Name: on-chip endothelial inflammatory phenotyping
Uploaded: 2012-07-21T18:00:00
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이 작품은 스콧 I. 사이먼과 앤서니 G. Passerini에 NIH / NHLBI 부여 R01 HL082689에 의해 지원되었다.

1. 세포 배양 및 기판 준비 <ol><li> 선반을 사용하여 100 X 20mm의 조직 배양 접시 (BD 팔콘)에서 3 인치 원형 기판을 자르고. 70 % 에탄올의 침수에 의해 기판을 소독. 상온에서 1 시간 4 ML 타입 - 나 콜라겐 (100 μg / ml) 쇼핑과 배양 접시와 코트의 장소는 다음 네 ML 1 X PBS와 린스. </li><li> 기판에 직접 한 ML을 적용하여 6.5x10 5 셀 / ML 및 종자에서 인간의 대동맥 내피 세포 (HAEC, 통로 4-6)을 일시 중지합...

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	<li>Schaff, U. Y., Xing, M. M., Lin, K. K., Pan, N., Jeon, N. L., Simon, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+mimetics+based+on+microfluidics+for+imaging+the+leukocyte--endothelial+inflammatory+response.">Vascular mimetics based on microfluidics for imaging the leukocyte--endothelial inflammatory response.</a> Lab Chip. 7, 448-456 (2007).</li><li>Tsou, J. K., Gower, R. M., Ting, H. J., Schaff, U. Y., Insana, M. F., Passerini, A. G., Simon, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+regulation+of+inflammation+by+human+aortic+endothelial+cells+in+a+linear+gradient+of+shear+stress.">Spatial regulation of inflammation by human aortic endothelial cells in a linear gradient of shear stress.</a> Microcirculation. 15, 311-323 (2008).</li><li>Ting, H. J., Stice, J. P., Schaff, U. Y., Hui, D. Y., Rutledge, J. C., Knowlton, A. A., Passerini, A. G., Simon, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Triglyceride-rich+lipoproteins+prime+aortic+endothelium+for+an+enhanced+inflammatory+response+to+tumor+necrosis+factor-alpha.">Triglyceride-rich lipoproteins prime aortic endothelium for an enhanced inflammatory response to tumor necrosis factor-alpha.</a> Circ. Res. 100, 381-390 (2007).</li><li>Wang, Y. I., Schulze, J., Raymond, N., Tomita, T., Tam, K., Simon, S. I., Passerini, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+inflammation+correlates+with+subject+triglycerides+and+waist+size+after+a+high-fat+meal.">Endothelial inflammation correlates with subject triglycerides and waist size after a high-fat meal.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 300, H784-H791 (2011).</li><li>Deverse, J. S., Bailey, K. A., Jackson, K. N., Passerini, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shear+stress+modulates+rage-mediated+inflammation+in+a+model+of+diabetes-induced+metabolic+stress.">Shear stress modulates rage-mediated inflammation in a model of diabetes-induced metabolic stress.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. , (2012).</li><li>Dai, G., Kaazempur-Mofrad, M. R., Natarajan, S., Zhang, Y., Vaughn, S., Blackman, B. R., Kamm, R. D., Garcia-Cardena, G., Gimbrone, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+endothelial+phenotypes+evoked+by+arterial+waveforms+derived+from+atherosclerosis-susceptible+and+-resistant+regions+of+human+vasculature.">Distinct endothelial phenotypes evoked by arterial waveforms derived from atherosclerosis-susceptible and -resistant regions of human vasculature.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101, 14871-14876 (2004).</li><li>Young, E. W., Wheeler, A. R., Simmons, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrix-dependent+adhesion+of+vascular+and+valvular+endothelial+cells+in+microfluidic+channels.">Matrix-dependent adhesion of vascular and valvular endothelial cells in microfluidic channels.</a> Lab Chip. 7, 1759-1766 (2007).</li><li>Davies, P. F., Civelek, M., Fang, Y., Guerraty, M. A., Passerini, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+heterogeneity+associated+with+regional+athero-susceptibility+and+adaptation+to+disturbed+blood+flow+in+vivo.">Endothelial heterogeneity associated with regional athero-susceptibility and adaptation to disturbed blood flow in vivo.