Name: fabrication and use of microenvironment microarrays (mearrays)
Uploaded: 2012-10-11T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Fabrication and Use of MicroEnvironment microArrays MEArrays at JoVE.com

ويدعم من قبل ML NIA (R00AG033176 وR01AG040081) ومختبر البحوث الموجهة والتنمية، وزارة الطاقة عقد # DE-AC02-05CH11231.

1. الطباعة إعداد الطبقات التحتية قرار استخدام polydimethylsiloxane (PDMS) المغلفة أو بولكرلميد (PA)-الشرائح المغلفة تعتمد على المعالم الهامة للتصميم تجريبي. يمكن ضبطها معامل مرونة كل من البوليمرات لتقليد التصلب من الأنسجة المختلفة عن طريق تغيي...

<ol>
	<li>Bissell, M. J., Labarge, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Context,+tissue+plasticity,+and+cancer:+are+tumor+stem+cells+also+regulated+by+the+microenvironment.">Context, tissue plasticity, and cancer: are tumor stem cells also regulated by the microenvironment.</a> Cancer Cell. 7, 17-23 (2005).</li><li>Engler, A. J., Sen, S., Sweeney, H. L., Discher, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrix+elasticity+directs+stem+cell+lineage+specification.">Matrix elasticity directs stem cell lineage specification.</a> Cell. 126, 677-689 (2006).</li><li>McBeath, R., Pirone, D. M., Nelson, C. M., Bhadriraju, K., Chen, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+shape,+cytoskeletal+tension,+and+RhoA+regulate+stem+cell+lineage+commitment.">Cell shape, cytoskeletal tension, and RhoA regulate stem cell lineage commitment.</a> Dev. Cell. 6, 483-495 (2004).</li><li>LaBarge, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+mammary+progenitor+cell+fate+decsions+are+products+of+interactions+with+combinatorial+microenvironments.">Human mammary progenitor cell fate decsions are products of interactions with combinatorial microenvironments.</a> Integrative Biology. 1, 70-79 (2009).</li><li>Kim, H. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterning+Methods+for+Polymers+in+Cell+and+Tissue+Engineering.">Patterning Methods for Polymers in Cell and Tissue Engineering.</a> Annals of biomedical engineering. , (2012).</li><li>Boudou, T., Ohayon, J., Picart, C., Pettigrew, R. I., Tracqui, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonlinear+elastic+properties+of+polyacrylamide+gels:+implications+for+quantification+of+cellular+forces.">Nonlinear elastic properties of polyacrylamide gels: implications for quantification of cellular forces.</a> Biorheology. 46, 191-205 (2009).</li><li>Tse, J. R., Engler, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+hydrogel+substrates+with+tunable+mechanical+properties.">Preparation of hydrogel substrates with tunable mechanical properties.</a> Current protocols in cell biology. Chapter 10, Unit 10 (2010).</li><li>Flaim, C. J., Chien, S., Bhatia, S. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+extracellular+matrix+microarray+for+probing+cellular+differentiation.">An extracellular matrix microarray for probing cellular differentiation.</a> Nat. Methods. 2, 119-125 (2005).</li><li>Soen, Y., Mori, A., Palmer, T. D., Brown, P. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploring+the+regulation+of+human+neural+precursor+cell+differentiation+using+arrays+of+signaling+microenvironments.">Exploring the regulation of human neural precursor cell differentiation using arrays of signaling microenvironments.</a> Mol. Syst. Biol. 2, 37 (2006).</li></ol>

