Name: a simple protocol for extracting hemocytes from wild caterpillars
Uploaded: 2012-11-15T11:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Simple Protocol for Extracting Hemocytes from Wild Caterpillars at JoVE.com

وأيد من قبل TMS زمالة الاستئماني هارلان (GWU) خلال هذه الدراسة. تمويل الجمع الميداني وتربية L. المتورقة وE. وقدمت منحة delphinii من قبل NSF DEB 0642438 لJTL.

1. تحضير المواد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد الإبر (1-2 و 3-4 ميكرون تلميح تفتق مم) باستخدام أنابيب زجاجية البورسليكات الشعرية ومجتذب micropipette. ضبط الصك: منحدر: 561؛ السرعة: 20؛ الحرارة: 560؛ التأخير: 1؛ سحب: 100؛ الضغط: 500. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعدا?...

<ol>
	<li>Hartenstein, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+cells+and+blood+cell+development+in+the+animal+kingdom.">Blood cells and blood cell development in the animal kingdom.</a> Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 22, 677 (2006).</li><li>Wood, W., Jacinto, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+melanogaster+embryonic+haemocytes:+masters+of+multitasking.">Drosophila melanogaster embryonic haemocytes: masters of multitasking.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 8 (7), 542 (2007).</li><li>Strand, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+insect+cellular+immune+response.">The insect cellular immune response.</a> Insect Sci. 15 (1), 1 (2008).</li><li>Fauvarque, M. O., Williams, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+cellular+immunity:+a+story+of+migration+and+adhesion.">Drosophila cellular immunity: a story of migration and adhesion.</a> J. Cell Sci. 124 (9), 1373 (2011).</li><li>Nehme, N. T., Quintin, J., Cho, J. H., Lee, J., Lafarge, M. C., Kocks, C., Ferrandon, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relative+roles+of+the+cellular+and+humoral+responses+in+the+Drosophila+host+defense+against+three+gram-positive+bacterial+infections.">Relative roles of the cellular and humoral responses in the Drosophila host defense against three gram-positive bacterial infections.</a> PLoS One. 6 (3), e14743 (2011).</li><li>Ulvila, J., Vanha-Aho, L. M., R&#228;met, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+phagocytosis+-+still+many+unknowns+under+the+surface.">Drosophila phagocytosis - still many unknowns under the surface.</a> APMIS. 119 (10), 651 (2011).</li><li>Moreira, C. G., Regan, J. C., Zaidman-Remy, A., Jacinto, A., Praq, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+hemocyte+migration:+an+in+vivo+assay+for+directional+cell+migration.">Drosophila hemocyte migration: an in vivo assay for directional cell migration.</a> Methods Mol. Biol. 769, 249 (2011).</li><li>Hillyer, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mosquito+immunity.">Mosquito immunity.</a> Adv. Exp. Med. Biol. 708, 218 (2010).</li><li>Castillo, J. C., Robertson, A. E., Strand, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+hemocytes+from+the+mosquitoes+Anopheles+gambiae+and+Aedes+aegypti.">Characterization of hemocytes from the mosquitoes Anopheles gambiae and Aedes aegypti.</a> Insect Biochem. Mol. Biol. 36 (12), 891 (2006).</li><li>Jiang, H., Vilcinskas, A., Kanost, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunity+in+lepidopteran+insects.">Immunity in lepidopteran insects.</a> Adv. Exp. Med. Biol. 708, 181 (2010).</li><li>Eleftherianos, I., Xu, M., Yadi, H., ffrench-Constant, R. H., Reynolds, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasmatocyte-spreading+peptide+(PSP)+plays+a+central+role+in+insect+cellular+immune+defenses+against+bacterial+infection.">Plasmatocyte-spreading peptide (PSP) plays a central role in insect cellular immune defenses against bacterial infection.</a> J. Exp. Biol. 212 (12), 1840 (2009).</li><li>Ribeiro, C., Breh&#233;lin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+haemocytes:+what+type+of+cell+is+that.">Insect haemocytes: what type of cell is that.</a> J. Insect Physiol. 52 (5), 417 (2006).</li><li>Beetz, S., Brinkmann, M., Trenczek, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+between+larval+and+pupal+hemocytes+of+the+tobacco+hornworm,+Manduca+sexta,+determined+by+monoclonal+antibodies+and+density+centrifugation.">Differences between larval and pupal hemocytes of the tobacco hornworm, Manduca sexta, determined by monoclonal antibodies and density centrifugation.</a> J. Insect Physiol. 50 (9), 805 (2004).</li><li>Beetz, S., Holthusen, T. K., Koolman, J., Trenczek, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlation+of+hemocyte+counts+with+different+developmental+parameters+during+the+last+larval+instar+of+the+tobacco+hornworm,+Manduca+sexta.">Correlation of hemocyte counts with different developmental parameters during the last larval instar of the tobacco hornworm, Manduca sexta.</a> Arch. Insect Biochem. Physiol. 67 (2), 63 (2008).</li><li>Eleftherianos, I., Joyce, S., ffrench-Constant, R. H., Clarke, D. J., Reynolds, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probing+the+tri-trophic+interaction+between+insects,+nematodes+and+Photorhabdus.">Probing the tri-trophic interaction between insects, nematodes and Photorhabdus.</a> Parasitology. 137 (11), 1695 (2010).</li><li>Qayum, A. A., Telang, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Protocol+for+Collecting+and+Staining+Hemocytes+from+the+Yellow+Fever+Mosquito+Aedes+aegypti.">A Protocol for Collecting and Staining Hemocytes from the Yellow Fever Mosquito Aedes aegypti.</a> J. Vis. Exp. (51), e2772 (2011).</li></ol>