</a> Semin Thromb Hemost. 36, 265-275 (2008).</li><li>Burdge, G. C., Calder, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+cytokine+response+during+the+postprandial+period:+A+potential+causal+process+in+vascular+disease.">Plasma cytokine response during the postprandial period: A potential causal process in vascular disease.</a> Br. J. Nutr. 93, 3-9 (2005).</li><li>Hotamisligil, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+and+metabolic+disorders.">Inflammation and metabolic disorders.</a> Nature. 444, 860-867 (2006).</li><li>Libby, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+in+atherosclerosis.">Inflammation in atherosclerosis.</a> Nature. 420, 868-874 (2002).</li><li>Nigro, P., Abe, J., Berk, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+shear+stress+and+atherosclerosis:+A+matter+of+site+specificity.">Flow shear stress and atherosclerosis: A matter of site specificity.</a> Antioxid Redox Signal. 15, 1405-1414 (2011).</li><li>Chiu, J. J., Lee, P. L., Chen, C. N., Lee, C. I., Chang, S. F., Chen, L. J., Lien, S. C., Ko, Y. C., Usami, S., Chien, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shear+stress+increases+icam-1+and+decreases+vcam-1+and+e-selectin+expressions+induced+by+tumor+necrosis+factor-[alpha]+in+endothelial+cells.">Shear stress increases icam-1 and decreases vcam-1 and e-selectin expressions induced by tumor necrosis factor-[alpha] in endothelial cells.</a> Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 24, 73-79 (2004).</li><li>Li, Y. S., Haga, J. H., Chien, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+basis+of+the+effects+of+shear+stress+on+vascular+endothelial+cells.">Molecular basis of the effects of shear stress on vascular endothelial cells.</a> J. Biomech. 38, 1949-1971 (2005).</li><li>Usami, S., Chen, H. H., Zhao, Y., Chien, S., Skalak, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Design+and+construction+of+a+linear+shear+stress+flow+chamber.">Design and construction of a linear shear stress flow chamber.</a> Ann. Biomed. Eng. 21, 77-83 (1993).</li><li>Helmke, B. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+control+of+cytoskeletal+mechanics+by+hemodynamic+forces.">Molecular control of cytoskeletal mechanics by hemodynamic forces.</a> Physiology (Bethesda). 20, 43-53 (2005).</li><li>Gower, R. M., Wu, H., Foster, G. A., Devaraj, S., Jialal, I., Ballantyne, C. M., Knowlton, A. A., Simon, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cd11c/cd18+expression+is+upregulated+on+blood+monocytes+during+hypertriglyceridemia+and+enhances+adhesion+to+vascular+cell+adhesion+molecule-1.">Cd11c/cd18 expression is upregulated on blood monocytes during hypertriglyceridemia and enhances adhesion to vascular cell adhesion molecule-1.</a> Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 31, 160-166 (2011).</li><li>Wu, H., Gower, R. M., Wang, H., Perrard, X. Y., Ma, R., Bullard, D. C., Burns, A. R., Paul, A., Smith, C. W., Simon, S. I., Ballantyne, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+role+of+cd11c++monocytes+in+atherogenesis+associated+with+hypercholesterolemia.">Functional role of cd11c+ monocytes in atherogenesis associated with hypercholesterolemia.</a> Circulation. 119, 2708-2717 (2009).</li><li>Bussolari, S. R., Dewey, C. F., Gimbrone, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apparatus+for+subjecting+living+cells+to+fluid+shear+stress.">Apparatus for subjecting living cells to fluid shear stress.</a> The Review of scientific instruments. 53, 1851-1854 (1982).</li></ol>