طريقة MEArray المقدمة هنا يمكن التحليلات الفنية للخلية والتفاعلات المكروية اندماجي 4. MEArray تحليل يجمع بين استخدام تكنولوجيات micropatterning الأساسية، بيولوجيا الخلايا، والروبوتات وأجهزة الطباعة ميكروأري التحليل التي تتوفر في مرافق متعددة كثيرة. شاشات MEArray متوافقة مع م...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> كتالوج رقم </td><td> التعليقات (اختياري) </td></tr><tr><td> الزجاج 25 مم X الشرائح 75 مم </td><td> VWR </td><td> 48311-600 </td><td></td></tr><tr><td> الزجاج coverslips (NO.1) 24 مم × 50 مم </td><td> VWR </td><td> 48393-241 </td><td></td></tr><tr><td> طبق تلطيخ (أو جرة COPLAN) </td><td> VWR </td><td> 25461-003 </td><td></td></tr><tr><td> أطباق بتري (15 سم) </td><td> BD الصقر </td><td> 351058 </td><td></td></tr><tr><td> هيدروكسيد الصوديوم (1.0N) </td><td> سيغما الدريخ </td><td> S2567 </td><td></td></tr><tr><td> القردة (&gt; 98٪ (3-أمينو) triethoxysilane) </td><td> سيغما الدريخ </td><td> A3648 </td><td></td></tr><tr><td> غلوتارالدهيد </td><td> سيغما الدريخ </td><td> G7651 </td><td> 50٪ في الماء </td></tr><tr><td> APS (&gt; فوق كبريتات الأمونيوم 98٪) </td><td> SIGMA الدريخ </td><td> A3678 </td><td> إعداد 10٪ حل العمل مع DDH 2 O </td></tr><tr><td> TEMED (N، N، N &#39;، N&#39;-Tetramethylethylenediamine) </td><td> سيغما الدريخ </td><td> T9281 </td><td></td></tr><tr><td> مادة الأكريلاميد (40٪) </td><td> سيغما الدريخ </td><td> A4058 </td><td></td></tr><tr><td> مكرر الأكريلاميد (2٪ W / V) </td><td> فيشر BioReagents </td><td> BP1404-250 </td><td></td></tr><tr><td> 0،45 ميكرون تصفية الحقنة 4-مم النايلون </td><td> Nalgene </td><td> 176-0045 </td><td></td></tr><tr><td> FITC </td><td> سيغما الدريخ </td><td> F4274 </td><td></td></tr><tr><td> PDMS (polydimethylsiloxane) </td><td> داو كورنينج </td><td> 3097358-1004 </td><td> Sylgard عدة لاصقات المرنة عبر 184 ألسويرث </td></tr><tr><td> 2-غرفة الشرائح </td><td> نونك </td><td> 177380 </td><td></td></tr><tr><td> بلورونيك F108 </td><td> BASF </td><td> 30089186 </td><td></td></tr><tr><td> AQUarium تسرب </td><td> داو كورنينج </td><td> DAP 00688 </td><td></td></tr><tr><td> Fluormount-G </td><td> جنوب الحيوية </td><td> 0100-01 </td><td></td></tr><tr><td> البلاستيك المتاح الكؤوس </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> اللسان المثبطون </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> قفازات النتريل </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> البلاستيك صناديق المجهر الشريحة </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> تدور المغطي </td><td> WS-400B-6NPP/LITE </td><td> Laurell تكنولوجيز كوربوريشن </td><td></td></tr><tr><td> فرن </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> موقد الرقمية </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 384 وحات جيدة </td><td></td><td></td><td> وقال العلامة التجارية المناسبة للروبوت ميكروأري </td></tr><tr><td> ميكروأري الطباعة الروبوت </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> مقلوب المجهر مضان المرحلة و </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> محور عصبي ميكروأري الماسحات الضوئية </td><td> الجزيئية الأجهزة </td><td></td><td> وجود عدة تكوينات </td></tr></tbody></table>

fabrication and use of microenvironment microarrays (mearrays)

التفاعلات بين الخلايا والمكروية المحيطة بها تكون له عواقب وظيفية للسلوك الخلوية. على مستوى خلية واحدة، يمكن microenvironments متميزة فرض التمايز، والهجرة، وانتشار الظواهر، وعلى مستوى أنسجة المكروية العمليات المعقدة مثل التشكل وتكون الأورام 1. ليس فقط محتويات الخلية والجزيئية لتأثير microenvironments الخلايا داخل، ولكن القيام بذلك مرونة 2 و 3 من هندسة الأنسجة. يعرف بأنه مجموع خلية خلية، ECM-، والتي تذوب في التفاعلات عامل، بالإضافة إلى الخصائص الفيزيائية، والمكروية معقدة. والظواهر من الخلايا داخل الأنسجة ويرجع ذلك جزئيا إلى محتواها الجيني ويرجع ذلك جزئيا إلى التفاعلات اندماجي مع microenviroment. ومن التحديات الرئيسية هو ربط مجموعات محددة من مكونات microenvironmental مع السلوكيات المميزة. الأنف والحنجرة &quot;&gt; وهنا، نقدم المكروية ميكروأري (MEArray) منهاج خلية مقرها الفرز وظيفية من التفاعل مع microenvironments اندماجي 4. طريقة تسمح للسيطرة في وقت واحد من التركيب الجزيئي ومعامل المرونة، ويجمع بين استخدام ميكروأري على نطاق واسع تقنيات micropatterning و. شاشات MEArray تتطلب عدد قليل من إلى 10،000 خلية لكل مجموعة، مما يسهل الدراسات الفنية للأنواع الخلايا نادرة مثل الخلايا الاصلية الكبار. وجود قيود على التكنولوجيا التي لا microenvironments الأنسجة كامل تلخيصها بشكل كامل على MEArrays. ومع ذلك، مقارنة الردود في نوع من الخلايا نفس microenvironments العديدة ذات الصلة، على سبيل المثال سوف تركيبات البشرى للبروتينات ECM التي تميز نسيج معين، يعطي فكرة عن كيفية حصول microenvironmental مكونات الأنسجة محددة الظواهر الفنية. يمكن طباعة MEArrays باستخدام مجموعة متنوعة واسعة من المؤتلف غرووث العوامل، السيتوكينات، والبروتينات تنقية ECM، وخليط منها. يقتصر فقط منصة توفر الكواشف محددة. MEArrays قابلة للتحليل الوقت انقضى، ولكن في معظم الأحيان تستخدم لتحليل نقطة النهاية من الوظائف الخلوية التي هي قابلة للقياس مع تحقيقات الفلورسنت. على سبيل المثال، عادة يتم قياس توليف الحمض النووي، موت الخلايا المبرمج، واقتناء الدول المتباينة، أو إنتاج منتجات جين معين. لفترة وجيزة، وتدفق الأساسية للتجربة MEArray هو إعداد الشرائح المغلفة مع الطبقات التحتية الطباعة وإعداد لوحة رئيسية من البروتينات التي سيتم طباعتها. ثم يتم طباعة المصفوفات مع الروبوت ميكروأري، يسمح لخلايا إرفاق، وتنمو في الثقافة، ومن ثم يتم إصلاحها كيميائيا عند الوصول إلى نقطة النهاية التجريبية. وتستخدم المقايسات الفلورسنت أو اللونية، مع تصوير المجاهر التقليدية أو الماسحات الضوئية ميكروأري، لتكشف الظواهر ذات الصلة الجزيئية والخلوية (الشكل 1).