سبق طرق لاستخراج hemocytes من الحشرات الهامة طبيا والحشرات نموذج lepidopteran ذكرت 9 و 14. يتم تكييفها طرق استخراج كرية دموية وفقا لأنواع الحشرات، والمرحلة التنموية للحشرة ومميزاته المورفولوجية. على سبيل المثال، يمكن عزل اليرقات من الدملمف ماندوكا يقوم بسهولة من قبل...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> كتالوج رقم </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> Micropipette مجتذب </td><td> سوتر الآلات </td><td> P-1000 </td><td></td></tr><tr><td> أنابيب زجاجية البورسليكات </td><td> سوتر الآلات </td><td> B100-50-10 </td><td> OD: 1.0، ID: 0.50 مم </td></tr><tr><td> غريس متوسطة </td><td> سيجما </td><td> G8142 </td><td></td></tr><tr><td> المصل البقري الجنين </td><td> الحرارية فيشر العلمية </td><td> SH3007102 </td><td> الحرارة المعطل </td></tr><tr><td> دومون # 5 ملقط </td><td> أدوات العلوم الجميلة </td><td> 11252-40 </td><td></td></tr><tr><td> عدادة الكريات نويباور </td><td> Hausser العلمية </td><td> 3200 </td><td></td></tr><tr><td> البلاستيك TUBIنانوغرام </td><td> ثلاثي التقنية </td><td> TT-3-32OD </td><td> OD: 3/32&#39;&#39;، ID: 1/32 &#39; </td></tr><tr><td> الزجاج حقنة طبية </td><td> فورتونا اوبتيما </td><td> D-97877 </td><td> حجم 50 مل </td></tr><tr><td> إبرة حادة نهاية </td><td> قطع صغيرة </td><td> NE-162PL-25 </td><td> 16 مقياس س 1 &quot;طول </td></tr></tbody></table>