우리는 캠 표현과 단핵구 유착의 실시간 영상을 통해 내피 염증성 표현형의 온 칩 평가를위한 microfluidic PDMS 장치의 사용을 설명합니다. 우리의 접근 방식의 가장 큰 장점은 atherogenic 혈관에 전단 응력을 미러링 정의된 유체 조건에서식이 lipids 및 크린 시토킨 등의 염증 중재자에 노출된 세포에서 내피 기능 장애와 관련된 결과를 계량하는 능력에있다. VMMC는 시약 또는 제한된 공급이있을 수 있습?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 아이템 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td></tr><tr><td> 100 X 20mm 배양 접시 </td><td> BD 팔콘 </td><td> 353,003 </td></tr><tr><td> 에탄올 95% </td><td> EMD 화학 </td><td> EX0290-1 </td></tr><tr><td> DPBS </td><td> Cellgro </td><td> 21-031 - 이력서 </td></tr><tr><td> 나는 쥐 꼬리 파생 콜라겐을 입력합니다 </td><td> Gibco </td><td> A10483-01 </td></tr><tr><td> 인간의 대동맥 내피 세포 </td><td> Genlantis </td><td> PH30405A </td></tr><tr><td> 항생제 - Antimycotic 솔루션 </td><td> Invitrogen </td><td> 15240-062 </td></tr><tr><td> 내피 BulletKit </td><td> Lonza </td><td> CC-4176 </td></tr><tr><td> 내피 자연적으로 흐르는 것과, 반사적으로 흐르는 미디어-2 </td><td> Lonza </td><td> CC-3156 </td></tr><tr><td> 10 ML의 주사기 </td><td> BD 팔콘 </td><td> 309,604 </td></tr><tr><td> 폴리 우레탄 튜브 </td><td> Tygon </td><td> ABW0001 </td></tr><tr><td> Leibovitz-15 미디어 </td><td> Gibco </td><td> 11415-069 </td></tr><tr><td> Sylgard 184 실리콘 엘라스토머베이스 </td><td> 다우 코닝 </td><td> 184 </td></tr><tr><td> Sylgard 184 실리콘 엘라스토머 경화 에이전트 </td><td> 다우 코닝 </td><td> 184 </td></tr><tr><td> SU8 포토 레지스트 마스터 웨이퍼 </td><td> UC 데이비스 팬 연구실 </td><td> N / A </td></tr><tr><td> 이클립스 TE200 거꾸로 현미경 </td><td> 니콘 </td><td> 이클립스 TE200 </td></tr><tr><td> 주사기 펌프 </td><td> 하버드 장치 </td><td> PHD2000 </td></tr><tr><td> 19 게이지 피하 바늘 </td><td> 켄달 </td><td> 8881 </td></tr><tr><td> THP-1 Monocytic 세포주 </td><td> ATCC </td><td> 티비-202 </td></tr><tr><td> HBSS 칼슘 2 + / MG 2 (행크스는 생리 식염수를 버퍼) + </td><td&gt; Gibco </td><td> 14025-092 </td></tr><tr><td> 종양 괴사 요인 알파 (TNF-α) </td><td> R &amp; D 시스템 </td><td> 210-TA-010 </td></tr><tr><td> Stromal 유래 팩터 - 1 (SDF-1) </td><td> R &amp; D 시스템 </td><td> 350 NS-010 </td></tr><tr><td> RPMI 1640 </td><td> Cellgro </td><td> 10-040 - 이력서 </td></tr><tr><td> 알부민 혈청 인간 (HSA) </td><td> ZLB Behring </td><td> NDC 0053-7680-32 </td></tr></tbody></table> 표 2. 특정 시약 및 장비.

on-chip endothelial inflammatory phenotyping

Atherogenesis은 내피 기능 장애의 결과로 조직의 염증의 상승된 상태에 기여하는 대사 이상에 의해 potentiated됩니다. 그러나 위험 개인의 수준을 의미하는 내피의 초기 기능 변경은 직접 가이드 치료 전략을 돕기 위해 임상적으로 평가되지 않습니다. 또한, 지역 혈류 역학에 의한 염증의 규정은 죽상 경화증의 비 임의의 공간적 분포에 기여하고 있지만 메커니즘은 생체내에 윤곽을 그리다하기가 어렵습니다. 우리는 정확한 유량 조건 하에서 인간 내피 세포 (EC)와 monocytes의 염증성 이벤트의 정량적 분석 신진 대사 섭동에 실험실 - 온 - 칩 기반의 접근 방식을 설명합니다. 소프트 리소그래피의 표준 방식은 교양 EC의 monolayers에 직접 바인딩되는 혈관 모방 microfluidic 챔버 (VMMC)를 microfabricate하는 데 사용됩니다. 1이 디바이스 시약 작은 볼륨 동안 사용의 이점을 가지고잘 정의된 전단 필드에 노출 EC의 세포막에서 염증 이벤트에 직접 이미징을위한 플랫폼을 제공합니다. 우리는 성공적으로 인간의 대동맥 EC (HAEC)에서 시토킨-2 지질-3, 4, 분노 유발 5 염증을 조사하기 위해 이러한 장치를 적용했습니다. 여기 분석 monocytic 셀 (THP-1) 압연 및 차동 전단 특성 아래 조건과 염증성 시토킨 TNF-α에 의해 활성화됩니다 HAEC monolayers의 체포에 VMMC의 사용을 문서화. 이러한 연구는 신진 대사 위험 요인 아래 atherosusceptibility으로 기계론의 통찰력을 제공하고 있습니다.