Watch this Scientific Journal Video about Fabrication and Use of MicroEnvironment microArrays MEArrays at JoVE.com

Fabrication and Use of MicroEnvironment microArrays MEArrays

ووصف وظيفي اندماجي طريقة الفرز من أجل الحصول على نظرة ثاقبة لآثار التركيب الجزيئي للmicroenvironments على الوظائف الخلوية. الأسلوب يستفيد من التكنولوجيات القائمة على أساس ميكروأري لتوليد صفائف microenvironments اندماجي تعريف التي تدعم التصاق الخلايا والتحليل الوظيفي.

تصنيع واستخدام ميكروأرس المكروية (MEArrays)

The interactions between cells and their surrounding microenvironment have functional consequences for cellular behaviour. On the single cell level, ...

Research

JoVE Journal

Biology

Fabrication and Use of MicroEnvironment microArrays (MEArrays)

Bacterial Gene Expression Analysis Using Microarrays

التحليل الجرثومي التعبير الجيني عن طريق ميكروأرس]

PDMS Device Fabrication and Surface Modification

PDMS تصنيع الأجهزة وتعديل السطح

Fabrication of the Thermoplastic Microfluidic Channels

تلفيق القنوات ميكروفلويديك الحراري

In our lab, we have successfully isolated nucleic acids directly from microliter and submicroliter volumes of human blood, urine and stool using ...

Fabrication of Amperometric Electrodes

تصنيع أقطاب Amperometric

Carbon fiber electrodes are crucial for the detection of catecholamine release from vesicles in single cells for amperometry measurements.  Here, we ...

Fabrication of Myogenic Engineered Tissue Constructs

تلفيق عضلي يبني الأنسجة المهندسة

Despite the fact that electronic pacemakers are life-saving medical devices, their long-term performance in pediatric patients can be problematic owing to ...

Genome-wide Analysis of Aminoacylation (Charging) Levels of tRNA Using Microarrays

Genome-wide Analysis of Aminoacylation Charging Levels of tRNA Using Microarrays

الجينوم على نطاق تحليل المستويات (شحن) من الحمض الريبي النووي النقال باستخدام Aminoacylation ميكروأرس]

tRNA aminoacylation, or charging, levels can rapidly change within a cell in response to the environment[1]. Changes in tRNA charging levels in both ...

DNA Microarrays: Sample Quality Control, Array Hybridization and Scanning

ميكروأرس] DNA : نموذج مراقبة الجودة ، وتهجين صفيف والمسح الضوئي

Microarray expression profiling of the nervous system provides a powerful approach to identifying gene activities in different stages of development, ...

Production of Tissue Microarrays, Immunohistochemistry Staining and Digitalization Within the Human Protein Atlas

إنتاج نسيج [ميكروأرس]، وتلطيخ المناعية والتكنولوجيا الرقمية وضمن أطلس البروتين البشري

The  tissue microarray (TMA) technology provides the means for high-throughput  analysis of multiple tissues and cells. The technique is used within the ...

Glycan Profiling of Plant Cell Wall Polymers using Microarrays

غليكان التنميط من البوليمرات جدار الخلية النباتية باستخدام [ميكروأرس]

Plant cell walls are complex matrixes of heterogeneous glycans which play an important role in the physiology and development of plants and provide the ...

Design and Use of Multiplexed Chemostat Arrays

تصميم واستخدام المصفوفات ناظم كيميائي تعدد في الإرسال

Chemostats are continuous culture systems in which cells are grown in a tightly controlled, chemically constant environment where culture density is ...