a simple protocol for extracting hemocytes from wild caterpillars

hemocytes الحشرات (أي ما يعادل الثدييات خلايا الدم البيضاء) تلعب دورا هاما في العديد من العمليات الفسيولوجية في جميع أنحاء دورة حياة حشرة 1. في مراحل اليرقات من الحشرات تنتمي إلى أوامر من قشريات الجناح (الفراشات والعث) وذوات الجناحين (الذباب الحقيقي)، وتشكل hemocytes من الغدة الليمفاوية (جهاز متخصص المكونة للدم) أو الخلايا الجنينية ويمكن حملها حتى المرحلة الكبار. ويشارك في الهجرة hemocytes الجنينية الخلايا خلال تنظيم وتطوير الكيميائي أثناء الالتهاب. كما تشارك في موت الخلايا المبرمج الخلية وضرورية لمرحلة التطور الجنيني 2. Hemocytes توسط الذراع الخلوية للاستجابة المناعة الفطرية الحشرات التي تضم عدة وظائف، مثل انتشار الخلايا تجميع الخلية، وتشكيل عقيدات، البلعمة والتغليف من الغزاة الأجانب 3. كما أنها مسؤولة عن تدبير محدد الدفاعات الخلطية الحشرات خلال العدوى، مثل العلاقات العامةoduction من الببتيدات المضادة للميكروبات والجزيئات الأخرى المستجيب 4، 5. وقد تم أساسا مورفولوجيا كرية دموية وظيفة درس في نماذج الحشرات وراثية أو فسيولوجية، بما في ذلك ذبابة الفاكهة، ذبابة الفاكهة الدروسوفيلا 6، 7، الزاعجة المصرية البعوض وأنوفيليس غامبياي 8 و 9 وhornworm التبغ، ماندوكا سيكستا 10 و 11. ومع ذلك، توجد معلومات قليلة حول التنوع حاليا، والتصنيف، ومورفولوجيا وظيفة hemocytes في أنواع الحشرات غير نموذج، وخصوصا تلك التي تم جمعها من البرية ال 12. نحن هنا وصف بروتوكول بسيطة وفعالة لاستخراج hemocytes من اليسروع البرية. ونحن نستخدم ما قبل الأخيرة الطور Lithacodes المتورقة (أصفر الكتف فراشة سبيكة) (الشكل 1) وEuclea delphinii (البلوط شائك سبيكة) اليسروع (قشريات الجناح: Limacodidae) وتبين أن كميات كافية من الدملمف (الدم الحشرات)يمكن أن تكون معزولة وأرقام كرية دموية عد من اليرقات الفردية. ويمكن استخدام هذه الطريقة لدراسة كفاءة أنواع كرية دموية في هذه الأنواع وكذلك في غيرها من اليسروع lepidopteran ذات صلة تحصد من الميدان، أو يمكن أن الجمع بين المقايسات المناعية بسهولة مع مصممة للتحقيق وظيفة كرية دموية بعد العدوى الميكروبية أو الكائنات مع الطفيلي 13.

بروتوكول الموصوفة هنا يسمح للجمع وحدة تخزين الحد الأدنى من 10-20 ميكرولتر من الدملمف الحشرات من اليسروع الفردية. Hemocytes جمعها باستخدام هذه الطريقة خالية من التثاقل الخلية، وعيوب التصبغ، والحطام الأنسجة أو غيرها من الملوثات. بالتالي يمكن بسهولة ملاحظة hemocytes وعدها تحت ال...

Watch this Scientific Journal Video about A Simple Protocol for Extracting Hemocytes from Wild Caterpillars at JoVE.com

A Simple Protocol for Extracting Hemocytes from Wild Caterpillars

hemocytes الحشرات تنفيذ العديد من الوظائف الهامة، سواء المناعي وغير المناعة، في جميع مراحل التنمية الحشرات. معرفتنا الحالية للأنواع كرية دموية وظيفة يأتي من الدراسات على نماذج جينية الحشرات. هنا، نقدم طريقة لاستخراج، وقياس تصور hemocytes من اليسروع البرية.