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On-Chip Endothelial Inflammatory Phenotyping

석판술으로 새겨져와 PDMS에서 가공 Microfluidic 흐름 여왕님 EC 장애와 염증과 관련된 기능적 결과를 알아내기 위해 적용됩니다. 대표 실험에서는 차등 전단 응력의 능력 시토킨 활성화 EC monolayers에 monocytic 세포 접착을 조절하기 위해이 입증되었습니다.

온칩 내피 염증성 Phenotyping

Atherogenesis is potentiated by metabolic abnormalities that contribute to a heightened state of systemic inflammation resulting in endothelial ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

On-chip Isotachophoresis for Separation of Ions and Purification of Nucleic Acids

이온의 분리 및 핵산의 정화를위한 온칩 Isotachophoresis

Electrokinetic techniques are a staple of microscale applications because of their unique ability to perform a variety of fluidic and electrophoretic ...

연구

생체공학

Lensfree On-chip Tomographic Microscopy Employing Multi-angle Illumination and Pixel Super-resolution

멀티 앵글 조명 및 픽셀 슈퍼 해상도를 채용 Lensfree 온칩 단층 현미경

Tomographic imaging has been a widely used tool in medicine as it can provide three-dimensional (3D) structural information regarding objects of different ...

Quantifying the Mechanical Properties of the Endothelial Glycocalyx with Atomic Force Microscopy

원자 힘 현미경과 내피 Glycocalyx의 기계적 성질을 정량화

Our  understanding of the interaction of leukocytes and the vessel wall during  leukocyte capture is limited by an incomplete understanding of the ...

Ferromagnetic Bare Metal Stent for Endothelial Cell Capture and Retention

내피 세포 캡처 및 유지에 대한 강자성 베어 메탈 스텐트

Rapid endothelialization of cardiovascular stents is needed to reduce stent thrombosis and to avoid anti-platelet therapy which can reduce bleeding risk. ...

Dry Film Photoresist-based Electrochemical Microfluidic Biosensor Platform: Device Fabrication, On-chip Assay Preparation, and System Operation

드라이 필름 포토 레지스트 기반 전기 화학 미세 바이오 센서 플랫폼: 장치 제작, 온 칩 시험 준비 및 시스템 운영

In recent years, biomarker diagnostics became an indispensable tool for the diagnosis of human disease, especially for the point-of-care diagnostics. An ...

Fabrication and Validation of an Organ-on-chip System with Integrated Electrodes to Directly Quantify Transendothelial Electrical Resistance

제조 및 통합된 전극 Transendothelial 전기 저항을 직접 측정 하는 기관-온-칩 시스템의 유효성 검사

Organs-on-chips, in vitro models involving the culture of (human) tissues inside microfluidic devices, are rapidly emerging and promise to provide useful ...

High Throughput Yeast Strain Phenotyping with Droplet-Based RNA Sequencing

액적 기반 RNA 시퀀싱을 통한 높은 처리량 효모 균주 현상태핑

The powerful tools available to edit yeast genomes have made this microbe a valuable platform for engineering. While it is now possible to construct ...

Direct Bioprinting of 3D Multicellular Breast Spheroids onto Endothelial Networks

내피 네트워크에 3D 다세포 유방 스페로이드의 직접 생체 인쇄

Bioprinting is emerging as a promising tool to fabricate 3D human cancer models that better recapitulate critical hallmarks of in vivo tissue ...

Characterization of Blood Outgrowth Endothelial Cells (BOEC) from Porcine Peripheral Blood

Characterization of Blood Outgrowth Endothelial Cells BOEC from Porcine Peripheral Blood

돼지 말초 혈액에서 혈액 성장 내피 세포(BOEC)의 특성화

The endothelium is a dynamic integrated structure that plays an important role in many physiological functions such as angiogenesis, hemostasis, ...

A Microphysiological System to Study Leukocyte-Endothelial Cell Interaction during Inflammation

염증 중 백혈구-내피 세포 상호작용을 연구하는 미생리학적 시스템

Leukocyte-endothelial cell interactions play an important role in inflammatory diseases such as sepsis. During inflammation, excessive migration of ...