסיבית מוח שבמקרים רבים הולכים יחד עם גירעון הקוגניטיבי קבוע ובלתי הפיך. בגישת גן מועמד, אנחנו בדקנו אם 1 שבשנו ב-סכיזופרניה (DISC1), גן משובט במשפחה סקוטית עם הצמדה למחלה כרונית נפשית 1, 2, יכולה להימצא כאגרגטים מסיסים בbrain של מקרים ספוראדיים של סכיזופרניה 3. שימוש CC SMRI, זיהה בכ 20% ממקרים עם CMD אבל לא ביקורת רגילה או חולים עם מחלות ניווניות immunoreactivity DISC1 sarkosyl מסיס לאחר החלוקה ביוכימי. מחקרים מאוחרים יותר במבחנה גילו כי נטיית הצבירה של DISC1 הושפעה פולימורפיזם מחלה הקשורה S704C 4, ושDISC1 aggresomes שנוצר במבחנה היו תא פולשנית 5, בדומה למה שכבר הוכח לAβ 6, 7-9 טאו, α סינוקלאין-10, 11 polyglutamine, או SOD1 אגרגטים 12. ממצאים אלה הניעו אותנו להציע שלפחות משנה של מקרים עם CMD, אלה עם DISC1 המצטבר עלולים להיות הפרעות חלבון קונפורמציה. כאן אנו מתארים כיצד אנו יוצרים DISC1 aggresomes בתאי יונקים, לטהר אותם בשיפוע סוכרוז ולהשתמש בם לStudi תא הפולשנותes. כמו כן, אנו מתארים כיצד אנחנו מייצרים C-מסוף DISC1 בר, תווית באופן בלעדי multimeric ולטהר אותו ללימודי הפולשנות סלולרית. שימוש בmultimers רקומביננטי של DISC1 להשיג הפולשנות תא דומה כמו לבר סינטטי שכותרת דומה α-סינוקלאין. אנו גם מראים שקטע זה נלקח בvivo כאשר מזריקים stereotactically לתוך המוח של בעלי חיים מושתלים.

Watch this Scientific Journal Video about Generation, Purification, and Characterization of Cell-invasive DISC1 Protein Species at JoVE.com

Generation, Purification, and Characterization of Cell-invasive DISC1 Protein Species

פלישת הדור, טיהור ותא של aggresomes התאי, cytoplasmic אורך המלא DISC1 חלבון מתרביות תאים ומתויג בר, multimeric רקומביננטי DISC1 חלבון<em&gt; א coli</em&gt; מתוארים. הפולשנות סלולרית מוצגת לתאי נמען בתרבית תאים ונוירונים<em&gt; In vivo</em&gt; לאחר חיסון המוח stereotactical.

דור, טיהור, ואפיון של מיני חלבון DISC1 הסלולריים פולשניים

Protein aggregation is seen as a general hallmark of chronic, degenerative brain conditions like, for example, in the neurodegenerative diseases ...

Research

JoVE Journal

Biology

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

הכתמה של חלבונים עם ג&#39;ל Coomassie G-250 ללא חומצה אצטית ממס אורגני

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

Purification of the M. magneticum Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamA&Delta;41

Purification of the M. magneticum Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamAÃƒÅ½Ã¢â‚¬Â41

טיהור של מ magneticum מסננים השגריר-1 Magnetosome חלבון Associated MamAΔ41

Magnetotactic bacteria comprise a diverse group of aquatic microorganisms that are able to orientate themselves along geomagnetic fields. This behavior is ...

A Noninvasive Hair Sampling Technique to Obtain High Quality DNA from Elusive Small Mammals

שיער פולשנית דגימה טכניקה לקבל DNA באיכות גבוהה מ יונקים קטנים החמקמק

Noninvasive genetic sampling approaches are becoming increasingly important to study wildlife populations. A number of studies have reported using ...

Automated Hydrophobic Interaction Chromatography Column Selection for Use in Protein Purification

הידרופובי אוטומטי אינטראקציה כרומטוגרפיה טור בחירה עבור שימוש ב טיהור חלבון

In contrast to other chromatographic methods for purifying proteins (e.g. gel filtration, affinity, and ion exchange), hydrophobic interaction ...

Purification of Hsp104, a Protein Disaggregase

טיהור Hsp104, Disaggregase חלבון

Hsp104 is a hexameric AAA+ protein1 from yeast, which couples ATP hydrolysis to protein disaggregation2-10 (Fig. 1). This activity imparts two key ...

Identification of Protein Interacting Partners Using Tandem Affinity Purification

זיהוי שותפים חלבון אינטראקציה באמצעות טיהור טנדם זיקה

A critical and often limiting step in understanding the function of host and viral proteins is the identification of interacting cellular or viral protein ...

Identification and Characterization of Protein Glycosylation using Specific Endo- and Exoglycosidases

זיהוי ואפיון של חלבונים באמצעות glycosylation ספציפי אנדו ו exoglycosidases

Glycosylation, the addition of covalently linked sugars, is a major post-translational modification of proteins that can significantly affect processes ...

Protein Purification-free Method of Binding Affinity Determination by Microscale Thermophoresis

שיטה ללא טיהור חלבונים של קביעת זיקה מחייבת ידי thermophoresis Microscale

Quantitative characterization of protein  interactions is essential in practically any field of life sciences,  particularly drug discovery. Most of ...

Detecting, Visualizing and Quantitating the Generation of Reactive Oxygen Species in an Amoeba Model System

איתור, חזותי וquantitating הדור של מינים חמצן תגובתי במערכת מודל אמבה

Reactive oxygen species (ROS) comprise a range of reactive and short-lived, oxygen-containing molecules, which are dynamically interconverted or ...

Identifying Protein-protein Interaction in Drosophila Adult Heads by Tandem Affinity Purification (TAP)

Identifying Protein-protein Interaction in Drosophila Adult Heads by Tandem Affinity Purification TAP

זיהוי אינטראקציה בין חלבונים ב<em&gt; דרוזופילה</em&gt; ראשי מבוגרים טנדם זיקה טיהור (TAP)

Genetic screens conducted using Drosophila melanogaster (fruit fly) have made numerous milestone discoveries in the advance of biological sciences. ...