A بروتوكول بسيط لاستخراج اليرقات من Hemocytes البرية

Insect hemocytes (equivalent to mammalian white blood cells) play an important role in several physiological processes throughout an insect's life cycle ...

Research

JoVE Journal

Biology

Extracting DNA from the Gut Microbes of the Termite (Zootermopsis Angusticollis) and Visualizing Gut Microbes

Extracting DNA from the Gut Microbes of the Termite Zootermopsis Angusticollis and Visualizing Gut Microbes

استخراج الحمض النووي من الميكروبات غوت من النمل الأبيض (Zootermopsis Angusticollis) وتصور الميكروبات غوت

Termites are among the few animals known to have the capacity to subsist solely by consuming wood.  The termite gut tract contains a dense and ...

Protocol for Mosquito Rearing (A. gambiae)

Protocol for Mosquito Rearing A. gambiae

بروتوكول للتربية البعوض (A. الغامبية)

This protocol describes mosquito rearing in the insectary. The insectary rooms are maintained at 28&deg;C and ~80% humidity, with a 12 hr. day/night ...

Pyrosequencing: A Simple Method for Accurate Genotyping

Pyrosequencing : طريقة بسيطة لالتنميط الجيني دقيقة

Pharmacogenetic research benefits first-hand from the abundance of information provided by the completion of the Human Genome Project. With such a ...

Protocol for Culturing Sympathetic Neurons from Rat Superior Cervical Ganglia (SCG)

Protocol for Culturing Sympathetic Neurons from Rat Superior Cervical Ganglia SCG

بروتوكول للالخلايا العصبية التثقيف تعاطفية من العقد الجرذ عنق الرحم فخمة (SCG)

The superior cervical ganglia (SCG) in rats are small, glossy, almond-shaped structures that contain sympathetic neurons.  These neurons provide ...

A Protocol for the Production of KLRG1 Tetramer

بروتوكول لإنتاج Tetramer KLRG1

Killer cell lectin-like receptor G1 (KLRG1) is a type II transmembrane glycoprotein inhibitory receptor belonging to the C type lectin-like superfamily. ...

A PCR-based Genotyping Method to Distinguish Between Wild-type and Ornamental Varieties of Imperata cylindrica

A PCR-based Genotyping Method to Distinguish Between Wild-type and Ornamental Varieties of Imperata cylindrica

والطريقة انماط PCR القائم على التمييز بين الأنواع البرية من نوع والزينة لل Imperata cylindrica</em

Wild-type I. cylindrica (cogongrass) is one of the top ten worst invasive plants in the world, negatively impacting agricultural and natural resources in ...

SIVQ-LCM Protocol for the ArcturusXT Instrument

بروتوكول SIVQ-LCM لالصك ArcturusXT

SIVQ-LCM is a new methodology that automates and streamlines the more traditional, user-dependent laser dissection process.&#160;It aims to create an ...

A Simple Bioassay for the Evaluation of Vascular Endothelial Growth Factors

والأحيائي بسيط لتقييم العوامل الأوعية الدموية غشائي النمو

The analysis of receptor tyrosine kinases and their interacting ligands involved in vascular biology is often challenging due to the constitutive ...

Filtration Isolation of Nucleic Acids:  A Simple and Rapid DNA Extraction Method

عزل الترشيح من الأحماض النووية: وبسيطة وسريعة استخراج الحمض النووي الطريقة

FINA, filtration isolation of nucleic acids, is a novel extraction method which utilizes vertical filtration via a separation membrane and absorbent pad ...

A Method for Extracting Pigments from Squid Doryteuthis pealeii

A Method for Extracting Pigments from Squid Doryteuthis pealeii

منهج في استخراج أصباغ من الحبار<em&gt; Doryteuthis pealeii</em

Cephalopods can undergo rapid and adaptive changes in dermal coloration for sensing, communication, defense, and reproduction purposes. These capabilities ...